唐 哲 ，韋少宣 ，廖厚知

（1.中國(guó)人民解放軍第303醫(yī)院藥劑科，廣西 南寧 530021； 2.廣西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院中藥教研室，廣西 南寧530021； 3.廣西匯科藥物研究所，廣西 南寧 530007）

算盤子 Glochidion puberum（Linn.）Hutch.為大戟科植物，又名橘子草、蟬子草、西瓜樹、果合草、血泡木等，全株入藥，味微苦、澀，性涼，有小毒，歸大腸、肝、肺經(jīng)，具清熱利濕、解毒消腫之功，主治濕熱瀉痢、黃疸、淋濁、帶下、發(fā)熱、咽喉腫痛、癰瘡癤腫、漆瘡、濕疹、蟲蛇咬傷[1]。牡荊素為算盤子的有效成分之一，具有多種生理活性，臨床可用于治療心血管疾病，且具有防癌抗腫瘤、抗炎、解痙、降壓等作用[2]。本研究中建立了牡荊素的含量測(cè)定方法，旨在為算盤子的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與材料

LC－2010A型高效液相色譜儀（日本島津制作所）；SPDM10Avp紫外檢測(cè)器（日本島津制作所）；AB265－S型分析天平（梅特勒－托利多）；UV－2450型分光光度計(jì)（日本島津制作所）；SG8200HBT型超聲波清洗器（上海冠特超聲儀器有限公司）。牡荊素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為111687－200602）；乙腈為色譜純、鹽酸、冰乙酸均為分析純；算盤子藥材分別采自廣西玉林地區(qū)（G1）、桂林地區(qū)（G2）、百色地區(qū)（G3）、河池地區(qū)（G4）、柳州地區(qū)（G5）、梧州地區(qū)（G6）、南寧地區(qū)（G7），購(gòu)于廣西玉林藥市（G8）、柳州中藥材市場(chǎng)（G9）、南寧中藥材市場(chǎng)（G10），植物樣本由廣西匯科藥物研究所工程師廖厚知采集并鑒定為大戟科算盤子屬算盤子 Glochidion puberum（Linn.）Hutch.，標(biāo)本存放于廣西匯科藥物研究所藥用資源標(biāo)本室。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:島津 Thermo BDS Hypersil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；保護(hù)柱:YWG C18保護(hù)柱（10 mm × 4.6 mm）；流動(dòng)相:乙腈 － 0.2% 冰乙酸溶液（22 ∶78）；流速:1.0 mL／min，柱溫:室溫；檢測(cè)器:日本島津SPD－M10Avp紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為340 nm。理論板數(shù)按牡荊素計(jì)不低于3000，此條件下牡荊素與其他成分分離度不低于1.5。

2.2 溶液制備

精密稱取牡荊素對(duì)照品適量，加乙腈制成每1 mL含30 μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取本品粉末（過3號(hào)篩）0.5 g，精密稱定，置 100 mL具塞錐形瓶中，加石油醚（60～90℃）50 mL，超聲波振蕩30 min，過濾，殘?jiān)鼡]干石油醚，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲波振蕩60 min，放冷，再次稱定質(zhì)量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn):分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，按確定的色譜條件測(cè)定。在此條件下，樣品中牡荊素的理論板數(shù)為3894，分離度為2.1，與其他成分分離良好。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密稱取牡荊素對(duì)照品10.23 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取 1，2，3，4，5 mL，分別置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。按上述色譜條件，分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定，以峰面積積分值（Y）對(duì)牡荊素進(jìn)樣量（X，μg）進(jìn)行回歸分析，得回歸方程Y＝320033X＋ 24790，r＝0.9998(n＝5)。結(jié)果表明，牡荊素進(jìn)樣量在0.1023～0.5115 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取牡荊素對(duì)照品溶液（30.69 μg ／mL），按上述色譜條件，依法操作測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定色譜峰面積，計(jì)算RSD為0.39%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取同一批樣品（G1）溶液 10 μL，依法制備供試品溶液，在 2，4，6，8，24，48，72 h 時(shí)間隔進(jìn)行分析，測(cè)定色譜峰面積。結(jié)果的 RSD為0.55%(n＝7)，表明供試品溶液制備后72 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批號(hào)樣品6份（G1），依法制備供試品溶液，測(cè)定含量進(jìn)行分析。結(jié)果平均含量為 2.413 mg／g，RSD為1.80%，表明測(cè)定方法重復(fù)性好。

