蔡靜波
江蘇省省級(jí)機(jī)關(guān)醫(yī)院心內(nèi)科,江蘇南京 210024
原發(fā)性高血壓(Essential Hypertension,EH)是遺傳與環(huán)境因素共同作用所致的多基因遺傳病,是冠心病、腦卒中等心腦血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,嚴(yán)重影響人類健康。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,高血壓相關(guān)基因研究及基于基因型的個(gè)體化降壓治療成為研究熱點(diǎn)。在血壓的調(diào)節(jié)和高血壓的發(fā)生發(fā)展中,腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Renin-Angiotensin System,RAS)起著極重要的,有時(shí)是關(guān)鍵性的作用。目前高血壓病的基因治療也集中在針對(duì)RAS各個(gè)成分的基因上,該系統(tǒng)每個(gè)成分都被高度懷疑為高血壓相關(guān)基因[1]。
血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(Angiotensin-Converting Enzyme,ACE)基因是RAS基因中主要的基因之一,位于染色體17q23區(qū),約21 kb,含26個(gè)外顯子和25個(gè)內(nèi)含子。ACE基因的內(nèi)含子16上有一個(gè)287bp的插入(Insertion,I)和缺失(Deletion,D)的多態(tài)性。因此ACE基因分為II、DD和ID 3種基因型[2]。該研究旨在探明ACE基因的多態(tài)性在老年原發(fā)性高血壓患者中的分布情況,并探討此多態(tài)性分布與血管緊張素II受體拮抗劑厄貝沙坦降壓療效的關(guān)系。以2011年1月—2011年12月該院門診就診的初發(fā)的1級(jí)原發(fā)性高血壓患者30例為研究對(duì)象,現(xiàn)報(bào)道如下。
選取在該院門診就診的初發(fā)的1級(jí)原發(fā)性高血壓患者 (年齡≥60歲)30例,其中男性16例,女性14例,年齡63~84歲,平均年齡(73.2±5.8)歲。入選患者均符合2005年中國高血壓防治指南的診斷標(biāo)準(zhǔn),即坐位收縮壓≥140 mmHg和(或)舒張壓≥90mmHg,并排除繼發(fā)性高血壓、肝腎功能異常及糖尿病。所有患者均填寫知情同意書。
1.2.1 藥物干預(yù)和血壓測定 入選患者均服用厄貝沙坦 (賽諾菲公司)單藥治療,150 mg/d,每4周由專人采用水銀柱袖帶血壓計(jì)測量坐位右上臂血壓,每次測量3次并計(jì)算均值,測量時(shí)間為上午 8∶00—10∶00,共觀察 8 周。
1.2.2 基因組DNA的提取 肝素抗凝外周血4 mL,應(yīng)用紅細(xì)胞裂解液提取白細(xì)胞,按照基因組DNA提取試劑盒(離心柱型)提供的實(shí)驗(yàn)步驟提取DNA。紫外分光光度計(jì)(Pharmacia Biotech)測定DNA濃度,并標(biāo)化樣品DNA濃度值至20 ng/μL。
1.2.3 ACE基因多態(tài)性測定 采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChain Reaction,PCR)法檢測ACE基因的多態(tài)性。引物序列:Forward:5'-GCCCTGCAGGTGTCTGCAGCATGT-3',Reverse:5'-GGATGGCTCTCCCCGCCTTGTCTC-3'(江陰百橋國際生物科技孵化園有限公司設(shè)計(jì)、合成)。PCR反應(yīng)體積 10 μL,包括:10×buffer(含 Mg2+)1 μL, 10 μmol/L 上、下游引物各 0.2 μL,10 mmol/L 三磷酸脫氧核苷(deoxy-ribonucleoside triphosphate,dNTP)0.8 μl,基因組 DNA20 ng,20 U/L Taq DNA 聚合酶 0.05 μL,消毒雙蒸水 6.75 μl。應(yīng)用-PCR儀進(jìn)行PCR擴(kuò)增,反應(yīng)條件為:94℃預(yù)變性3 min,94 ℃變性 30 s,56.5℃退火 30 s,72℃延伸 60 s,共 32個(gè)循環(huán),最后72℃延伸10 min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在1.5%瓊脂糖凝膠上電泳,進(jìn)行多態(tài)性分析。
應(yīng)用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料用百分?jǐn)?shù)表示,計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗(yàn)。
PCR產(chǎn)物分為2種片段:597 bp的插入片段(I)和319 bp的缺失片段(D)。 ACE 基因分為 3種基因型:II型(597 bp);DD 型(319 bp);ID 型(597 bp 和 319 bp 的雜合子)(見圖 1)。
入選患者II基因型有14例,占總數(shù)的46.7%,其中男性6例,女性8例;ID基因型有13例,占43.3%,其中男性9例,女性4例;DD基因型有3例,占10%,其中男性1例,女性2例。
