陳 偉，母智深，李洪亮，于景華，2，白林春，閆寧環(huán)，季國(guó)志

(1.內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)( 集團(tuán)) 股份有限公司，內(nèi)蒙古呼和浩特011500;2.天津科技大學(xué)，天津300457;3.內(nèi)蒙古化工職業(yè)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010018)

α-亞麻酸、植物甾醇酯復(fù)方牛奶是以α-亞麻酸、植物甾醇酯為主要原料的一款功能性牛奶產(chǎn)品，其功效成分α-亞麻酸［1］甾醇酯。近期研究發(fā)現(xiàn)，植物甾醇具有降低血液膽固醇、甘油三酯、抑制乳腺增生、預(yù)防前列腺疾病和調(diào)節(jié)免疫等作用［2-3］。其中降低膽固醇是最為肯定的結(jié)論。通過(guò)對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)品具有輔助降血脂功能，本實(shí)驗(yàn)繼續(xù)對(duì)該產(chǎn)品進(jìn)行了人體實(shí)驗(yàn)，依據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》［4］有關(guān)規(guī)則評(píng)判對(duì)產(chǎn)品是否具有輔助降低血脂功能進(jìn)行評(píng)價(jià)［5］。為其在乳制品中應(yīng)用打下理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

OLYMPUS AU600 生化試劑盒 日本奧林巴斯公司。

F- 820 型血球計(jì)數(shù)儀日本東亞公司;MIDIRON 尿10 項(xiàng)分析儀德國(guó)寶靈曼公司;Olympus AU600 全自動(dòng)生化分析儀 日本奧林巴斯公司;日本阿洛卡-500 型B 超機(jī) 日本阿洛卡株式會(huì)社;HG 3200 型800 毫安X 線胸透機(jī) 日本島津公司;6511 型心電圖機(jī) 日本光電工業(yè)株式會(huì)社。

1.2 樣品制備

含α-亞麻酸、植物甾醇酯復(fù)方牛奶的制備:生牛乳與植物甾醇酯、亞麻酸油及食品添加劑經(jīng)過(guò)攪拌混合，再經(jīng)均質(zhì)、巴殺及滅菌制成。其中1000g 產(chǎn)品中植物甾醇酯(植物甾醇酯≥90%)的添加量為4.0g;亞麻酸油(α-亞麻酸≥60%)的添加量為4.0g。

安慰組牛奶的生產(chǎn):與含α-亞麻酸、植物甾醇酯復(fù)方牛奶同一批次、同一包裝，同一工藝條件下經(jīng)均質(zhì)、巴殺及滅菌制成的純牛奶。

1.3 受試者選擇

1.3.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 選擇年齡在18～65 歲的高血脂癥患者為受試者，要求保持平常飲食，半年內(nèi)采血2 次均血清總膽固醇(TC)≥5.2mmol/L 或血清甘油三酯(TG)≥1.65mmol/L 者，均可納入實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 妊娠或哺乳期婦女，對(duì)保健食品過(guò)敏者;合并有心、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病，精神病患者;短期內(nèi)服用與受試功能有關(guān)的物品，影響到對(duì)結(jié)果的判斷者;不符合納入標(biāo)準(zhǔn)，未按規(guī)定服用受試樣品，無(wú)法判定功效或資料不全影響功效或安全性判斷者。

1.4 試食設(shè)計(jì)及分組

采用雙盲隨機(jī)分組、組間和自身兩種對(duì)照設(shè)計(jì)。依照上述標(biāo)準(zhǔn)選擇120 例高血脂癥患者，按年齡、性別、血脂水平等隨機(jī)分為試食組和對(duì)照組兩組，其中試食組60 例，對(duì)照組60 例。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后計(jì)算因故終止實(shí)驗(yàn)的病例數(shù)(包括中途停服受試物、未參加復(fù)檢等)，計(jì)算脫離率。

1.5 試食方法

試食組服用含α-亞麻酸、植物甾醇酯復(fù)方牛奶，對(duì)照組服用安慰劑(純牛奶)，250mL/盒，每日2次，每次1 盒，連續(xù)觀察45d。試食期間保持平日的生活和飲食習(xí)慣。

1.6 觀察指標(biāo)

各項(xiàng)指標(biāo)于試食開始及結(jié)束時(shí)各測(cè)試一次。

1.6.1 安全性指標(biāo) 一般體格檢查:實(shí)驗(yàn)前詳細(xì)詢問(wèn)并了解受試者的神、睡眠、飲食、大小便等情況，測(cè)量實(shí)驗(yàn)前后體重、血壓變化;尿、大便、血液常規(guī)檢查:包括紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、血紅蛋白(Hb)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC);腹部B 超、心電圖、X 線胸部透視檢查(實(shí)驗(yàn)開始前測(cè)定一次);生化指標(biāo)檢查:谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)。另外記錄不良反應(yīng)觀察結(jié)果。

1.6.2 功效性指標(biāo) 空腹取血，測(cè)定血清總膽固醇(TC)水平及降低百分率、甘油三脂(TG)水平及降低百分率、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平及上升幅度。

