朱量，程書榜，秦穎，文劍鋒，黃麗君，鄭昶

(深圳市第二人民醫(yī)院胃腸外科，廣東深圳518035)

·論著·

溫生理鹽水腹腔灌洗對(duì)大鼠胰腺內(nèi)HSP70表達(dá)的影響

朱量，程書榜，秦穎，文劍鋒，黃麗君，鄭昶

(深圳市第二人民醫(yī)院胃腸外科，廣東深圳518035)

目的探討溫生理鹽水腹腔灌洗對(duì)大鼠胰腺內(nèi)熱休克蛋白(HSP70)表達(dá)的影響。方法選取清潔級(jí)SD大鼠30只，將其作為臨床研究對(duì)象，并隨機(jī)分為兩組，每組SD大鼠15只，分別為急性胰腺炎模型組及42℃溫生理鹽水腹腔灌洗急性胰腺炎組。比較兩組大鼠術(shù)后2 h和6 h所檢測(cè)的HSP70、IL-8、TNF、血淀粉酶水平，觀察其病理切片及評(píng)分等相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果與急性胰腺炎模型組比較，42℃溫生理鹽水腹腔灌洗急性胰腺炎組術(shù)后2 h和6 h所檢測(cè)的IL-8、TNF、血淀粉酶及病理評(píng)分均明顯減少，而HSP70陽性率明顯提高，其差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論溫生理鹽水腹腔灌洗可以誘導(dǎo)大鼠胰腺HSP70的大量表達(dá)，從而抑制炎癥因子的表達(dá)，減輕炎癥因子對(duì)胰腺的損傷，并使全身炎癥反應(yīng)減弱，起到保護(hù)機(jī)體的作用，值得在臨床推廣。

溫生理鹽水；腹腔灌洗；胰腺；HSP70

熱休克蛋白(HSP70)是一種具有高度保守結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，它廣泛存在于各種生物機(jī)體內(nèi)，生理?xiàng)l件下少量表達(dá)用于維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定及調(diào)節(jié)體內(nèi)多種生理功能[1]。然而在機(jī)體受到嚴(yán)重傷害刺激時(shí)，則可大量表達(dá)。熱休克蛋白在局部炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用，可抑制炎癥介質(zhì)IL-6、IL-8及TNF的高表達(dá)和釋放[2]。而臨床大量資料表明，溫生理鹽水腹腔灌洗對(duì)熱休克蛋白的表達(dá)有重要影響。為此，筆者探討溫生理鹽水腹腔灌洗對(duì)大鼠胰腺內(nèi)HSP70表達(dá)情況的影響，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選取我院從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心獲取的清潔級(jí)SD大鼠30只作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，SD大鼠體重200~240 g，平均周齡9~11周，雌雄不限，將其隨機(jī)分為兩組各15只。急性胰腺炎模型組采用胰膽管注射牛黃膽酸鈉的方法制備，溫生理鹽水腹腔灌洗急性胰腺炎組需要在急性胰腺炎模型的基礎(chǔ)上，再用溫生理鹽水進(jìn)行腹腔灌洗。

1.2 方法

1.2.1 制備急性胰腺炎模型通過胰膽管注射牛黃膽酸鈉。手術(shù)前需禁食24 h，用氯酮進(jìn)行腹腔麻醉，然后消毒、鋪巾，于上腹正中位置作無菌切口開腹，找到胰導(dǎo)管，用加工的皮試針頭經(jīng)腸壁潛行穿刺胰膽管，并于近肝門處用動(dòng)脈夾暫時(shí)阻斷肝總管，注入牛膽酸鈉，然后打開動(dòng)脈夾，指壓穿刺部位，觀察有無泄漏現(xiàn)象，待觀察見胰腺出現(xiàn)充血水腫或被膜下有散在出血標(biāo)志時(shí)急性胰腺炎模型制作成功。

1.2.2 制備42℃溫生理鹽水腹腔灌洗模型[3]腹腔注射麻醉藥氯胺酮后，在保持無菌的條件下，于上腹正中線做一小切口，然后將輸入管置入腹腔內(nèi)，之后又在下腹正中線做一小切口，將輸出管置于腹腔，并快速的輸入42℃的溫生理鹽水，不斷調(diào)節(jié)輸出管使腹部能夠保持稍微隆起，維持30 min后關(guān)閉腹腔。

1.2.3 檢測(cè)實(shí)驗(yàn)所需的各項(xiàng)觀察指標(biāo)急性胰腺炎模型制備成功后，于術(shù)后2 h及6 h分別處死每組動(dòng)物15只/次，然后采血檢測(cè)IL-8、TNF、血淀粉酶，并取胰腺病理組織標(biāo)本做病理評(píng)分，用免疫組化定量測(cè)量HSP70的含量。

