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        用等效線(xiàn)評(píng)判稻田“桶混”農(nóng)藥聯(lián)合作用方式的研究

        2013-08-23 03:49:26顧中言許小龍徐德進(jìn)徐廣春
        關(guān)鍵詞:混劑單劑混用

        顧中言, 許小龍, 徐德進(jìn), 徐廣春

        (江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所,江蘇 南京 210014)

        水稻是中國(guó)最重要的糧食作物,水稻一生要遭受多種病蟲(chóng)害的為害,農(nóng)藥是防治病蟲(chóng)害最方便和最有效的措施而得到廣泛的應(yīng)用,田間不同農(nóng)藥的混合使用是中國(guó)農(nóng)藥應(yīng)用中非常普遍的現(xiàn)象。農(nóng)藥混用有增效、相加和拮抗3種完全不同的作用方式,如圖1所示,只有增效作用的混用能夠減少農(nóng)藥用量,而拮抗作用的農(nóng)藥混用只會(huì)增加農(nóng)藥用量?!掇r(nóng)藥室內(nèi)生物測(cè)定試驗(yàn)準(zhǔn)則》規(guī)定:用孫云沛法判斷殺蟲(chóng)劑混用的聯(lián)合作用,用Wadley或?qū)O云沛法判斷殺菌劑混用的聯(lián)合作用[1-2],這在規(guī)范中國(guó)農(nóng)藥混配制劑的生產(chǎn)和應(yīng)用中起到了非常重要的作用。這些方法需要室內(nèi)飼養(yǎng)或保存的、遺傳性狀一致的供試?yán)ハx(chóng)或病原體以及嚴(yán)格控制的試驗(yàn)條件,因此該方法只適合在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行測(cè)定?;鶎又脖2块T(mén)需要根據(jù)本地病蟲(chóng)發(fā)生種類(lèi)、抗藥性及農(nóng)藥使用水平提出用于田間“桶混”的農(nóng)藥配方,因缺乏田間條件下判斷農(nóng)藥混用聯(lián)合作用的方法,這些配方基本是經(jīng)驗(yàn)配方,也有隨意混用、甚至亂配亂混的現(xiàn)象,并且絕大多數(shù)是根據(jù)農(nóng)藥標(biāo)簽上的藥量進(jìn)行疊加式混用,農(nóng)藥用量甚至超過(guò)了有拮抗作用的混用劑量(圖1),造成農(nóng)藥的超量使用。

        千坂英雄[3]提出用等效線(xiàn)法判斷除草劑混用的聯(lián)合作用,利用除草劑不同劑量產(chǎn)生的生物效果作劑量反應(yīng)曲線(xiàn),求出單劑和混劑的等效劑量并作等效線(xiàn),從而確定混劑的聯(lián)合作用方式。本文以此為基礎(chǔ),尋求田間條件下稻田“桶混”農(nóng)藥聯(lián)合作用方式的途徑。

        圖1 混用農(nóng)藥聯(lián)合作用效果示意圖Fig.1 Schematic diagram of binary mixture of pesticides

        1 材料與方法

        1.1 供試材料

        1.1.1 供試藥劑 92%阿維菌素、90%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽(甲維鹽),河北威遠(yuǎn)生物化工股份有限公司產(chǎn)品;97%毒死蜱、90%丙溴磷,江蘇寶靈化工股份有限公司產(chǎn)品;95%吡蟲(chóng)啉、95%噻嗪酮、95%混滅威、90%混滅威,江蘇常隆化工有限公司產(chǎn)品。

        1.1.2 分析純?nèi)軇?甲苯、二甲苯,上?;瘜W(xué)試劑有限公司產(chǎn)品;二甲基甲酰胺,江蘇華康科技公司化學(xué)試劑廠(chǎng)產(chǎn)品;甲醇,汕頭市西隴化工廠(chǎng)產(chǎn)品;95%乙醇,上海殷洋生物科技有限公司產(chǎn)品。

        1.1.3 表面活性劑 TX-10、0203-B、0204-C、0201-B、0206-B、2201、0204、0240、0219,南京太化化工有限公司產(chǎn)品。吐溫60、吐溫80,北京益利精細(xì)化學(xué)品有限公司產(chǎn)品。

