李世杰，顏友良，林 霞，欒 峰

（南方醫(yī)科大學(xué)附屬中山市博愛醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 中山 528400）

當(dāng)子宮內(nèi)膜腺體及間質(zhì)侵入子宮肌層時(shí)，稱為子宮腺肌?。╝denomyosis）。大約70%患者有明顯的臨床癥狀，表現(xiàn)為繼發(fā)性進(jìn)行性加劇的痛經(jīng)、月經(jīng)量增多、經(jīng)期延長(zhǎng)，常繼發(fā)貧血。發(fā)病機(jī)制仍不十分清楚，局部血供與新生血管形成可能在子宮腺肌病的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用[1]。其中腎上腺髓質(zhì)素（ADM）在血管生成過(guò)程中有重要的促進(jìn)作用，可增加血管的通透性和血管生成[2]。本研究采用免疫組化方法檢測(cè)ADM在子宮腺肌病病灶、在位內(nèi)膜及正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)情況,旨在探討血管生成在子宮腺肌病發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料和方法

1.1 研究對(duì)象

1.1.1 腺肌病組

選擇2008年1月至2011年9月在南方醫(yī)科大學(xué)附屬中山市博愛醫(yī)院因子宮腺肌病行全子宮切除術(shù)，術(shù)后病理證實(shí)為子宮腺肌病的患者40例，取其子宮內(nèi)膜及部分腺肌病病灶，其中增生期樣本20例，分泌期樣本20例?；颊咂骄挲g（39.13±4.21）歲。

1.1.2 對(duì)照組

選擇2008年1月至2011年9月于南方醫(yī)科大學(xué)附屬中山市博愛醫(yī)院因?qū)m頸癌前病變而行全子宮切除術(shù)的患者子宮內(nèi)膜，其中增生期和分泌期各20例，患者術(shù)后病理檢查已排除子宮肌層及子宮內(nèi)膜病變。平均年齡（39.61±3.75）歲。

腺肌病組及對(duì)照組均為非絕經(jīng)婦女，于取內(nèi)膜樣本前3個(gè)月內(nèi)未接受過(guò)激素類藥物治療。各組患者的年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1.2 研究方法

1）免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)方法：ADM兔抗人多克隆抗體由武漢博士德生物工程有限公司提供。光鏡下觀察子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為ADM、免疫組化反應(yīng)陽(yáng)性，無(wú)棕黃色染色為陰性。使用圖像分析系統(tǒng)分析檢測(cè)結(jié)果：每張免疫組化染色切片隨機(jī)選取3個(gè)視野，測(cè)試區(qū)域A的灰度級(jí)GA和面積（m+n），陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物a的灰度級(jí)Gа和面積n。

2）結(jié)果判定：采用陽(yáng)性單位 PU值[3]作為 ADM的表達(dá)強(qiáng)度，結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。計(jì)算公式：PU=100×︳Gа-GA︳/〔（1-AAа）·GMAX〕

式中 AAа＝n/（m+n），GMAX為測(cè)試儀器最大的灰度級(jí)256。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

圖像分析所得PU值的比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

光鏡下觀察免疫組化結(jié)果：在子宮腺肌病病灶內(nèi)的腺上皮細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞胞漿出現(xiàn)ADM的陽(yáng)性染色顆粒（封四圖1-4）。經(jīng)圖像分析結(jié)果見表1。

表1 對(duì)照組子宮內(nèi)膜與腺肌病組在位內(nèi)膜及病灶A(yù)DM的表達(dá) ±s，PU值

表1 對(duì)照組子宮內(nèi)膜與腺肌病組在位內(nèi)膜及病灶A(yù)DM的表達(dá) ±s，PU值

△P<0.05與同組增生期比較，*P＞0.05與對(duì)照組比較；★P<0.01與同組在位內(nèi)膜及對(duì)照組內(nèi)膜比較。

組別分泌期（n=20） P n 增生期（n=20）對(duì)照組 40子宮內(nèi)膜4.59±1.46 7.28±1.49△腺肌病組在位內(nèi)膜 20 4.87±1.58* 7.91±0.97* P<0.05腺肌病病灶10.81±1.43★ P＞0.05 2011.51±2.03★

3 討 論

3.1 子宮腺肌病與子宮血管的關(guān)系

子宮腺肌病的主要臨床表現(xiàn)為痛經(jīng)、月經(jīng)過(guò)多和子宮增大等。腺肌病患者表層子宮內(nèi)膜血管增生活躍。采用計(jì)算機(jī)形態(tài)學(xué)分析子宮內(nèi)膜基底層血管，結(jié)果顯示腺肌病患者的血管數(shù)量、面積于增殖期及分泌期均較對(duì)照組顯著增加[4]。提示血管生成的改變可能為子宮腺肌病的發(fā)病機(jī)制之一。