1.3 觀察指標(biāo)及療效分析觀察并比較術(shù)后2 h和6 h所檢測(cè)的IL-8、TNF、血淀粉酶、免疫組化所測(cè)得HSP70的陽性率及病理評(píng)分，病理評(píng)分采用APACHEII病理評(píng)分系統(tǒng)[4]：APACHEII總分=急性生理分+年齡分+既往健康分，其中2~8分為重型Ⅰ急性胰腺炎，9~14分為重型Ⅱ急性胰腺炎，15~27為重型Ⅲ急性胰腺炎。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所得數(shù)據(jù)采用SPSS15.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組大鼠術(shù)后2 h、6 h血淀粉酶含量及病理評(píng)分情況兩組術(shù)后2 h的淀粉酶含量及病理評(píng)分相接近(P>0.05)，而兩組術(shù)后6 h血淀粉酶和病理評(píng)分都明顯提高，且溫生理鹽水腹腔灌洗急性胰腺炎組的血淀粉酶含量明顯低于急性胰腺炎組，病理評(píng)分也顯著降低，其差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

2.2 兩組中大鼠胰腺表達(dá)的熱休克蛋白的情況術(shù)后2 h及術(shù)后6 h急性胰腺炎組中大鼠胰腺熱休克蛋白的表達(dá)陽性率均要高于溫生理鹽水灌洗急性胰腺炎組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

2.3 兩組術(shù)后2 h、6 h血中IL-8、TNF的測(cè)定值情況術(shù)后2 h兩組實(shí)驗(yàn)大鼠體內(nèi)的IL-8及TNF含量相接近(P>0.05)，而術(shù)后6 h急性胰腺炎組大鼠體內(nèi)的IL-8、TNF含量均明顯高于溫生理鹽水灌洗組的含量，其差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

組別淀粉酶(U/L)病理評(píng)分(分)急性胰腺炎組(n=15)溫生理鹽水灌洗急性胰腺炎組(n=15) t值P值術(shù)后2 h 3257±415 2580±310 0.973 >0.05術(shù)后6 h 8600±645 5316±452 13.049 <0.05術(shù)后2 h 1.9±0.87 1.8±1.14 0.874 >0.05術(shù)后6 h 6.4±1.05 3.1±1.07 4.038 <0.05

表2 兩組大鼠胰腺表達(dá)的熱休克蛋白情況(例)

表3 兩組大鼠術(shù)后2h和6h血中IL-8和TNF的測(cè)定值

表3 兩組大鼠術(shù)后2h和6h血中IL-8和TNF的測(cè)定值

組別IL-8(ng/ml)TNF(ng/ml)急性胰腺炎組(n=15)溫生理鹽水灌洗急性胰腺炎組(n=15) t值P值術(shù)后2 h 0.080±0.007 0.072±0.005 0.172 >0.05術(shù)后6 h 0.300±0.017 0.152±0.011 2.475 <0.05術(shù)后2 h 0.462±0.050 0.420±0.170 0.350 >0.05術(shù)后6 h 1.360±0.380 0.800±0.362 2.741 <0.05

3 討論

急性胰腺炎是一種起病急、死亡率高且常伴發(fā)嚴(yán)重并發(fā)癥的兇險(xiǎn)疾病。許多研究表明，急性胰腺炎早期出現(xiàn)異常增多的胰酶，它不僅可以導(dǎo)致胰腺細(xì)胞的損傷，同時(shí)也會(huì)促發(fā)胰腺局部組織發(fā)生炎癥反應(yīng)，使胰腺內(nèi)炎癥細(xì)胞被高度激活，表達(dá)釋放出各種炎癥介質(zhì)來參與炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致全身性炎癥反應(yīng)綜合征(Systemic inflammatory response syndrome，SIRS)和多器官功能障礙綜合征(Multiple organ dysfunction syndrome，MODS)的發(fā)生[5-6]。

炎癥介質(zhì)IL-6、IL-8和TNF由單核巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞以及其他一些免疫細(xì)胞表達(dá)，在機(jī)體內(nèi)可參與非特異性及特異性免疫反應(yīng)，是心肌抑制因子的組成部分[7-8]。在正常生理?xiàng)l件下，HSP70僅少量表達(dá)，當(dāng)機(jī)體受到嚴(yán)重傷害刺激時(shí)，熱休克蛋白大量表達(dá)，可抑制炎癥介質(zhì)的高表達(dá)和釋放，在局部炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用[9-10]。因此如何在急性胰腺炎發(fā)作時(shí)抑制炎癥因子的產(chǎn)生及阻斷機(jī)體內(nèi)新生成炎癥因子的作用，成為臨床治療急性胰腺炎的關(guān)鍵步驟。為此，我院就溫生理鹽水腹腔灌洗對(duì)大鼠胰腺內(nèi)HSP70的表達(dá)是否有影響進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)急性胰腺炎組大鼠體內(nèi)HSP70的陽性率明顯低于42℃溫生理鹽水腹腔灌洗急性胰腺炎組的大鼠，而其血淀粉酶含量和病理評(píng)分則要明顯高于溫生理鹽水腹腔灌洗急性胰腺炎組的大鼠，炎癥介質(zhì)IL-6、IL-8及TNF的含量也遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過溫生理鹽水腹腔灌洗急性胰腺炎組的大鼠。