1.7 試食數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)用SPSS13.0 版軟件包，計(jì)數(shù)資料采用X2檢驗(yàn);計(jì)量資料采用t 檢驗(yàn)。結(jié)果用均值± 標(biāo)準(zhǔn)差(ˉx ±s)表示，試食前后自身比較用配對(duì)t 檢驗(yàn)，組間比較用成組t 檢驗(yàn)，后者需進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，對(duì)非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)方差齊后，用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進(jìn)行t 檢驗(yàn);若轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)仍不能滿足正態(tài)方差齊要求，改用t'檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn);但變異系數(shù)太大(如CV ＞50%)的資料應(yīng)用秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)果判斷

血清總膽固醇(TC)降低＞10%;甘油三酯(TG)降低＞15%;高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)上升＞0.104mmol/L;各功效觀察指標(biāo)實(shí)驗(yàn)前后自身比較和試食后組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，方可判定該指標(biāo)陽(yáng)性。

血清總膽固醇、甘油三酯二項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于對(duì)照組，可判定該受試樣品具有輔助降血脂功能作用:血清總膽固醇、甘油三酯二項(xiàng)指標(biāo)中一項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于對(duì)照組，可判定該受試樣品具有輔助降低血清總膽固醇或輔助降低甘油三酯作用。

2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果

雙盲法觀察結(jié)果顯示:服食1 號(hào)者為α-亞麻酸、植物甾醇酯復(fù)方牛奶，服食2 號(hào)者為安慰劑。120 例受試者中途放棄試食3 例(對(duì)照組2 例，試食組1 例)，未參加復(fù)檢13 例(對(duì)照組7 例，試食組6 例)，最后確定受試者104 例，其中對(duì)照組51 例，試食組53 例。對(duì)照組脫離率15.00%，試食組脫離率11.67%。

2.2.1 安全性觀察

2.2.1.1 一般資料 實(shí)驗(yàn)前血壓、心率、大小便、血象、肝腎功能、胸透、心電圖、B 超等檢查，受試者均在基本正常范圍，分組情況見表1，試食前兩組受試者年齡、性別、血脂水平均無(wú)明顯差異(p ＞0.05)，具有可比性。

表1 試食前一般資料比較Table 1 The information of two groups before administration

2.2.1.2 生化指標(biāo)檢查 結(jié)果見表2，食用受試物45d，兩組血壓、心率、血象、肝腎功能、大小便各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)均在基本正常范圍，試食期間也未見過(guò)敏反應(yīng)及其他不良反應(yīng)，說(shuō)明α-亞麻酸、植物甾醇酯復(fù)方牛奶對(duì)機(jī)體健康無(wú)明顯影響。

2.3 功效觀察

2.3.1 臨床觀察 結(jié)果見表3，服食受試物45d，試食組臨床觀察總有效率為81.13%，與對(duì)照組(49.02%)比較差異有顯著性(p ＜0.01)。

2.3.2 血清總膽固醇 結(jié)果見表4，自身比較:試食組試食后血清總膽固醇與試食前比較，差異有顯著性(p ＜0.01);對(duì)照組試食后血清總膽固醇與試食前比較差異無(wú)顯著性。組間比較:兩組試食前血清總膽固醇無(wú)明顯差異，試食后試食組血清總膽固醇與對(duì)照組比較差異有顯著性(p ＜0.01)，其平均下降百分率為10.32% ±0.14%，說(shuō)明α-亞麻酸、植物甾醇酯復(fù)方牛奶有降低血清總膽固醇作用。

表2 試食前后血象、肝腎功能、大小便的變化(ˉx±s)Table 2 Changes in biochemical of blood，liver and kidney function，defecation of two groups before and after administration(ˉx±s)

表3 臨床觀察功效比較Table 3 The results of function in clinical

表4 兩組試食前后血清總膽固醇變化(mmol/L，ˉx±s)Table 4 Changes in TC levels of two groups before and afrer administration(mmol/L，ˉx±s)

2.3.3 甘油三脂 結(jié)果見表5，自身比較:試食組試食后甘油三脂與試食前比較，差異有顯著性(p ＜0.01);對(duì)照組試食后甘油三脂與試食前比較差異無(wú)顯著性。組間比較:兩組試食前甘油三脂無(wú)明顯差異，試食后試食組甘油三脂與對(duì)照組比較差異有顯著性(p ＜0.01)，其平均下降百分率為15.58% ±0.34%，說(shuō)明α-亞麻酸、植物甾醇酯復(fù)方牛奶有降低甘油三脂作用。

表5 兩組試食前后甘油三脂的變化(mmol/L，ˉx±s)Table 5 Changes in TG levels of two groups before and afrer administration(mmol/L，ˉx±s)

2.3.4 高密度脂蛋白膽固醇 結(jié)果見表6，對(duì)照組HDL-C 試食前后只降低了0.02 無(wú)無(wú)顯著性差異(p ＞0.05);試食組食用前后HDL-C 也只有降低0.01，無(wú)顯著性差異(p ＞0.05);試食后對(duì)照組和試食組HDL-C 水平之相差0.02，倆組之間同樣不存在顯著性差異(p ＞0.05)。