        1.2 常規(guī)儀器

        ED-H200電子天平(稱(chēng)重范圍0.001 g~200.000 g),容量瓶,三角瓶,毛筆,量筒,培養(yǎng)皿,移液管,3 cm×20 cm試管,浸蟲(chóng)籠,鐘表,吸蟲(chóng)器,鑷子,濾紙。

        1.3 試驗(yàn)方法

        1.3.1 試驗(yàn)藥劑配制 使用方法1.1.2和1.1.3中的溶劑和表面活性劑,按企業(yè)提供的配方或文獻(xiàn)[1-2]標(biāo)準(zhǔn),將供試農(nóng)藥原藥配制成乳油(其中噻嗪酮配制成可濕性粉劑)。試驗(yàn)前,采用多步稀釋法將乳油或可濕性粉劑先配制單劑母液(單位為mg/L),再由單劑母液按農(nóng)藥有效成分質(zhì)量比配制混劑母液。

        1.3.2 室內(nèi)測(cè)定 褐飛虱(Nilaparvata lugens St?l)采用稻莖浸漬法[4]進(jìn)行試驗(yàn)。從江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水稻試驗(yàn)田內(nèi)采集褐飛虱成、若蟲(chóng),室內(nèi)用水稻苗飼養(yǎng)。飼養(yǎng)條件:溫度(28±2)℃,相對(duì)濕度70%以上,14 h光照。水稻種子催芽后播于20 cm×20 cm×30 cm的塑料箱內(nèi),待稻苗生長(zhǎng)至10 cm以上時(shí),飼養(yǎng)褐飛虱若蟲(chóng)至成蟲(chóng)。將盆栽、無(wú)稻飛虱蟲(chóng)卵的水稻植株放入30 cm×30 cm×50 cm的養(yǎng)蟲(chóng)網(wǎng)箱,接抱卵雌成蟲(chóng)產(chǎn)卵2~3 d,取出稻苗,再換無(wú)蟲(chóng)卵的水稻植株于養(yǎng)蟲(chóng)箱內(nèi)。待從養(yǎng)蟲(chóng)箱內(nèi)取出的稻株上的褐飛虱卵孵化后,每次取1日齡的褐飛虱若蟲(chóng)進(jìn)行室內(nèi)試驗(yàn)。

        將30日左右秧齡無(wú)稻飛虱蟲(chóng)卵的稻苗剪成18 cm左右的稻稈,根部留少許稻根,洗凈晾干,在藥液中浸漬30 s,取出,稍晾干后放入3 cm×20 cm的試管中,管底有少許水,然后接稻飛虱若蟲(chóng),黑布封口。試驗(yàn)結(jié)束后轉(zhuǎn)移至養(yǎng)蟲(chóng)室內(nèi)飼養(yǎng)。設(shè)不含藥劑的相應(yīng)有機(jī)溶劑和表面活性劑的處理作對(duì)照。按藥劑對(duì)供試害蟲(chóng)的作用快慢確定藥劑處理后的檢查時(shí)間。

        用Abbott公式校正各處理死亡率。用SAS統(tǒng)計(jì)分析系統(tǒng)求回歸方程,計(jì)算LC50和95%置信限。用Sun等方法計(jì)算共毒系數(shù)[5]。按比例分解混劑的LC50為單劑濃度,代入單劑的回歸方程,求出單劑濃度對(duì)應(yīng)的死亡率,相加為混劑的期望死亡率,用Mansour等方法計(jì)算共毒因子[6]。共毒系數(shù)大于100,共毒因子大于20,該混配組合為增效作用;共毒系數(shù)大于100,同時(shí)共毒因子小于20為相加作用;共毒系數(shù)小于100,同時(shí)共毒因子小于20為拮抗作用[7]。

        1.3.3 田間試驗(yàn)