3.2 ADM——一種新的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子

腎上腺髓質(zhì)素（ADM）是首先從人嗜鉻細(xì)胞瘤組織中分離得到的一種血管活性多肽。ADM通過(guò)cAMP依賴性蛋白激酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)和細(xì)胞內(nèi)鈣離子遷移，抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡，是一種新的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，可促血管生成[5]。ADM分布廣泛,以自分泌、旁分泌和胞內(nèi)分泌的方式發(fā)揮其作用[6]。ADM免疫組化方法研究證實(shí)，在人類的子宮肌層和內(nèi)膜中均分布有ADM及其特異性結(jié)合位點(diǎn)。人類子宮上分布著ADM及與其特異結(jié)合的位點(diǎn)。體外和體內(nèi)的人類子宮內(nèi)膜上均有ADM的免疫反應(yīng)物質(zhì)存在,CRLR和RAMR共同表達(dá)在相同的細(xì)胞上,ADM mRNA也均勻地出現(xiàn)在子宮各種類型細(xì)胞上,ADM可誘導(dǎo)內(nèi)膜細(xì)胞cAMP的生成[7]。隨著對(duì)ADM結(jié)構(gòu)及作用的研究不斷深入,越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),ADM在人類生理和病理情況下均具有重要作用。

3.3 ADM在子宮內(nèi)膜及子宮腺肌病的表達(dá)

子宮內(nèi)膜血管生成發(fā)生在月經(jīng)周期的不同階段。子宮內(nèi)膜的血管形成受各種細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)。其中ADM在血管生成過(guò)程中有重要的促進(jìn)作用,可增加血管的通透性和血管生成。以往研究發(fā)現(xiàn)，在子宮內(nèi)膜ADM表達(dá)增強(qiáng)，則子宮內(nèi)膜血管密度增加[8],說(shuō)明ADM是子宮內(nèi)膜血管生成的主要因素。在生殖系統(tǒng),研究發(fā)現(xiàn)ADM在正常子宮內(nèi)膜的增殖晚期開始出現(xiàn),分泌期逐漸加強(qiáng)。本研究結(jié)果顯示，ADM在正常對(duì)照組內(nèi)膜及腺肌病組在位內(nèi)膜的表達(dá)，分泌期較增生期明顯增強(qiáng)，與Maybin等[9]的研究的結(jié)果一致，說(shuō)明子宮內(nèi)膜ADM的表達(dá)可能受到卵巢激素的調(diào)節(jié),在黃體期孕酮可以促進(jìn)ADM的產(chǎn)生，但是卵巢激素如何影響子宮內(nèi)膜ADM的表達(dá)的具體機(jī)制至今尚未明確,有待進(jìn)一步研究。有研究表明：子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜ADM表達(dá)高于在位內(nèi)膜,與本研究結(jié)果相似，可能是異位的內(nèi)膜在局部?jī)?nèi)環(huán)境的影響下,生物學(xué)特性發(fā)生改變,使其更有利于生存、生長(zhǎng)。但ADM在子宮腺肌病病灶內(nèi)的表達(dá)，目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)報(bào)道。本研究希望通過(guò)研究ADM在子宮腺肌病病灶的表達(dá)，揭示子宮腺肌病的臨床表現(xiàn)，是否因ADM在子宮腺肌病病灶的表達(dá)增強(qiáng)，導(dǎo)致病灶內(nèi)血管生成增加，而引起子宮腺肌病患者子宮體積增大、痛經(jīng)、月經(jīng)量增多、經(jīng)期延長(zhǎng)。

3.4 ADM與子宮腺肌病臨床癥狀的關(guān)系

本研究顯示：子宮腺肌病病灶內(nèi)ADM的表達(dá)較在位子宮內(nèi)膜顯著增強(qiáng)，并且不受月經(jīng)周期的影響。腺肌病子宮肌層的血管數(shù)量和面積與子宮大小呈正相關(guān)，子宮腺肌病病灶內(nèi)大量ADM的表達(dá)，可能增加血管的通透性和血管生成，增加病灶內(nèi)血管密度，血管擴(kuò)張，使病灶內(nèi)血流豐富，充血明顯，可能是引起子宮腺肌病患者子宮體積增大、痛經(jīng)、月經(jīng)量增多、經(jīng)期延長(zhǎng)的原因之一。

希望通過(guò)進(jìn)一步的研究，來(lái)加以證實(shí)ADM與子宮腺肌病的發(fā)病及臨床癥狀的關(guān)系。

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