顧春瑜，劉英麗，王海濱，孫婷婷，何麗婧

獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)，即艾滋病，已成為21 世紀(jì)危害人類健康的主要疾病之一，早期發(fā)現(xiàn)、早期預(yù)防隔離是阻止HIV 傳播的有效手段。HIV 檢測的第四代診斷試劑具有較高的敏感性，能將窗口期縮短4 ～5 d［1］，但靈敏度提高的同時假陽性率也隨之增加。本研究旨在通過回顧近幾年我院HIV 初篩陽性的標(biāo)本，分析第四代試劑檢測HIV 抗體出現(xiàn)假陽性的原因。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 2010－01 至2012－01 我院HIV初篩陽性標(biāo)本119 例，來自于有創(chuàng)檢查和手術(shù)前準(zhǔn)備的患者，以及疑似HIV 感染者。其中男86 例，女33 例，年齡16 ～85 歲，平均(45.29 ±18.14)歲。

1.2 試劑和儀器 儀器為羅氏全自動免疫分析儀Roche cobas6000(瑞士羅氏公司生產(chǎn))，酶標(biāo)儀RT－6000、洗板機(jī)RT－3000(深圳雷杜生命科學(xué)有限公司生產(chǎn))。HIV 四代試劑、HIV－P24 抗原試劑由羅氏公司提供，HIV 三代試劑由萬泰生物藥業(yè)股份有限公司提供。

1.3 HIV 抗體和HIV－P24 抗原聯(lián)合檢測( HIV 四代試劑) 利用電化學(xué)發(fā)光技術(shù)對人血清中HIV 抗體及HIV－P24 抗原同時進(jìn)行定性分析，實(shí)驗(yàn)在Roche cobas6000 全自動免疫分析系統(tǒng)上進(jìn)行。按照說明書判定結(jié)果:S/CO≥1 為陽性;0.9≤S/CO ＜1 為灰區(qū);S/CO≤0.9 為陰性。

1.4 HIV 抗體及HIV－P24 抗原分別檢測 為了排除同一個實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)同時檢測抗原和抗體引起的實(shí)驗(yàn)干擾，將58 例HIV 四代試劑檢測S/CO≤10 的初篩陽性標(biāo)本分別用HIV 三代試劑(ELISA 法)檢測HIV 抗體，用HIV－P24 抗原試劑檢測HIV－P24 抗原，實(shí)驗(yàn)步驟按照說明書進(jìn)行，檢測結(jié)果與四代試劑檢測結(jié)果比較。

1.5 HIV 確認(rèn)實(shí)驗(yàn) 按照《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》(2009 年版)的要求［2］，所用HIV 初篩陽性標(biāo)本重新抽血用兩種試劑同時進(jìn)行復(fù)檢，雙陰性者報(bào)告為陰性，雙陽性或一陰一陽的標(biāo)本送HIV 確證實(shí)驗(yàn)室(本實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本送至北京市CDC 和全軍HIV實(shí)驗(yàn)室)，采用Westblot 法進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 HIV 抗體初篩陽性的標(biāo)本確認(rèn)結(jié)果 119 例HIV 抗體初篩陽性標(biāo)本送至HIV 確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室回報(bào)結(jié)果見表1。根據(jù)不同S/CO 范圍HIV 抗體確認(rèn)結(jié)果分布，所有HIV 抗體陽性標(biāo)本S/CO ＞150;HIV抗體陰性和HIV 抗體不確定的標(biāo)本S/CO≤150，且絕大部分S/CO≤10。

表1 119 例HIV 抗體初篩陽性的標(biāo)本確認(rèn)結(jié)果分布(n;%)

2.2 各種疾病在假陽性組中的分布 51 例假陽性患者的既往病史，詳見表2，其中腫瘤及血液病構(gòu)成比最大。

表2 各種疾病在HIV 假陽性組中的分布

2.3 HIV 抗體及HIV－P24 抗原聯(lián)合檢測和分開檢測對比 對58 例HIV 四代試劑檢測S/CO≤10的初篩陽性標(biāo)本，分別檢測HIV 抗體和HIV－P24抗原，比較前后兩次的檢測結(jié)果見表3。

表3 HIV 抗體及HIV－P24 抗原聯(lián)合檢測和分開檢測對比

3 討論

快速準(zhǔn)確地檢測HIV 抗體并為臨床診斷和治療艾滋病提供可靠的依據(jù)，已成為檢驗(yàn)工作者刻不容緩的責(zé)任。但HIV 抗體檢測的假陽性結(jié)果給HIV 初篩實(shí)驗(yàn)室的工作帶來諸多不便，也造成了巨大醫(yī)療資源浪費(fèi)，同時給受檢者帶來沉重的心理負(fù)擔(dān)。尤其是第四代試劑的出現(xiàn)，假陽性現(xiàn)象更為突出，因此本研究希望通過分析假陽性結(jié)果的原因，減少HIV 抗體檢測假陽性的發(fā)生。

