田 甜，劉德孝

二氟尼柳(Diflunisal)為水楊酸衍生物類非甾體抗炎藥物［1］，具有良好的鎮(zhèn)痛消炎作用，臨床上用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾?。?-4］。目前，我國已有二氟尼柳片劑和二氟尼柳膠囊批準(zhǔn)生產(chǎn)。普通二氟尼柳片日服3 次，血藥濃度波動大，且在體內(nèi)水解成水楊酸后，對胃腸道粘膜有刺激性作用［5-6］。將其制成緩釋片后，可維持藥物濃度的穩(wěn)定，緩解藥物對胃腸道粘膜的刺激性。目前，尚未見采用HPLC 法測定二氟尼柳緩控釋片的報(bào)道。本文通過建立HPLC 法，測定二氟尼柳緩釋片中二氟尼柳的含量，滿足了該制劑含量測定的要求。

1 材料

1.1 儀器 島津SPD-10AVP 高效液相色譜儀、ANASTAR 色譜工作站(日本島津公司)，色譜柱Hypersil DBS C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm，大連依利特有限公司)，DT100A 十萬分之一光電分析天平(沈陽杰龍儀有限公司)。

1.2 試藥 二氟尼柳標(biāo)準(zhǔn)品(100%，中國藥品生物制品檢定所，批號:110234)、二氟尼柳緩釋片(巨化集團(tuán)有限公司制藥廠提供，批號:091105、100203、100916、101015、110304、110607、111001，規(guī)格:250 mg/片)、乙醇(天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號:100115)、甲醇(色譜純，天津市康德科技有限公司，批號:101008)、乙腈(色譜純，天津市康德科技有限公司，批號:100312)，其他試劑均為色譜純。水均由蒸餾水經(jīng)微孔濾膜(0.45 μm)過濾。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱:Hypersil DBS C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流動相:甲醇-乙腈-水-冰醋酸(30∶70∶50∶2);檢測波長:254 nm;流速:1.5 mL/min;柱溫:室溫;進(jìn)樣量:10 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密量取二氟尼柳對照品約30 mg，置100 mL 容量瓶中，加流動相約50 mL超聲溶解，加流動相至刻度，搖勻，作為對照品溶液(濃度為0.3 mg/mL)。

2.2.2供試品溶液取本品10 片(批號:091105)，精密稱定，研細(xì)。精密稱取粉末適量(約相當(dāng)于二氟尼柳25 mg)置25 mL 具塞容量瓶中，精密加入流動相適量(稀釋制成每1 mL 中含30 μg的溶液)，超聲處理10 min，取出，搖勻，濾過，再用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得。

2.2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取空白溶液、對照品溶液、供試品溶液，按上述色譜條件分別進(jìn)樣10 μL，色譜圖見圖1。結(jié)果表明，二氟尼柳與空白溶液分離度良好，出峰位置無雜質(zhì)吸收峰，該方法專屬性良好，對照品與供試品保留時間分別為8.21、8.15 min，理論塔板數(shù)＞2 000。

2.3 線性關(guān)系 分別精密量取對照品溶液適量，以流動相稀釋二氟尼柳濃度至7.5、15、22.5、30、37.5、45、52.5 μg/mL。分別精密吸取上述對照品溶液10 μL注入色譜儀，記錄峰面積，以峰面積(A)對濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得二氟尼柳線性回歸方程:A =2 ×104C +3.2 ×103(r =0.999 9)。二氟尼柳在7.5 ～52.5 μg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1 二氟尼柳HPLC 色譜圖

2.4 精密度考察 精密吸取對照品溶液10 μL，在上述色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣6 次，測定峰面積，計(jì)算峰面積平均值為809 375，RSD 為0.78%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液(批號:091105)，分別于配制后0、2、4、6、8、10 h 進(jìn)樣，依法測定，測定二氟尼柳峰面積平均值為795 162，RSD 為0.47%。結(jié)果表明，供試品溶液在8 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批號樣品6 份(批號:091105)，按上述方法進(jìn)行測定，二氟尼柳的平均峰面積為795 599，RSD 為0.69%，結(jié)果表明，此方法重現(xiàn)性良好。

2.7 回收率 二氟尼柳原料按處方量的80%、100%、120%，分別置于容量瓶中，加入處方量輔料，加入流動相適量，并稀釋至刻度，過濾，取10 μL注入液相色譜儀，測定主成分峰面積。另量取二氟尼柳對照品適量，用流動相稀釋至每1 mL中含30 μg 的溶液，同法操作，用外標(biāo)法計(jì)算即得。結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品測定結(jié)果 取不同批號二氟尼柳緩釋片，按上述方法制成供試品溶液，精密吸取各供試溶液10 μL，注入液相色譜儀，測定6 批樣品。見表2。

表2 樣品測定結(jié)果(mg/g，n=6)

3 討論

二氟尼柳在水中幾乎不溶，而易溶于甲醇，在查閱相關(guān)文獻(xiàn)基礎(chǔ)上［7-9］，適當(dāng)調(diào)整流動相各組分比例、溶液酸堿度等條件，在該比例的流動相中，樣品溶解良好，溶液穩(wěn)定;在所確定的色譜條件下，出峰位置無干擾，保留時間＜10 min，可以滿足大批量測定要求，理論塔板數(shù)符合藥物制劑含量測定的分析要求。本方法的建立為今后二氟尼柳相關(guān)制劑的質(zhì)量控制和含量測定的評價(jià)及研究奠定了初步的基礎(chǔ)。

［1］ 胡紅丹，茂松青，鐘光祥. 二氟尼柳衍生物的研究進(jìn)展［J］.浙江化工，2009，41(3):1-4.

［2］ Fountoulaki S，Perdih F，Turel L，et al. Non-steroidal anti-inflammatory drug diflunisal interacting with Cu(II). Structure and biological features［J］. J Inorg Biochem，2011，105(12):1645-1655.

［3］ Sekijima Y. Familial amyloid polyneuropathy:diflunisal［J］.Rinsho Shinkeiqaku，2010，50(11):836.

［4］ Berk JL，Dyck PJ，Obici L，et al.The diflunisal trial:update on study drug tolerance and disease progression［J］. Amyloid，2011，18(S1):191-192.

［5］ Wasey JO，Derry S，Moore RA，et al.Single dose oral diflunisal for acute postoperative pain in adults［J］. Cochrane Database Syst Rev，2010，14(4):CD007440.

［6］ Ward KE，Archambault R，Mersfelder TL. Severe adverse skin reactions to nonsteroidal antiinflammatory drugs:A review of the literature［J］.Am J Health Syst Pharm，2010，67(3):206-213.

［7］ Wahbi AA，Mabrouk MM，Moneeb MS，et al.Simultaneous determination of the two non-steroidal anti-inflammatory drugs;diflunisal and naproxen in their tablets by chemometric spectrophotometry and HPLC［J］.Pak J Pharm Sci，2009，22(1):8-17.

［8］ 黃華，余小平，田海.HPLC 法測定二氟尼柳膠囊中二氟尼柳的含量［J］.臨床合理用藥，2009，2(17):14-15.

［9］ 王玉花，劉曉磊，孫文慧，等.二氟尼柳分散片的人體藥動學(xué)及生物等效性［J］. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2007，27(2):196-198.