牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院 耳鼻咽喉科，黑龍江 牡丹江 157011

中耳膽脂瘤CT表現(xiàn)與MMP-2 、MMP-9表達(dá)的關(guān)系

王樂秋，蔡勝艷，張瑞迪，張立晨，馬秀鳳

牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院 耳鼻咽喉科，黑龍江 牡丹江 157011

目的探討中耳膽脂瘤CT表現(xiàn)與基質(zhì)金屬蛋白酶－2（MMP－2）、基質(zhì)金屬蛋白酶－9（MMP－9）在組織中表達(dá)的關(guān)系。方法采用免疫組化法對50例中耳膽脂瘤標(biāo)本MMP-2 、MMP-9的表達(dá)進(jìn)行檢測，分析與其CT表現(xiàn)的關(guān)系。結(jié)果中耳膽脂瘤CT顯示聽小骨不同破壞范圍及程度，各組中MMP-2 、MMP-9的表達(dá)差異有顯著性（P＜0.001）。結(jié)論膽脂瘤中MMP-2 、MMP-9的表達(dá)與聽小骨的破壞程度呈正相關(guān)關(guān)系，可成為中耳膽脂瘤預(yù)后不良的標(biāo)志。

中耳膽脂瘤；螺旋CT機(jī)； 基質(zhì)金屬蛋白酶－2；基質(zhì)金屬蛋白酶－9；熒光顯微鏡

0 前言

中耳膽脂瘤是慢性中耳炎中最具危害性的一種，可進(jìn)行性破壞中耳腔結(jié)構(gòu)和顳骨骨質(zhì),導(dǎo)致聽力下降,甚至引起各種顱內(nèi)外并發(fā)癥，危及生命。目前CT掃描仍為其重要的物理診斷方法，是確定中耳腔結(jié)構(gòu)和顳骨骨質(zhì)破壞程度及范圍的有效手段。許多研究表明基質(zhì)金屬蛋白酶-2（Matrix Metalloproteinase-2，MMP-2）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（Matrix Metalloproteinase-9，MMP-9）在膽脂瘤中呈高表達(dá)。因此，本實(shí)驗(yàn)對MMP-2 、MMP-9 表達(dá)水平與CT掃描骨質(zhì)破壞程度進(jìn)行了相關(guān)性研究?，F(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 材料和方法

1.1 一般資料

收集我院2009～2011年膽脂瘤型中耳炎患者術(shù)前64排螺旋CT檢查結(jié)果及手術(shù)切除的膽脂瘤組織標(biāo)本50例。其中男性27例，女性23例，年齡36～64歲，平均年齡50歲。

1.2 64排螺旋CT掃描方法

采用Aquilion64排螺旋CT掃描機(jī)。掃描條件：120 kV，200 mAs，層厚0.5 mm。50例患者均行橫斷掃描，患者仰臥，先掃定位片后，設(shè)定掃描計劃。掃描范圍從外耳孔至巖骨上緣，層厚與層間距均為1 mm。窗寬：3000 Hu；窗位：2000 Hu。根據(jù)64排CT所見聽小骨有無破壞、破壞范圍及程度進(jìn)行分組：① 聽骨鏈完整組16例；② 錘骨或（和）砧骨的部分破壞組18例；③ 聽骨鏈均破壞組16例。3組CT表現(xiàn)，見圖1～3。

圖1 聽骨鏈完整組（雙耳）

圖2 錘骨或（和）砧骨的部分破壞組（右耳）

圖3 聽骨鏈均破壞組（左耳）

1.3 一般組織學(xué)處理

組織標(biāo)本均經(jīng)4%多聚甲醛-0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4）固定(其中含0.1%焦碳酸二乙酯），常規(guī)石蠟包埋，厚4 um，連續(xù)切片。

1.4 主要試劑與方法

1.4.1 主要試劑

免抗人MMP-2多克隆抗體、免抗人MMP-9多克隆抗體、二步法免疫組化試劑盒及3，3-二氨基聯(lián)苯氨（DAB）均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。3種抗體工作濃度均為1:100。MMP-2、MMP-9陽性對照分別為乳腺癌、結(jié)腸癌；PBS取代一抗作陰性對照，以排除非特異性染色。

1.4.2 免疫組化檢測

采用SABC法（鏈霉親合素-生物素-過氧化物酶連結(jié)法），經(jīng)高溫高壓抗原修復(fù)，嚴(yán)格按照操作規(guī)范進(jìn)行。

1.5 圖像采集與分析

用Olympus BX60熒光顯微鏡、復(fù)日FR-988圖像采集系統(tǒng)采集圖像，通過IMACE-PRO plus5.0圖像分析軟件對50例膽脂瘤標(biāo)本進(jìn)行定量分析。顯微圖像分析系統(tǒng)倍數(shù)為×1000，每張切片選取5個不相重疊的視野，讀取其累積（Intergrated Optical Density，IOD），并取其均值。