綜上所述，溫生理鹽水腹腔灌洗可以誘導(dǎo)大鼠胰腺HSP70的大量表達(dá)，從而抑制炎癥因子的表達(dá)，減輕炎癥因子對(duì)胰腺的損傷，并使全身炎癥反應(yīng)減弱，起到保護(hù)機(jī)體的作用，在臨床治療急性胰腺炎時(shí)具有重要意義。

[1]孟科,劉慶森,竇艷.高滲鹽水腹腔灌洗對(duì)熱休克蛋白70表達(dá)及雨蛙素所致大鼠急性胰腺炎的影響[J].中華內(nèi)科雜志,2012, 51(7):559-561.

[2]廖刃,王泉云,張?zhí)m.氯胺酮誘導(dǎo)的熱休克蛋白70在大鼠腦組織中不同區(qū)域的表達(dá)[J].臨床麻醉學(xué)雜志,2008,24(6): 509-511.

[3]李銳,李潤(rùn)玖,張彧.熱休克蛋白70在大鼠腎缺血/再灌注損傷中的表達(dá)及血必凈注射液干預(yù)作用的研究[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志,2008,15(5):293-295.

[4]陶伍元,張文武.黃芪注射液對(duì)急性肺損傷大鼠熱休克蛋白70核轉(zhuǎn)錄因子-κB表達(dá)的影響[J].中國(guó)急救醫(yī)學(xué),2012,32(3): 227-231.

[5]李武全,邱嘯臣,金以超,等.山莨菪堿對(duì)嚴(yán)重燙傷大鼠腦組織熱休克蛋白70表達(dá)的影響[J].廣東醫(yī)學(xué),2012,33(13):1873-1875.

[6]肇杰,何志義,陳玉,等.頸內(nèi)動(dòng)脈注射質(zhì)粒pLXSN-bcl-2對(duì)大鼠局灶性腦缺血后熱休克蛋白70表達(dá)的影響[J].中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2008,37(3):319-328.

[7]王劍波,索煒,戰(zhàn)銳,等.二氧化硅誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠肺組織及血漿中熱休克蛋白70的變化[J].中華勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病雜志, 2012,30(6):428-431.

[8]王曾庚,聶祥碧,郭經(jīng)華,等.參附對(duì)急性肺損傷大鼠熱休克蛋白70表達(dá)的影響[J].南昌大學(xué)學(xué)報(bào),2011,51(10):22-26.

[9]許利剛,李寧.人參皂甙Rb1對(duì)應(yīng)激大鼠肝臟熱休克蛋白70和蛋白激酶C的影響及相關(guān)性研究[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2009, 33(4):480-482.

[10]周從陽,張志堅(jiān),熊華威.熱休克蛋白70在急性百草枯中毒大鼠肺臟中的表達(dá)[J].重慶醫(yī)學(xué),2011,40(9):886-890.

Influence of peritoneal lavage with warm saline on HSP70 expression in rat pancreas.

ZHU Liang,CHENG Shu-bang,QIN Ying,WEN Jian-feng,HUANG Li-jun,ZHENG Chang.Department of Gastrointestinal Surgery,the Second People's Hospital of Shenzhen,Shenzhen 518035,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo explore the influence of peritoneal lavage with warm saline on HSP70 expression in rat pancreas.MethodsThirty clean SD rats were chosen as the research subjects,which were equally and randomly divided into two groups.Group B(n=15,lavage acute pancreatitis group)applied peritoneal lavage with 42℃warm saline based on Group A(n=15,acute pancreatitis model group).2 h and 6 h after operation,the levels of HSP70,IL-8,TNF,hemodlastase were compared between the two groups,and the mark of pathological section and the scores were observed.ResultsCompared with group A,the levels of IL-8,TNF,hemodlastase,and pathological scores in group B were all significantly decreased 2 h and 6 h after operation,and the positive rate of HSP70 was increased significantly.The differences were all statistically significant(P<0.05).ConclusionPeritoneal lavage with warm saline can induces the high expression of HSP70,so as to depress the expression of inflammatory factor and alleviate the damage of inflammatory factor on pancreas,which also decrease the reaction of systemic inflammatory and protect the body.It is valuable to be applied for clinic.

Warm saline;Peritoneal lavage;Pancreas;HSP70

R-332

A

1003—6350（2013）16—2341—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.16.0969

2013-04-11)

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：2011B031800355)

程書榜。E-mail：zl55@163.com