        1.3.3.1 田間試驗(yàn)方法 單劑和混劑均設(shè)3個(gè)濃度處理,設(shè)清水處理為對(duì)照,每處理4次重復(fù)。小區(qū)面積 33.3m2,隨機(jī)區(qū)組排列。使用 AGROLEX SPRAYER HD-400利農(nóng)噴霧器進(jìn)行噴藥,空心圓錐霧噴頭,工作壓力3~4 Pa,噴液量為750 kg/hm2。

        水稻縱卷葉螟(Cnaphalocrocismedinalis Guenée)田間試驗(yàn)參照《田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則(一)殺蟲(chóng)劑防治稻縱卷葉螟》的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[8]進(jìn)行。水稻品種為南粳44,試驗(yàn)時(shí)水稻處于分蘗末期,長(zhǎng)勢(shì)良好。試驗(yàn)時(shí)正值2代縱卷葉螟的卵孵高峰期,田間蟲(chóng)卵量為100穴500~700頭(粒)。藥后對(duì)照出現(xiàn)明顯為害狀時(shí)調(diào)查,調(diào)查采用平行跳躍法,每小區(qū)調(diào)查5點(diǎn),每點(diǎn)調(diào)查5穴水稻的卷葉數(shù)和總?cè)~數(shù)。

        稻飛虱(Nilaparvata lugens St?l、Sogatella furcifera Horváth和 Laodelphax striatellus Fallen的混合種群)田間試驗(yàn)參照《田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則(一)殺蟲(chóng)劑防治稻飛虱》的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[9]進(jìn)行。水稻品種為南粳44,試驗(yàn)時(shí)水稻正處于孕穗期,長(zhǎng)勢(shì)良好。試驗(yàn)時(shí)田間稻飛虱為白背飛虱、灰飛虱和褐飛虱混合種群。施藥時(shí)田間保持3~5 cm水層5 d。采用平行跳躍法調(diào)查藥前基數(shù)(用藥前稻飛虱的蟲(chóng)量)和藥后殘留蟲(chóng)數(shù),每小區(qū)調(diào)查20個(gè)點(diǎn),每點(diǎn)2穴水稻,將白瓷盤(pán)緊靠水稻基部并拍打水稻植株,使稻飛虱落于盤(pán)內(nèi),統(tǒng)計(jì)稻飛虱的總量。

        1.3.3.2 田間防效計(jì)算方法 稻飛虱蟲(chóng)口減退率=(藥前基數(shù)-藥后活蟲(chóng)數(shù))/藥前基數(shù)×100%。(1)稻飛虱防治效果=(處理區(qū)蟲(chóng)口減退率-對(duì)照區(qū)蟲(chóng)口減退率)/(100-對(duì)照區(qū)蟲(chóng)口減退率)×100%。 (2)縱卷葉螟卷葉率 =卷葉數(shù)/調(diào)查水稻總?cè)~數(shù) ×100%。 (3)縱卷葉螟保葉效果=(對(duì)照區(qū)卷葉率-處理區(qū)卷葉率)/對(duì)照區(qū)卷葉率×100%。 (4)

        1.3.3.3 田間農(nóng)藥桶混互作效應(yīng)的評(píng)判方法 以防治效果作為計(jì)量農(nóng)藥生物效果的反應(yīng)類(lèi)型,參照除草劑混配聯(lián)合作用測(cè)定中的等效線(xiàn)法[3,10]。根據(jù)田間調(diào)查結(jié)果,分別作單劑和混劑的劑量反應(yīng)曲線(xiàn),從反應(yīng)曲線(xiàn)獲得具有相同防治效果的等效劑量,作等效線(xiàn)圖。以直角坐標(biāo)的橫軸和縱軸代表2種農(nóng)藥的有效劑量,在橫軸和縱軸上標(biāo)出獲得相同防治效果的等效劑量位點(diǎn),連接兩點(diǎn)間的直線(xiàn)即為2種農(nóng)藥混用的等效線(xiàn)。在直角坐標(biāo)中標(biāo)出混劑獲得相同防治效果的等效劑量位點(diǎn),該位點(diǎn)在等效線(xiàn)下方,則為增效作用,在等效線(xiàn)上方,為拮抗作用,接近于等效線(xiàn),為相加作用。