1.6 統(tǒng)計學(xué)分析

對膽脂瘤組織中MMP-2 、MMP-9的表達(dá)與其CT顯示聽小骨破壞程度的關(guān)系，應(yīng)用 SPSS10.0 系統(tǒng)軟件采用sperman等級相關(guān)分析，P＜0.05為差異有顯著意義。

2 結(jié)果

中耳膽脂瘤CT顯示聽骨鏈完整、錘骨或（和）砧骨部分破壞及聽骨鏈均破壞各組中MMP-2、MMP-9的表達(dá)差異有顯著性（P＜0.001），見表1。

表1 膽脂瘤組織中MMP-2、MMP-9累積光密度與其聽骨CT表現(xiàn)的關(guān)系（% ）

3 討論

膽脂瘤是中耳的一個慢性炎癥過程，導(dǎo)致耳軟組織和骨組織的破壞[1]。其中，骨質(zhì)破壞是膽脂瘤特征性表現(xiàn)，原因尚不十分清楚，但可以肯定的是免疫因素參與其中并起到重要的作用。基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix Metalloproteinase，MMPs）在體內(nèi)可由多種基質(zhì)細(xì)胞和炎性細(xì)胞分泌，降解基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的多種蛋白成分，在良惡性病變的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用[2]。迄今為止發(fā)現(xiàn)MMPs這個大家族，幾乎能降解細(xì)胞外基質(zhì)中的各種蛋白成分，根據(jù)其降解的底物不同，分為4類（間質(zhì)膠原酶、明膠酶類、基質(zhì)溶解素和膜型基質(zhì)金屬蛋白酶)。其中MMP-2和MMP-9是引起基底膜及細(xì)胞外基質(zhì)降解的重要成分[3]。此二者屬于明膠酶可以降解基底膜的主要成分IV型膠原，促進(jìn)炎性細(xì)胞的滲出。MMP-2亦稱IV型膠原酶或明膠酶A，主要功能為降解IV型膠原，因而它在腫瘤細(xì)胞突破基底膜屏障和浸潤轉(zhuǎn)移中起著重要作用[4-9]。MMP-9是目前發(fā)現(xiàn)的26種MMPs中[10]研究較多、也較成熟的，稱為明膠酶B，其作用的底物主要是明膠。

本研究顯示，膽脂瘤組織中MMP-2、MMP-9的表達(dá)與其CT顯示聽小骨破壞程度密切相關(guān)，并隨其破壞程度的加重而增加，提示此二者的表達(dá)與聽小骨破壞程度呈正相關(guān)?？梢?，由于過量的MMP-2、MMP-9降解聽小骨的基底膜及細(xì)胞外基質(zhì)，使其無法維持聽小骨正常的組織結(jié)構(gòu)與功能及細(xì)胞生長、分化過程，同時二者破壞不斷代謝、更新、降解、重塑的動態(tài)平衡，從而導(dǎo)致聽小骨的骨質(zhì)破壞。由此可見，MMP-2、MMP-9表達(dá)異常在中耳膽脂瘤的疾病演變過程中，特別是在骨質(zhì)破壞中起到重要作用。CT的特征性表現(xiàn)可成為中耳膽脂瘤預(yù)后不良的標(biāo)志。

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Relationship between CT Performance of Middle Ear Cholesteatoma and Expression of MMP-2 & MMP-9

WANG Le-qiu, CAI Sheng-yan, ZHANG Rui-di, ZHANG Li-chen, MA Xiu-feng
Department of Otolaryngology, Hongqi Hospital of Mudanjiang Medical College, Mudanjiang Heilongjiang 157011, China

ObjectiveTo study the relationship between CT performance of middle ear cholesteatoma and expression of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9).MethodsTested the expression of MMP-2 and MMP-9 by immunohistochemical method in 50 cases of middle ear cholesteatoma, and analyzed its correlation with CT performance.ResultsDifferent extent of damage of auditory ossicle was displayed by cholesteatoma tympanitis CT. There is signifcant difference in the expression of MMP-2 and MMP-9 (P＜0.001).ConclusionMMP-2, MMP-9 expression in cholesteatoma is positively related to the degree of ossicular destruction, and can be treated as poor prognostic markers of cholesteatoma tympanitis.

middle ear cholesteatoma; sprial CT; matrix metalloproteinase-2; matrix metalloproteinase-9; fuorescence microscope

R814.42；R764.21

B

10.3969/j.issn.1674-1633.2013.05.040

1674-1633(2013)05-0112-02

2012-11-17

2012-12-09

本文作者：王樂秋，碩士。

作者郵箱：mdjwangleqiu@163．com