史兵偉，田曉靜，虞麗娟

(常州市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇常州213003)

術(shù)前篩查HBeAg陰性HBV感染者檢測乙肝大蛋白的意義

史兵偉，田曉靜，虞麗娟

(常州市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇常州213003)

目的了解肝功能正常、HBeAg陰性HBV感染的術(shù)前篩查患者乙肝大蛋白(HBV-LP)陽性情況，評判血清HBV-LP檢測在這類乙型肝炎患者中的意義。方法使用ELISA法檢測180例HBeAg陰性HBV感染的術(shù)前篩查患者HBV-LP、乙肝前S1(HBVpreS1)，同時(shí)采用實(shí)時(shí)定量PCR法做HBV DNA水平檢測。結(jié)果180份HBeAg陰性HBV感染血清PreS1-Ag、HBV-LP和HBV DNA檢測陽性率分別為21.1%、34.4%和32.7%，χ2檢驗(yàn)顯示三組檢測陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.145 7，P=0.010 3)，用Scheffe法做率的兩兩比較顯示：PreS1-Ag檢測陽性率明顯低于HBV-LP和HBV DNA(P<0.05)，而HBV-LP和HBV DNA檢測陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)。HBV-LP和HBV DNA配對檢測顯示結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.173 9，P=0.676 7)，同時(shí)相關(guān)性分析示良好相關(guān)性(χ2=95.655，P=0.000 0，r=0.721 7)。49例HBV DNAcopies/ml常用對數(shù)值與HBV-LP定量OD值的散點(diǎn)圖顯示正相關(guān)(r=0.6192)。結(jié)論對術(shù)前篩查HBeAg陰性乙型肝炎攜帶者，HBV-LP在反應(yīng)病毒復(fù)制方面是一個(gè)優(yōu)于HBVpreS1檢測的良好指標(biāo)，與HBV DNA檢測有良好的相關(guān)性，在不能開展HBV DNA檢測的基層單位可作為評價(jià)乙型肝炎傳染性的一種替代與補(bǔ)充。

乙型肝炎病毒；乙肝大蛋白(HBV-LP)；乙肝DNA(HBV-DNA)；乙肝前S1抗原(PreS1-Ag)

乙型肝炎病毒(HBV)是導(dǎo)致人類肝臟的感染和炎癥的常見原因，目前HBeAg陰性活動(dòng)期肝炎增多，HBV變異株增加，HBV的突變率增高[1]。為了預(yù)防HBV醫(yī)源性感染，乙肝兩對半及其他相關(guān)標(biāo)志物已作為醫(yī)院篩查乙肝攜帶者的重要手段，同時(shí)判斷其傳染性也成為大家關(guān)心的問題，特別是手術(shù)和腎透患者尤其如此。以前常通過PCR法檢測患者體內(nèi)乙肝病毒DNA(HBV DNA)的存在情況，判斷其傳染性，這種檢測不太適合臨床大批量篩查。乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV-LP)是HBV的包膜蛋白，包括HBsAg與前S蛋白(PreS1蛋白和PreS2蛋白)。它是監(jiān)測HBV感染者體內(nèi)病毒復(fù)制活躍程度新的血清學(xué)指標(biāo)[2-3]。許多學(xué)者都把HBV-LP檢測用于了解乙肝患者體內(nèi)DNA復(fù)制情況及治療效果觀察，而對肝功能正常HBeAg陰性的HBV攜帶人群卻缺乏研究。本文將探討術(shù)前篩查患者中這類HBV攜帶患者HBV-LP陽性情況，以了解血清HBV-LP檢測在術(shù)前篩查患者和HBeAg陰性乙型肝炎患者中的意義，并與血清HBV DNA和Pre-S1蛋白水平作比較，評價(jià)其作為反映HBV復(fù)制新的血清學(xué)指標(biāo)的可能性。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對象選取我院2011年1~12月術(shù)前篩查HBeAg陰性HBV感染者血清標(biāo)本180份，于-80℃凍存。其中男性106例，女性74例，年齡15~ 75歲，平均(48.5±25.6)歲。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法HBV-LP酶聯(lián)免疫試劑盒由北京熱景生物技術(shù)有限公司提供，PreS1-Ag酶聯(lián)免疫試劑盒購自夏門英科新創(chuàng)生物技術(shù)有限公司，結(jié)果采用MODEL-680酶標(biāo)儀判讀。HBV DNA實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)定量檢測，試劑盒購自中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司。結(jié)果判定：copies＞1×103為陽性。上述操作均嚴(yán)格按試劑盒操作說明進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用PEMS3.1軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。PreS1-Ag、HBV LP和HBV DNA的檢測陽性率比較采用χ2檢驗(yàn)，陽性率的兩兩比較采用Scheffe法，HBV-DNA和HBV-LP陽性符合率采用配對計(jì)數(shù)資料相關(guān)性分析，HBV DNAcopies/ml常用對數(shù)值和HBV-LP OD值比較采用計(jì)量資料相關(guān)性檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α均為0.05。