圖1 老年EH患者ACE基因多態(tài)性分析M:DNA Marker, 自上而下依次為 500 bp,400 bp,300 bp,200 bp 和100 bp。
1~5 為其中 5例患者的 ACE I/D基因型電泳結(jié)果:1、3、4為II型,2為ID型,5為DD型。
根據(jù)ACE基因I/D基因型分布將入選患者分為II組和ID+DD組(由于本組資料中DD基因型只有3例,故將ID型和DD型合為一組)。兩組的基線血壓值比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
II組患者服用厄貝沙坦治療8周,收縮壓降幅為(12.21±1.97)mmHg,舒張壓降幅為(5.93±1.54)mmHg。ID+DD 組患者治療后收縮壓較基線水平下降了(12.25±3.13)mmHg,舒張壓較基線水平下降了(5.88±1.89)mmHg。厄貝沙坦的降壓療效在2組不同基因型的患者間比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表1。
臨床研究發(fā)現(xiàn)不同個(gè)體對(duì)抗高血壓藥物治療的臨床反應(yīng)差異很大?;蜃儺惣捌涠鄳B(tài)性是影響個(gè)體間藥物反應(yīng)差異的主要因素之一[3]。ACE基因的多態(tài)性對(duì)血中ACE濃度和活性起著重要作用,其中DD型ACE濃度和活性最高,ID型居中,II型最低。所以,D等位基因在ACE基因表達(dá)調(diào)控方面起活化作用,而I等位基因則起抑制作用。此外,DD型正常人及EH患者AT1基因表達(dá)最高,ID型次之,II型最低,提示D等位基因可能與血壓的升高有關(guān)[4]。該研究中,DD基因型在老年EH患者中分布最少,II和ID基因型分布比例相當(dāng)。II基因型和ID+DD基因型相比較,基線收縮壓及舒張壓均無明顯差異,未發(fā)現(xiàn)D等位基因?qū)夏闑H患者血壓水平的影響。該結(jié)果可能與研究病例數(shù)較少(僅30例)有關(guān),尚有待進(jìn)一步進(jìn)行大樣本人群的調(diào)查。
在高血壓病程中,長期過度的RAS激活,尤其是血管緊張素II(Angiotensin II,Ang II)的增加是發(fā)生致死及致殘性臨床轉(zhuǎn)歸終點(diǎn)事件的中心環(huán)節(jié)。Ang II的合成有2種途徑:ACE途徑和非ACE途徑。Ang II可與許多組織的細(xì)胞膜上的AT1受體結(jié)合使血壓升高。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑僅能抑制ACE途徑AngII的產(chǎn)生,而AngII受體拮抗劑則提供了新的治療方法[5]。
厄貝沙坦是一種口服的血管緊張素II受體 (Angiotensin IIreceptor,AT受體)拮抗劑,血漿半衰期長達(dá)11~15 h。厄貝沙坦與血管緊張素競爭性地與AT受體結(jié)合,抑制AT1受體的同時(shí)激活A(yù)T2受體,增加內(nèi)皮細(xì)胞中緩激肽及前列腺素的釋放,上調(diào)一氧化氮的表達(dá),發(fā)揮擴(kuò)血管及降低血壓的作用。同時(shí)厄貝沙坦不抑制緩激肽的降解,故而無干咳等不良反應(yīng),臨床使用中患者依從性較好[6]。
表1 ACE I/D基因型與厄貝沙坦對(duì)老年EH患者降壓療效的影響
該研究結(jié)果顯示,對(duì)老年原發(fā)性高血壓(1級(jí))的患者,應(yīng)用厄貝沙坦單藥治療8周,血壓可降至140/85 mmHg左右,療效基本滿意。在這些受試者中,ACE基因II型與ID+DD型相比較,對(duì)厄貝沙坦的降壓反應(yīng)無明顯差異,這與厄貝沙坦主要作用于RAS的終末環(huán)節(jié)AT受體有關(guān)。
總之,厄貝沙坦可有效治療老年原發(fā)性高血壓,ACE基因I/D多態(tài)性不影響其降壓療效。
[1]胡大一,黃峻,馬長生,等.心血管內(nèi)科學(xué)高級(jí)教程[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,2011:32-35.
[2]李莉,楊建一,王文娟.RAS及其基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓[J].Int JGenet,2006,29(5):389-392.
[3]Marteau JB,Zaiou M,Siest G,et al.Genetic determinants of blood pres-sure regulation[J].J Hypertens,2005(23):2127-2143.
[4]Jing L,Ningling Sun.A study of angiotensin converting enzyme genepolymorphism in essential hypertension[J].J China-Japan Friendship Hospital,2005,19(1):19-21.
[5]馬淑彥.厄貝沙坦與硝苯地平聯(lián)用治療高血壓臨床觀察[J].ChinaPrac Med,2010,17(5):146-147.
[6]葉朝暉.厄貝沙坦聯(lián)合尼群地平治療高血壓43例臨床療效觀察[J].Guide of China Medicine,2010,14(5):81-82.