加樣回收試驗(yàn):取已知準(zhǔn)確含量（2.413 mg／g）的樣品 6份（G1），每份取 0.25 g，精密稱定，置 100 mL 量瓶中，精密加入 0.6 mL牡荊素對(duì)照品溶液（1.011 g／L），揮去甲醇，按供試品溶液制備方法制備，分別注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件下測(cè)定牡荊素峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 牡荊素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2.4 樣品含量測(cè)定

取算盤子10批，按上述方法測(cè)定，結(jié)果表明，廣西不同產(chǎn)地的算盤子中牡荊素含量在0.1286% ～0.3917%之間，平均含量為 0.2296% ，見表 2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝10）

3 討論

算盤子作為廣西民間一味常用道地藥材，但其相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道較少，目前還沒有其質(zhì)量控制的相關(guān)報(bào)道。為此，本研究中以算盤子中牡荊素的含量作為測(cè)定指標(biāo)，建立方法，旨在為算盤子藥材的質(zhì)量控制提供含測(cè)依據(jù)。

流動(dòng)相選擇:參考相關(guān)文獻(xiàn)[2－5]，試驗(yàn)比較了甲醇 －水溶液（40 ∶60）、乙腈 －0.5% 甲酸溶液（20 ∶80）、乙腈 －3% 醋酸溶液（11 ∶89）、乙腈 －1% 醋酸溶液（14 ∶86）、乙腈 － 0.2% 冰乙酸溶液（22∶78），前兩種流動(dòng)相的分離度均達(dá)到要求，但流動(dòng)相甲醇 －水溶液（40∶60）的峰形不夠好，流動(dòng)相乙腈 －0.5%甲酸溶液（20∶80）峰形稍有拖尾，牡荊素出峰時(shí)間相對(duì)較晚，后兩種流動(dòng)相出峰時(shí)間均在35 min以上，且峰形不好。流動(dòng)相乙腈 －0.2%冰乙酸溶液（22∶78）得到的牡荊素峰形好，對(duì)稱，保留時(shí)間適宜，且分離度達(dá)到分析要求，故選擇。

提取溶劑選擇:去除雜質(zhì)時(shí)考察了石油醚（30～60℃）、石油醚（60～90℃）、三氯甲烷，三種溶劑，結(jié)果石油醚（30～60℃）提取液顏色稍淺，石油醚（60～90℃）與三氯甲烷提取溶液顏色無明顯差異?？紤]三氯甲烷對(duì)環(huán)境的破壞，故放棄，選擇石油醚（60～90℃）作為雜質(zhì)的去除溶劑。提取溶劑考察了甲醇、乙醇，結(jié)果在超聲提取的條件下，乙醇提取不完全，而甲醇則有著很好的提取率。

提取方法選擇:比較了加熱回流、索氏提取、超聲提取3種方法。結(jié)果3種提取方法提取的牧荊素含量無明顯差異，考慮超聲提取方法簡(jiǎn)單、易于操作、耗時(shí)少等優(yōu)點(diǎn)，選擇超聲提取法。

提取時(shí)間選擇:考察了除雜后甲醇超聲提取30，60，90 min，結(jié)果60 min與90 min無明顯差異，并對(duì)樣品提取后殘?jiān)M(jìn)行了再次提取及高效液相色譜法測(cè)定，結(jié)果無待測(cè)組分特征峰出現(xiàn)，說明甲醇超聲60 min已提取完全。

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[2]羅婭君，邊清泉，陳 佳，等.HPLC法測(cè)定牧荊中牡荊素的含量[J].廣西植物，2011，31（3）:418 －421.

[3]譚瑞璞，劉海周，梁曉原.HPLC法測(cè)定千針萬線草中牧荊素的含量[J].云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，32（4）:28 － 32.

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