2 結(jié)果

2.1 血清PreS1-Ag、HBV-LP和HBV DNA檢測結(jié)果比較180例HBeAg陰性HBV感染者血清PreS1-Ag、HBV-LP和HBV DNA的檢測陽性率比較見表1。經(jīng)行×列表卡方檢驗(yàn)顯示，三組檢測陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.1457，P=0.0103)；用Scheffe法做率的兩兩比較顯示，PreS1-Ag檢測陽性率明顯低于HBV-LP和HBV-DNA(P<0.05)，而HBV-LP和HBV DNA陽性檢出率則差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 180例HBeAg陰性HBV感染者血清PreS1-Ag、HBV-LP和HBV DNA檢測結(jié)果比較

2.2 HBV-DNA和HBV-LP配對檢測結(jié)果比較180例HBeAg陰性HBV感染者血清中HBV-DNA和HBV-LP配對檢測情況見表2。HBV-LP和HBV DNA配對檢測結(jié)果顯示差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 0.173 9，P=0.676 7)，同時(shí)相關(guān)性分析顯示兩者具有良好相關(guān)性(χ2=95.655，P=0.000 0，r=0.721 7)。

表2 180例HBeAg陰性HBV感染者血清中HBV-DNA和HBV-LP配對檢測結(jié)果（例）

2.3 HBV DNA和HBV-LP OD值相關(guān)性在49例HBV DNA和HBV-LP同時(shí)陽性的病例中，比較HBV DNA copies/ml常用對數(shù)值與HBV-LP定量OD值的相關(guān)關(guān)系，具體數(shù)據(jù)見表3。依據(jù)HBV DNA檢測拷貝數(shù)，進(jìn)行常用對數(shù)處理，與HBV-LP OD值做散點(diǎn)圖，見圖1。

表3 HBV DNA拷貝數(shù)常用對數(shù)值和HBV-LP OD值的測定結(jié)果

相關(guān)性檢驗(yàn)結(jié)果顯示，兩者具有良好的正相關(guān)(r=0.619 2)，表明隨著HBV DNA copies/ml的增加，HBV-LP的OD值也增加，同時(shí)由散點(diǎn)圖也可發(fā)現(xiàn)，HBeAg陰性乙型肝炎攜帶患者HBV-LP OD值一般不太高。

3 討論

乙肝病毒是有膜的嗜肝DNA病毒，其基因組包含在帶有病毒編碼的聚合酶的核衣殼中，其外膜還帶有來自于宿主的脂膜成分，脂膜中含有三種病毒表面蛋白[4]：大(L)蛋白、中等(M)蛋白以及小的(S)蛋白。其中大蛋白包含有PreS1，PreS2和S區(qū)域，它是從表面蛋白開放閱讀框的第一個(gè)啟動(dòng)密碼外翻譯得來；它能夠形成兩種不同的跨膜拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，允許末端的PreS結(jié)構(gòu)域暴露于腔體內(nèi)或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜一側(cè)[1]。纖維體和病毒粒子包膜富含大蛋白[4]，大蛋白是一個(gè)具有多效性的轉(zhuǎn)錄激活子，對于病毒的組裝十分重要[5]。大蛋白一般不能單獨(dú)產(chǎn)生，它只能與中、小蛋白共分泌，并且產(chǎn)量很小。但大蛋白過量表達(dá)以及隨后的胞內(nèi)顆粒滯留，可通過由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力誘導(dǎo)的一種胞內(nèi)信號途徑來激活S啟動(dòng)子；這種激活反過來會(huì)增加中小表面蛋白的合成，這樣，使亞病毒顆粒和病毒顆粒得以分泌[6]。所有這些均可能使得大蛋白和HBV的傳染性密切相關(guān)，這也一定程度上體現(xiàn)了檢測大蛋白的重要性，同時(shí)也部分解決了臨床缺少判斷乙肝病毒復(fù)制的血清學(xué)指標(biāo)的矛盾。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在HBV DNA陽性的慢性乙型肝炎患者中，血清HBV-LP水平與HBV DNA拷貝數(shù)的變化一致，具有很好的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為0.632 1。兩者的陽性符合率為83.1%，明顯高于Pre-S1蛋白(50.8%)。而在本組HBeAg陰性的術(shù)前篩查HBV攜帶患者中，HBV-LP與HBV DNA陽性率也具有一致性，說明利用針對HBV-LP前S蛋白的構(gòu)象表位制備的單抗檢測血清HBV-LP，與依據(jù)Pre-S1蛋白線性表位制備的單克隆抗體相比，可以避免由于前S蛋白具有復(fù)雜的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)而帶來的表位掩蓋現(xiàn)象，從而能更好地反映HBV病毒顆粒和亞病毒在血清中的出現(xiàn)情況，是判斷HBV復(fù)制較好的血清學(xué)指標(biāo)，在HBeAg陰性的慢性乙型肝炎患者中具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。本組的研究結(jié)果中HBV LP水平與HBV DNA拷貝數(shù)的相關(guān)性明顯低于以前的報(bào)道[9]，不過與郝建華等[10]的報(bào)道相似。可能本組納入的病例為術(shù)前篩查患者而并非以前報(bào)道的乙型肝炎患者，這一結(jié)果似乎與本組患者的病毒活動(dòng)性低于乙型肝炎患者有關(guān)。另外，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)在，HBV DNA陰性患者的血清中，仍有9.92%的HBV-LP陽性，同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)這些患者大蛋白含量均較低，這與孫穎等[11]在治療乙型肝炎中的發(fā)現(xiàn)一致。其原因可能有：HBeAg陰性HBV感染者血清HBV DNA水平較低，而HBV DNA檢測假陰性；HBV基因具有高變異性[1]，從而導(dǎo)致PCR漏檢，而HBV-LP血清學(xué)檢測受基因變異的影響較少；抗病毒治療后，導(dǎo)致富含核酸的病毒顆粒減少或清除的同時(shí)，卻可能還有亞病毒顆粒的殘存。而這種包含宿主細(xì)胞來源的脂質(zhì)和病毒衣殼蛋白(含有大蛋白的Pre-S區(qū)域)組成的亞病毒顆粒中雖然缺乏核酸，但卻可以通過大蛋白的反式激活作用觸發(fā)病毒復(fù)制和基因表達(dá)[12]。

