田汝芳 劉 鵬 厲超飛

山東健康藥業(yè)有限公司，山東 濟(jì)南 250022

乳癖寧膠囊由赤芍、柴胡、川芎、當(dāng)歸等10味中藥組成，具有活血行氣，軟堅(jiān)散結(jié)的功效。赤芍為方中君藥，所含成分芍藥苷為乳癖寧膠囊主要有效成分之一，具有擴(kuò)張血管、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗炎等功效［1－2］。芍藥苷為赤芍中主要有效成分，因此，通過(guò)檢測(cè)制劑中芍藥苷的含量來(lái)控制赤芍的含量，對(duì)確保制劑的療效有重要意義。為此，用高效液相色譜法對(duì)乳癖寧中芍藥苷的含量測(cè)定方法進(jìn)行了研究。該法簡(jiǎn)便、快速、重現(xiàn)性好，可作為該產(chǎn)品質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

1220型安捷倫高效液相色譜儀;METTLER電子分析天平;KQ－300B型超聲波清洗器 (昆山市超聲儀器有限公司)。芍藥苷對(duì)照品 (中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào):0736－200219);乳癖寧膠囊 (批號(hào):20120613、20120615、20120620)。甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:ODS C18(150 mm×4.6 mm，5 m)，流動(dòng)相:甲醇－0.05 mol/L磷酸二氫鉀－1%磷酸溶液(40∶59∶1)，流速:1 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng):230 nm，柱溫:室溫，進(jìn)樣量10 L，理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)不低于2000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器中干燥36小時(shí)的芍藥苷對(duì)照品12.36 mg，置25ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻;再精密量取5ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得 (濃度為49.44g/ml)。

2.3 供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超聲處理 (功率250W，頻率33kHz)30min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性對(duì)照溶液液的制備 按照處方量，以相同的制劑工藝制備缺少赤芍的陰性對(duì)照樣品，照2.3供試品溶液的方法制得陰性對(duì)照溶液。

2.5 系統(tǒng)適用性考察照2.1項(xiàng)所述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10 L，分別注入液相色譜儀。結(jié)果，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上檢出相應(yīng)的色譜峰，芍藥苷色譜峰與相鄰色譜峰的分離度大于1.5;陰性對(duì)照在與對(duì)照品溶液色譜峰相應(yīng)的位置上沒(méi)有相應(yīng)的色譜峰，不干擾供試品溶液的測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.6 線性關(guān)系考察 精密量取芍藥苷貯備液 (494.4g/ml)，分別精密量取1、2、3、4、5ml，分別置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取10 L，注入液相色譜儀，照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，以對(duì)照品濃度 (Y)為縱坐標(biāo)，色譜峰峰面積 (X)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果，芍藥苷回歸方程為:Y=140.46X+101.03，r=0.9996，表明在19.776～98.880 g/mL范圍內(nèi)，芍藥苷色譜峰峰面積與對(duì)照品濃度有良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一對(duì)照品溶液10 L，注入液相色譜儀，照2.1項(xiàng)下所述的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，連續(xù)測(cè)定6次，記錄色譜峰峰面積并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 (RSD)。結(jié)果，芍藥苷對(duì)照品色譜峰峰面積平均值為7169.5，RSD=0.72%，表明儀器的精密度良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)乳癖寧膠囊樣品 (批號(hào)20120615)6份，按照2.3項(xiàng)下所述方法制備供試品溶液，照2.1項(xiàng)下所述液相條件測(cè)定，計(jì)算樣品中芍藥苷的含量及RSD。結(jié)果平均值為3.66 mg/g，RSD為0.57%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取乳癖寧膠囊樣品，照2.3項(xiàng)下所述方法制備供試品溶液，照2.1項(xiàng)下所述液相條件測(cè)定，分別精密吸取供試品溶液10 L，于0、2、4、6、8小時(shí)測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算RSD。結(jié)果，芍藥苷峰面積的平均值為5362.8，RSD=1.09%，表明供試品溶液中的芍藥苷在8小時(shí)內(nèi)測(cè)定的結(jié)果穩(wěn)定。

2.10 回收率試驗(yàn) 取已知芍藥苷含量 (3.66mg/g)的樣品0.25g，共6份，分別置50ml量瓶中，分別精密加入1.036mg/ml的芍藥苷對(duì)照品溶液1ml，按2.3項(xiàng)下所述方法制備供試品溶液，并按2.1項(xiàng)下所述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率及RSD。結(jié)果平均回收率為100.11%，RSD為0.95%，表明該方法能夠準(zhǔn)確測(cè)定樣品中的芍藥苷含量。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.11 樣品測(cè)定 取3批乳癖寧膠囊樣品，照2.3項(xiàng)下所述方法制備供試品溶液，分別精密吸取對(duì)照品溶液 (芍藥苷含量49.44 g/ml)和供試品溶液各10 L，注入液相色譜儀，照2.1項(xiàng)下所述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計(jì)算芍藥苷含量，見(jiàn)表2。

表2 三批樣品含量測(cè)定結(jié)果 (n=3)

3 討論

3.1 本品具有活血行氣，軟堅(jiān)散結(jié)的功效，用于氣滯血瘀所致的乳腺增生病。赤芍為方中君藥，有效成分芍藥苷具有擴(kuò)張血管、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗炎等作用［1－2］。故選擇芍藥苷作為本品的含量測(cè)定指標(biāo)，與本品的功能具有較高的相關(guān)性。

3.2 預(yù)試驗(yàn)考察了不同提取溶劑甲醇與70%乙醇做提取溶劑時(shí)芍藥苷的含量，比較了不同提取方法超聲與回流提取時(shí)芍藥苷的含量，比較了不同超聲時(shí)間20min、30min、40min時(shí)芍藥苷的含量，最終選擇用甲醇做提取溶劑，超聲提取30min。

3.3 流動(dòng)相選擇中，分別考察了乙腈－0.1%磷酸溶液、甲醇－水等系統(tǒng)［3－6］的不同配比，結(jié)果表明甲醇－0.05mol·L－1磷酸二氫鉀溶液－1%磷酸 (40∶65∶1)為流動(dòng)相最為理想，此條件下芍藥苷與其他成分能夠較好的分離，陰性無(wú)干擾，且樣品處理方法簡(jiǎn)單，可作為本品質(zhì)量控制的理想方法。

［1］阮金蘭，趙鐘祥，曾莊忠，等．赤芍化學(xué)成分和藥理作用的研究進(jìn)展［J］．中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2003，19(9):965－970．

［2］楊媛媛，周剛，馬曉康，等．赤芍的研究進(jìn)展［J］．醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，27(1):67－69．

［3］梁可文，龍?jiān)疲┑ぃ瓾PLC法測(cè)定防芷鼻炎片中芍藥苷的含量［J］．中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2012，21(16):67－68．

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［5］李惠珍，羅君，周蘭，等．RP－HPLC法測(cè)定杜仲補(bǔ)天素片中芍藥苷的含量［J］．中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2011，20(7):45－46．

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