表6 兩組試食前后高密度脂蛋白膽固醇的變化(mmol/L，ˉx±s)Table 6 Changes in HDL-C levels of two groups before and afrer administration(mmol/L，ˉx±s)

3 結(jié)論

3.1 本次實(shí)驗(yàn)采用雙盲對(duì)照法，選擇120 例高血脂癥患者，按年齡、性別、血脂水平等隨機(jī)分為對(duì)照組和試食組，分別食用安慰劑和α-亞麻酸、植物甾醇酯復(fù)方牛奶，250mL/盒，每日2 次，每次1 盒。最后確定有效病例104 例，其中對(duì)照組51 例，試食組53例，觀察期間保持平日的生活和飲食習(xí)慣。服食45d后，結(jié)果表明:α-亞麻酸、植物甾醇酯復(fù)方牛奶能降低血清總膽固醇(p ＜0.01)、甘油三脂(p ＜0.01)，血清總膽固醇平均下降10.32% ±0.14%，甘油三脂平均下降15.58% ±0.34%，而高密度脂蛋白膽固醇水平無(wú)顯著性差異。其總有效率為81.13%，與對(duì)照組(49.02%)比較，差異有顯著性(p ＜0.01)。依據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003 年版)有關(guān)規(guī)則評(píng)判，α-亞麻酸、植物甾醇酯復(fù)方牛奶有輔助降血脂功能。

3.2 近些年對(duì)于植物甾醇降低血脂的研究也特別多，主要是在高血脂動(dòng)物進(jìn)行研究，其結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致也是本研究開展的基礎(chǔ)。其中2011 年，王玉［6］植物甾醇酯對(duì)高血脂癥小鼠的降血脂的研究，結(jié)果顯示75mg/kg·d 的植物甾醇酯可以降低小鼠的血脂。2011 年張澤生［7］研究植物甾醇對(duì)高血脂大鼠血脂水平的影響植物甾醇對(duì)高血脂癥大鼠血脂水平具有顯著降低作用，并且具有抑制脂質(zhì)過(guò)氧化和保護(hù)肝臟的作用。2012 年溫超［8］等人的研究結(jié)果顯示:2 種植物甾醇均有降低血脂和提高脂蛋白代謝酶活性的趨勢(shì)，且此趨勢(shì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸消失。

3.3 植物固醇因具有降低血脂作用而受到越來(lái)越多的關(guān)注，植物甾醇是一種天然的營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑，主要是從植物中提取得到，尤其是油料種子［9］中含量最高。植物固醇可以降低腸道細(xì)胞對(duì)膽固醇的轉(zhuǎn)運(yùn)，促進(jìn)糞便排出，使膽固醇腸道吸收受到抑制［2］植物甾醇的降血脂機(jī)制［10］主要有以下3 點(diǎn):抑制腸道膽固醇吸收;影響膽固醇運(yùn)輸;影響膽固醇合成和分泌。本實(shí)驗(yàn)主要從生化指標(biāo)分析了植物甾醇的降血脂，其機(jī)制原理還有待做更進(jìn)一步的深入研究。

［1］楊天奎，高春香，張超明，等.α-亞麻酸降血脂作用的研究［J］.中國(guó)油脂，1995，20(3) :46-49.

［2］盛漪，古文英.植物甾醇調(diào)節(jié)血脂功能研究［J］.食品科技，2006(9) :296-298.

［3］高芃，陳志飛，徐海濱.植物甾醇酯降血脂功能實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)食品添加劑，2009，S1:281-284.

［4］昭日格圖，娜日蘇，博日吉汗格日勒?qǐng)D，等.黃芪多糖咀嚼片降血脂人體試食實(shí)驗(yàn)研究［J］.食品科學(xué)，2011( 11) :306-309.

［5］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范(2003 版) ［S］.

［6］王玉，劉濱城，任運(yùn)宏，等.植物甾醇酯對(duì)高脂血癥小鼠的降血脂作用研究［J］.食品科學(xué)，2011(17) :326-329.

［7］張澤生，侯冬梅，賀偉，等.植物甾醇對(duì)高血脂大鼠血脂水平的影響［J］.食品科學(xué)，2011(11) :306-309.

［8］溫超，吳萍，楊衛(wèi)兵，等.不同類型植物甾醇對(duì)蛋雞脂類代謝的影響［J］.中國(guó)糧油學(xué)報(bào)，2012(9) :85-89.

［9］韓軍花，胡葉梅，王雷，等.我國(guó)保健食品常用植物資源中植物甾醇含量研究［J］.營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2010，32(1) :82-85.

［10］陳志飛.植物甾醇影響膽固醇代謝機(jī)制的研究進(jìn)展［J］.國(guó)外醫(yī)學(xué):衛(wèi)生學(xué)分冊(cè)，2008，35(6) :360-362.