綜上所述，以大蛋白前S蛋白構(gòu)象表位制備的單克隆抗體檢測乙型肝炎患者血清中HBV LP水平，能更好地反映HBV的復(fù)制情況，與HBV DNA水平有高度相關(guān)性，并能對HBV DNA做有益補(bǔ)充，是判斷HBV復(fù)制新的血清學(xué)指標(biāo)。另外，ELISA檢測方法具有經(jīng)濟(jì)、直接、簡便和利于批量檢測的特點(diǎn)，特別有利于在我國尚不具備HBV DNA定量檢測條件的基層醫(yī)院推廣應(yīng)用，從而提高臨床手術(shù)的安全性，一定程度上防止HBV院內(nèi)感染的發(fā)生，適合臨床大批量術(shù)前患者篩查使用。

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Clinical significance of detecting serum hepatitis B virus large surface protein in preoperative screening in patients with HBeAg-negative hepatitis B infection.

SHI Bing-wei,Tian Xiao-jing,YU Li-juan.Changzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine,Changzhou 213003,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo detect serum hepatitis B virus large surface protein(HBV-LP)in preoperative screening in subjects with normal liver function and patients with HBeAg-negative hepatitis B infection,and to evaluate the significance of serum HBV-LP in the patients with hepatitis B.MethodsHBV-LP,hepatitis B S1 (HBVpreS1)were measured by ELISA,and HBV DNA levels were detected by fluorescence quantitative PCR in 180 HBeAg-negative HBV patients in preoperative screening.ResultsIn the 180 patients,the positive rates of PreS1-Ag,HBV-LP and HBV DNA were 21.1%,34.4%and 32.7%,respectively.χ2test showed that the positive rates of three groups had significant difference(χ2=9.145 7,P=0.010 3).Scheffe test showed that the positive rate of PreS1-Ag detection was significantly lower than that of HBV-LP and HBV DNA(P<0.05),while no significant difference was found in the positive rates of HBV-LP and HBV DNA detection(P>0.05).HBV-LP and HBV DNA showed no significant differences in detection results(χ2=0.173 9,P=0.676 7).At the same time,correlation analysis showed a good correlation between HBV-LP and HBV DNA detection(χ2=95.655,P=0.0000,r=0.721 7).The scatter plot of 49 cases of HBV DNA copy number per ml(copies/ml)commonly used numerical and quantitative HBV-LP OD showed a positive correlation(r=0.6192).ConclusionHBV-LP,superior to HBVpreS1,is a good indicator in response to viral replication.There was a good correlation between HBV-LP and HBV-DNA detection,which can be used as a substitute and supplement of hepatitis B infection in hospital.

Hepatitis B virus(HBV);HBV large surface protein(HBV-LP);HBV DNA;PreS1-Ag

R512.6+2

A

1003—6350(2013)16—2412—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.16.0994

2013-01-17)

史兵偉。E-mail：SBW8133211@163.com