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        生物芯片在結核分支桿菌抗體檢測中的應用

        2013-08-20 09:19:28李寶坤王艷杰趙丹玉馮曉帆
        中外醫(yī)療 2013年22期
        關鍵詞:生物芯片結核結核病

        李寶坤 王艷杰 趙丹玉 馮曉帆

        遼寧中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院生物化學與分子生物學教研室,遼寧沈陽 110847

        隨著基因技術的快速發(fā)展,生物芯片在遺傳病及蛋白檢測中得到了廣泛的應用。20世紀90年代人們采用分子生物學的原理對結核等進行了相關的研究,并將其做為結核病在細菌學上臨床診斷的手段之一,相關的研究也不斷的深入。當前,人們研究中使用的結核抗原主要有三種,包括:①結核致病細菌的細胞壁蛋白,常用的有38-kDa和16-kDa等蛋白;②結核細菌細胞壁的脂多糖抗原,產(chǎn)用的有LAM和TBGL等蛋白;③結核細菌的菌體。

        我國現(xiàn)階段的耐多藥性結核病的臨床發(fā)病率呈逐年增加的事態(tài),結核病的早期診斷就顯得尤為重要。為探討利用生物芯片技術對結核分支桿菌抗體進行快速檢測,該研究以病原體蛋白分子為模型對結合LAM、38-kDa及16-kDa進行檢測和分析。在檢測過程中把抗原點在芯片的膜表面,并將其與患者血清樣本進行雜交,以CCD原理對患者樣本進行檢測。該研究就2009年1月—2012年12月間收治的2000例結核患者的血清樣本進行了測試,現(xiàn)將結果報道如下。

        1 實驗部分

        1.1 患者樣品來源

        實驗收集了確診的結核病患者2000例的血清樣本,并用50例醫(yī)院健康體檢的血清樣本作為對照。對受試著進行空腹取血,將抽取的血液以1500轉的速度進行離心后取上清液,并進行相關的樣本的檢測。

        1.2 測試方法

        將蛋白與樣本雜交后對樣品進行編號處理,在蛋白芯片的盒窗口中加入4滴試劑A將芯片膜濕潤。取100 μL樣本血清,搖勻后加入到芯片窗口中,使樣本血清滲透到蛋白芯片中,先后加入6滴試劑B、10滴試劑C、6滴試劑D。待反應完全后,放入儀器中進行檢測。

        2 結果

        2.1 結核指標檢出率比較

        表1為2000例患者的結核 LAM、16-kDa、38-kDa指標的檢出率,從表1中可以看出LAM檢出率為47.2%(944/2000),16-kDa檢出率為18.2%(364/2000),38-kDa的檢出率為23.2%(464/2000),蛋白檢出率順序依此為LAM、38-kDa及16-kDa。其中結核的陽性率為31.2%(624/2000)。

        對于50例健康體檢的對照組患者,LAM指標陽性的有5例,16-kDa及38-kDa指標均稱陰性。

        表1 患者LAM、16-kDa、38-kDa指標的檢出率

        2.2 患者各年齡段陽性變化

        依據(jù)結核患者的年齡,將其分為1~29歲、30~59歲及60歲以上年齡組。圖1為患者各年齡段陽性的發(fā)生率,從圖1中可以看出60歲以上患者的陽性率最高,其次為1~29歲年齡組。

        3 討論

        利用生物蛋白芯片對結核患者的蛋白制備進行檢測,需要將幾個蛋白指標進行聯(lián)合檢測,如可將LAM、38-KDa及16-KDa等蛋白 聯(lián)合,聯(lián)合檢測有利于結核病陽性蛋白檢測的準確率[1-3]。該研究以LAM蛋白及2種重組的結核分枝桿菌蛋白抗原對患者進行檢測,其結果并不一致,這主要是由于結核分枝桿菌抗原的特性造成的,分支桿菌的抗原種類多且十分的繁雜,在人體中的表達也各不一樣,其會依據(jù)患者免疫及臨床狀況而表現(xiàn)不同。相當一部分的分枝桿菌抗原無法表達,就會在測試中檢測不到其抗體。有一部分患者抗體的含量較高,有的則是抗體含量較低,還有一些受到免疫抗體、潛伏的結核以及環(huán)境中的細菌影響而發(fā)生變異。這就要求我們在檢測結核時,需要聯(lián)合幾種抗原的蛋白芯片檢測技術,這樣可以在確保檢測蛋白特異性的同時提升檢測的準確及敏捷。該文中,患者LAM檢出率為47.2%(944/2000),16-kDa 檢出 率 為 18.2%(364/2000),38-kDa 的 檢 出 率為23.2%(464/2000),蛋白檢出率順序依此為LAM、38-kDa及16-kDa。而其中結核的陽性率為31.2%(624/2000)。這說明對于三種蛋白抗原聯(lián)合檢測技術對結核病的臨床診斷有很好的價值。

        在患者各年齡段陽性率的比較中,可以看出陽性發(fā)生率最高的是60歲以上的老年人組,其次為1~29歲組。其結果表明結核病的發(fā)生率可能與患者的免疫能力及勞逸狀況有密切的關系[4-6]。在治療過程中需要對該組患者進行適時的復查,做到盡早發(fā)現(xiàn)、治療的目的。

        研究表明,LAM、38-kDa及16-kDa蛋白抗原跟結核患者的感染狀況呈線性關系。所以,利用生物芯片技術可以對結核的LAM、38-kDa及16-kDa蛋白抗體進行適時的動態(tài)檢測,可用于結核病的臨床診斷及治療效果評價體系。

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