        2 結(jié)果

        2.1 用等效線(xiàn)法判斷田間農(nóng)藥混用的聯(lián)合作用效果

        甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、毒死蜱和丙溴磷單劑及混劑對(duì)水稻縱卷葉螟的防治效果列于表1。根據(jù)表1的結(jié)果,作農(nóng)藥單劑及混劑防治水稻縱卷葉螟的劑量反應(yīng)曲線(xiàn)(圖2)。由圖2找出各藥劑獲得防治效果為85%的等效劑量列于表2,以直角坐標(biāo)的縱軸代表甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽的有效劑量,橫軸分別代表毒死蜱和丙溴磷有效劑量,作防治效果為85%的等效線(xiàn)于圖3,同時(shí)在圖3中標(biāo)出混劑獲得85%防治效果時(shí)相應(yīng)單劑的坐標(biāo)點(diǎn)。圖3顯示,甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽-毒死蜱組合獲得85%防治效果的等效劑量坐標(biāo)點(diǎn)位于等效線(xiàn)的下方,但接近等效線(xiàn);甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽-丙溴磷組合獲得85%防治效果的等效劑量坐標(biāo)點(diǎn)位于等效線(xiàn)的上方,也接近等效線(xiàn)。因此這2個(gè)配方組合對(duì)水稻縱卷葉螟的聯(lián)合作用方式為相加作用。

        表1 藥劑對(duì)水稻縱卷葉螟的防治效果Table 1 Efficacy of pesticides against Cnaphalocrocis medinalis Guenée

        圖2 殺蟲(chóng)劑單劑和混劑田間防治水稻縱卷葉螟的劑量反應(yīng)曲線(xiàn)Fig.2 The dose-response curves of single pesticides and their mixture controlling Cnaphalocrocis medinalis Guenée in paddy field

        表2 防治縱卷葉螟效果為85%的殺蟲(chóng)劑有效劑量Table 2 Pesticides effective dose against Cnaphalocrocis medinalis Guenée at the control effect of 85%

        圖3 防治縱卷葉螟效果為85%的等效線(xiàn)Fig.3 Isobole of pesticides on Cnaphalocrocis medinalis Guenée to yield 85%mortality

        2.2 田間與室內(nèi)農(nóng)藥混用聯(lián)合作用方式的比較

        幾種農(nóng)藥混用對(duì)褐飛虱聯(lián)合作用的室內(nèi)測(cè)定結(jié)果列于表3。從表3可以看到,吡蟲(chóng)啉-毒死蜱、噻嗪酮-毒死蜱和噻蟲(chóng)嗪-混滅威3個(gè)組合對(duì)褐飛虱的共毒系數(shù)大于200,共毒因子大于20,有顯著的增效作用,噻嗪酮-異丙威組合的共毒系數(shù)大于150,但共毒因子小于20,為相加作用。

        表3 殺蟲(chóng)劑混用對(duì)褐飛虱聯(lián)合作用的室內(nèi)測(cè)定結(jié)果Table 3 Joint action of pesticide mixtures against Nilaparvata lugens St?l in laboratory

        圖4是由吡蟲(chóng)啉-毒死蜱、噻嗪酮-毒死蜱和噻蟲(chóng)嗪-混滅威3個(gè)組合的單劑及混劑田間防治稻飛虱的劑量反應(yīng)曲線(xiàn),由圖4找出防治效果為80%時(shí)的藥劑有效量列于表4,由表4作圖5。圖5顯示,吡蟲(chóng)啉-毒死蜱和噻嗪酮-毒死蜱2個(gè)組合混劑獲得80%防治效果的等效劑量位點(diǎn)明顯位于等效線(xiàn)的下方,為增效作用,與室內(nèi)結(jié)果一致。噻蟲(chóng)嗪-混滅威組合獲得80%防治效果的等效劑量位點(diǎn)位于等效線(xiàn)的下方,接近等效線(xiàn),介于相加作用或略有增效作用之間。

        圖4 殺蟲(chóng)劑單劑和混劑田間防治稻飛虱的劑量反應(yīng)曲線(xiàn)Fig.4 The dose-response curves of single pesticides and their mixtures controlling rice planthopper in paddy field