3.1 HIV－P24 抗原與假陽性 隨著HIV 檢測技術(shù)的提高，HIV 4 代試劑已逐漸取代了HIV 3 代試劑，它能在同一個檢測系統(tǒng)同時檢測HIV(1 +2)抗體與P24 抗原。P24 抗原屬HIV－1 核心蛋白，在病毒的包裝和成熟過程中發(fā)揮重要作用，其氨基酸序列在HIV 各毒株之間高度保守，缺失P24 抗原會導(dǎo)致病毒無法正常組裝［3］。在HIV 感染早期，病毒大量復(fù)制而產(chǎn)生抗體極少時，通過檢測血清或血漿P24 抗原，可以將“窗口期”縮短，故P24 抗原在HIV－1 早期感染的檢測中有重要價值［4］。但由于第4代HIV 檢測試劑的固相載體上同時包被抗p24 的單克隆抗體和HIV 抗原，而載體的表面積是固定的，因此在檢測過程中，吸附到載體上的抗體和抗原的量均會受到限制，導(dǎo)致抗原和抗體檢測之間的干擾現(xiàn)象，這可能是造成檢測假陽性的重要原因之一［5］。為了證明這個假設(shè)，本實(shí)驗(yàn)將58 例S/CO≤10 的初篩陽性標(biāo)本，分別檢測HIV 抗體和HIV－P24 抗原，其中有25 例HIV 抗體和HIV－P24 抗原結(jié)果為陰性，確認(rèn)結(jié)果也為陰性，這證明四代試劑在同一個系統(tǒng)同時檢測抗原和抗體會出現(xiàn)干擾現(xiàn)象，但由于標(biāo)本量較少，還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。同時P24 抗原具有的非特異性［6］，在本實(shí)驗(yàn)中，隨訪復(fù)查8 例HIV 抗體不確定患者，帶型無進(jìn)展，全部被診斷為陰性，帶型模式出現(xiàn)最多的是P24，這說明HIV 抗體檢測的假陽性與P24 抗原的非特異性相關(guān)。

3.2 其他疾病與假陽性 其他疾病是HIV 抗體檢測假陽性的另一個重要原因，如惡性腫瘤、心血管疾病、透析、自身免疫性疾病、妊娠等［7－9］，這些疾病可使患者體內(nèi)含有某些治療性抗體、類脂嗜異性抗體、類風(fēng)濕因子、甲胎蛋白等，這些物質(zhì)會與試劑中的抗原成分非特異結(jié)合，從而發(fā)生假陽性。本研究初篩陽性的119 例標(biāo)本中，經(jīng)Westblot 實(shí)驗(yàn)確認(rèn)，共有51例HIV 抗體陰性，其中腫瘤14 例、燒傷8 例、妊娠7例，位列前3 位，合計(jì)約占56.8%，在這前3 位的疾病中燒傷位居第2 位，這和以往的別的報(bào)道不同。筆者發(fā)現(xiàn)在我院初篩陽性的送檢標(biāo)本中，其中1 例患者先后2 次送檢，前后的S/CO 值有較大差異，這說明該患者體內(nèi)某種物質(zhì)干擾了檢測，推測與燒傷患者的用藥有關(guān)，但還未經(jīng)證實(shí)。這也是我院作為以燒傷為特色的醫(yī)院HIV 抗體檢測假陽性率較其他醫(yī)院高的原因之一。

3.3 S/CO 比值與假陽性 運(yùn)用四代試劑在全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)檢測HIV 抗體使HIV 抗體檢測更標(biāo)準(zhǔn)化更敏感，它減少了人為的因素，從加樣到測試全部機(jī)器操作，重復(fù)性好。因此在分析假陽性原因時不需要分析過多的人為因素。但化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)的高靈敏度與HIV 四代試劑高敏感性的疊加，使HIV 抗體檢測的假陽性率大大增加，本研究中119 例初篩陽性標(biāo)本只有40 例為確認(rèn)實(shí)驗(yàn)陽性，筆者發(fā)現(xiàn)HIV 抗體陽性的標(biāo)本S/CO 值全都在150 以上，而HIV 抗體假陽性的標(biāo)本S/CO 比值大部分在1 ～10 之間。隨著S /CO 值的增高，初篩結(jié)果與確證陽性符合率也隨之升高。因此當(dāng)1 ＜S/CO≤10 時，HIV 抗體陽性的可能性小，多為體內(nèi)某些抗原物質(zhì)干擾所致［10］，實(shí)驗(yàn)室檢測人員應(yīng)依據(jù)實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果，結(jié)合受檢者相應(yīng)病史和個體狀況進(jìn)行綜合分析，有條件可以將HIV 抗體與p24 抗原分別檢測，以排除假陽性。

總之，HIV 抗體檢測的假陽性有多方面原因，四代試劑因其固有的特點(diǎn)較三代試劑假陽性率高，因此在臨床應(yīng)用中應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況具體分析。雖然HIV 抗體檢測已開展多年，但應(yīng)用化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測HIV 抗體還剛開始應(yīng)用于臨床，HIV 抗體四代試劑的假陽性原因還有待我們進(jìn)一步的研究。

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