        表4 防治稻飛虱效果為80%的殺蟲(chóng)劑有效劑量Table 4 Pesticides effective dose against rice planthopper to yield 80%mortility

        圖5 防治稻飛虱效果為80%的等效線(xiàn)Fig.5 Isobole of pesticides on rice planthopper to yield 80%mortality

        圖6是噻嗪酮-異丙威組合的劑量反應(yīng)曲線(xiàn),由圖6找出防治效果為82%的藥劑有效量,作圖7。用藥后5 d噻嗪酮-異丙威組合,獲得82%防治效果的等效劑量位點(diǎn)明顯位于等效線(xiàn)的上方,表明該組合對(duì)稻飛虱為拮抗作用;用藥后10的結(jié)果同樣位于等效線(xiàn)的上方,表明該組合對(duì)稻飛虱為拮抗作用(圖7)。

        圖6 噻嗪酮-異丙威(1∶4)田間防治稻飛虱的劑量反應(yīng)曲線(xiàn)Fig.6 The dose-response curves of buprofezin,isoprocarb and their binary mixture(1∶4)controlling rice planthopper in paddy field

        2.3 田間混用農(nóng)藥聯(lián)合作用的連續(xù)判斷

        圖8是吡蟲(chóng)啉-噻嗪酮組合施藥后5 d、10 d和15 d防治稻飛虱的劑量反應(yīng)曲線(xiàn)。由劑量反應(yīng)曲線(xiàn)獲得的防治效果為80%的等效劑量作圖9。由圖9可以看到,吡蟲(chóng)啉-噻嗪酮組合防治稻飛虱混合種群,在藥后5 d、10 d和15 d均有增效作用。

        3 討論

        不同農(nóng)藥劑量控制有害生物的效果不同。在直角坐標(biāo)內(nèi),農(nóng)藥劑量與累積生物效果之間的關(guān)系為不對(duì)稱(chēng)的S型曲線(xiàn),而農(nóng)藥劑量的對(duì)數(shù)與累積生物效果的對(duì)應(yīng)關(guān)系為對(duì)稱(chēng)的S型曲線(xiàn),即劑量反應(yīng)曲線(xiàn)。害蟲(chóng)死亡率、病菌孢子萌發(fā)抑制率、病菌生長(zhǎng)抑制率、雜草生長(zhǎng)抑制率、防治效果等凡是能定量、計(jì)數(shù)或計(jì)量的反應(yīng)都能作為累積生物效果的反應(yīng)類(lèi)型。

        圖7 噻嗪酮-異丙威(1∶4)田間防治稻飛虱效果為82%的等效線(xiàn)Fig.7 Isobole for mixing values of buprofezin-isoprocarb(1∶4)on rice planthopper to yield 82%mortality

        圖8 吡蟲(chóng)啉-噻嗪酮混用對(duì)稻飛虱的劑量反應(yīng)曲線(xiàn)Fig.8 The dose-response curve of imidacloprid-buprofezin controlling rice planthopper in paddy field

        評(píng)價(jià)除草劑混劑聯(lián)合作用的等效線(xiàn)法,可用于確定不同配比混劑的增效與否以及最佳配比[3,10]。如千坂英雄混用除草 劑 A 和 B[3],先設(shè)置單劑劑量梯度,混合后處理防治對(duì)象,在規(guī)定時(shí)間內(nèi)調(diào)查生物效果,并制成反映劑量-生物效果的表(表5)與劑量反應(yīng)曲線(xiàn)圖(圖10)。由劑量反應(yīng)曲線(xiàn)推測(cè)出混用劑量的比例(表6)并作等效線(xiàn)(圖11)。由圖11可以明確藥劑A和B不同比例混用后是否增效并從中選出理想的配比。

        這是在眾多配比中選擇最佳配比的方法,處理多,工作量大,不適合田間試驗(yàn)。但如果有了目標(biāo)配比,只證實(shí)田間使用時(shí)是否合理,則可簡(jiǎn)化試驗(yàn)處理。如A和B藥劑1∶10混用,那么只需1∶10混用時(shí)的劑量-生物效果的結(jié)果作圖即可,如圖12。推算生長(zhǎng)抑制率為90%的等效劑量并標(biāo)注在畫(huà)有等效線(xiàn)的坐標(biāo)內(nèi),如圖12中的A點(diǎn)。簡(jiǎn)化后的試驗(yàn)方法能用于田間試驗(yàn)。

        圖9 吡蟲(chóng)啉-噻嗪酮組合防治稻飛虱效果為80%的等效線(xiàn)Fig.9 Isobole of the mixture of buprofezin-isoprocarb on rice planthopper to yield 80%mortality

        表5 藥劑對(duì)雜草的生長(zhǎng)抑制率(%)Table 5 Growth reduction rate of weeds by herbicides(%)

        至今為止,都是用室內(nèi)試驗(yàn)來(lái)測(cè)定農(nóng)藥混用的聯(lián)合作用效果,嚴(yán)格控制的試驗(yàn)條件,標(biāo)準(zhǔn)的試驗(yàn)材料和試驗(yàn)方法,試驗(yàn)結(jié)果能正解反映混用農(nóng)藥對(duì)特定生育階段的供試病蟲(chóng)的聯(lián)合作用效果。然而不是所有的稻田害蟲(chóng)都能在室內(nèi)飼養(yǎng),另外,田間多種病蟲(chóng)同時(shí)發(fā)生,但室內(nèi)對(duì)不同病蟲(chóng)的測(cè)定方法不同,測(cè)定結(jié)果難以進(jìn)行橫向比較;田間稻飛虱為混合種群且蟲(chóng)齡差異大,而室內(nèi)測(cè)定的是統(tǒng)一蟲(chóng)齡的單一蟲(chóng)種,徐德進(jìn)等[11]試驗(yàn)結(jié)果表明,對(duì)褐飛虱有增效作用的混用組合對(duì)灰飛虱甚至為拮抗作用,所以室內(nèi)測(cè)定結(jié)果往往難以準(zhǔn)確反映田間實(shí)際防治的需要。

        圖10 藥劑混用對(duì)稻飛虱的劑量反應(yīng)曲線(xiàn)Fig.10 The dose-response curves of herbicides mixture on rice planthopper in paddy field

        表6 生長(zhǎng)抑制率為90%的除草劑用量Table 6 Dosage of herbicides to yield 90%growth reduction

        圖11 除草劑防治雜草的生長(zhǎng)抑制率為90%的等效線(xiàn)Fig.11 Isobole of herbicides on weeds to yield 90%growth reduction

        圖12 除草濟(jì)混劑防治雜草的劑量反應(yīng)曲線(xiàn)Fig.12 The dose-response curves of herbicides mixture controlling weeds

        田間試驗(yàn)是用相同的施藥方式處理處于防治適期的有害生物,并且可以一次施藥兼治多種有害生物,統(tǒng)一用防治效果作為計(jì)量農(nóng)藥生物效果的反應(yīng)類(lèi)型,從而可以一次施藥分別評(píng)估混用農(nóng)藥對(duì)不同防治對(duì)象的聯(lián)合作用方式,或用顧中言等[12]方法,評(píng)估混用農(nóng)藥對(duì)不同防治對(duì)象的綜合毒力和聯(lián)合作用效果。田間試驗(yàn)適用于基層植保部門(mén)根據(jù)當(dāng)時(shí)當(dāng)?shù)氐咎锇l(fā)生的病蟲(chóng)種類(lèi)進(jìn)行測(cè)定,有利于在田間防治時(shí)進(jìn)行有的放矢的農(nóng)藥混用,減少農(nóng)藥超量使用的現(xiàn)象。

        [1]NY/T 1154.7——2006 農(nóng)藥室內(nèi)生物測(cè)定試驗(yàn)準(zhǔn)則[S].

        [2]NY/T 1156.6——2006 農(nóng)藥室內(nèi)生物測(cè)定試驗(yàn)準(zhǔn)則[S].

        [3]千坂英雄.除草劑混合效果判別法[J].雜草科學(xué),1989(4):35-37.

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