李玉奎 馬振勇 馮傳博 余 堃

溫陽通絡(luò)凝膠治療腰椎間盤突出癥的實驗研究

李玉奎 馬振勇 馮傳博 余 堃

目的觀察溫陽通絡(luò)凝膠治療腰椎間盤突出癥的作用。方法建立大鼠腰椎間盤突出癥神經(jīng)根受壓模型，觀察高倍光鏡下3個視野的神經(jīng)根、神經(jīng)節(jié)炎性細胞數(shù)目及對大鼠后肢的機械性刺激閾值的影響。結(jié)果溫陽通絡(luò)凝膠在一定程度上有減少腰椎間盤突出癥模型大鼠神經(jīng)節(jié)、神經(jīng)根炎性細胞浸潤作用的趨勢，可提高機械性壓迫所致的痛閾值。結(jié)論溫陽通絡(luò)凝膠有一定抗炎、鎮(zhèn)痛作用。

溫陽通絡(luò)凝膠；腰椎聞盤突出癥；實驗研究

1 資料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物選用SPF級成年SD大鼠60只，雌雄各半，體重250～300g。隨機分為A：空白對照組；B：模型對照組；C：黑膏藥組；D：治療組，每組15只。

1.1.2 實驗藥品溫陽通絡(luò)凝膠，藥物組成：生川烏30g，生草烏30g，生馬錢子20g，生白芍50g，生麻黃50g，桑寄生40g，生黃芪40g，防風20g，雪上一枝蒿50g，桂枝30g?；|(zhì)為聚乙烯醇等。溫陽通絡(luò)凝膠10cm2/kg，生藥0.41/kg；黑膏藥：加廣丹熬制成黑膏藥。以上均制成1.5×3.0cm大小，外用。

1.1.3 實驗試劑及儀器YLS-3E型電子壓痛儀；電子天平：SARTORIUS AG GOTIINGEN R200D德國產(chǎn)品。

1.2 實驗方法

1.2.1 造模除空白對照組外，大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，40mg/kg戊巴比妥鈉腹腔內(nèi)注射麻醉，背部手術(shù)區(qū)域備皮消毒、鋪無菌巾。以雙側(cè)髂棘最高點連線為中心，取背部后正中切口，依次切開皮膚、皮下組織并沿棘突兩側(cè)剝離。利用專門的動物手術(shù)器械，包括微型咬骨鉗、血管鉗、牽開器及神經(jīng)剝離子等行L4～L5，L5～L6右側(cè)半椎板及小關(guān)節(jié)切除，町輕柔粘附于神經(jīng)表面，無需特殊固定。然后用3-0絲線逐層關(guān)閉切口，完成手術(shù)。術(shù)后當天禁食、禁水，自術(shù)后第1天起給予正常食、水，術(shù)后連續(xù)3天肌注青霉素40萬U，術(shù)后1周開始治療。

1.2.2 給藥A：正常對照組不作處理；B：模型對照組外敷無菌輔料：C：黑膏藥組在背部拆線后外敷黑膏藥。D：治療組在背部拆線后給予溫陽通絡(luò)凝膠外敷。每24小時更換一次。

1.3 檢測指標待動物適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境后，在手術(shù)前l(fā)天及術(shù)后l天、1周、2周及4周分別進行動物的行為學測試和病理學檢查。每次進行測試前將大鼠置于測試觀察箱中適應(yīng)20min，盡量消除外界干擾因素對動物的影響。

1.3.1 動物運動功能評價動物運動功能評價是將大鼠置于地面，觀察其步態(tài)情況。采用Chatani等[3]的運動功能損害評分方法：3分為下肢功能嚴重受損，無法行走；2分為中度受損，可以行走，但呈現(xiàn)明顯跛行步態(tài)；1分為輕微跛行；0分代表行走正常。

1.3.2 測量大鼠后肢的機械性刺激閾值采用YLS-3E型電子壓痛儀測定給藥第1、7、14、28天大鼠右后足的痛閾值。比較給藥第1、7、14、28天各組大鼠痛閾值。

1.3.3 病理學檢查C組和D租分別于滿4周后，用空氣栓塞法每組處死15只實驗動物，迅速切下L4/5、L5/6神經(jīng)根、神經(jīng)節(jié)。4%甲醛固定，組織塊經(jīng)常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片厚度為5μm，HE染色，圖像采集MIQAS醫(yī)學圖象定量分析系統(tǒng)進行圖像采集，計數(shù)400倍光鏡下3個視野的神經(jīng)根、神經(jīng)節(jié)炎性細胞數(shù)目。

1.4 統(tǒng)計學處理計量資料以（±s）表示，進行方差分析，組間t檢驗，數(shù)據(jù)統(tǒng)計均由SPSS l3.0軟件完成。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 動物運動功能評價所有四組實驗動物手術(shù)前、后均未出現(xiàn)跛行、步態(tài)異常或癱瘓的現(xiàn)象，運動損害功能評分為0分。

2.2 機械性刺激

表1 機械性壓迫所致痛閾值的影響[(±s),n=15]

表1 機械性壓迫所致痛閾值的影響[(±s),n=15]

注：與模型對照組比較★P＜0.05，與黑膏藥組比較▲P＜0.05

組別 術(shù)后1周 術(shù)后2周 術(shù)后4周空白對照組713.4±105.3★▲718.7±79.1★▲714.3±81.6▲★模型對照組510.3±90.2 528.1±71.3▲627.3±98.6▲黑膏藥組 514.3±91.2 613.1±102.2★678.8±101.5★治療組 518.1±101.3 644.2±97.5★716.2±94.5▲★

空白對照組動物未出現(xiàn)明顯的機械痛覺過敏現(xiàn)象；其余大鼠都出現(xiàn)了手術(shù)側(cè)（同側(cè)）后肢的機械刺激閾值明顯降低；逐漸恢復的一個過程，且痛覺過敏的現(xiàn)象無論是否應(yīng)用藥物，術(shù)后4周均能恢復，而用藥物治療的大鼠恢復較快。治療組與黑膏藥相比，在鎮(zhèn)痛方面無明顯優(yōu)勢。

2.3 病理學檢查結(jié)果

表2 病理學觀測到神經(jīng)根炎性細胞數(shù)目[(±s),n=15,個數(shù),/HP]

表2 病理學觀測到神經(jīng)根炎性細胞數(shù)目[(±s),n=15,個數(shù),/HP]

注：與模型對照組比較★P＜0.05；與黑膏藥組比較▲P＜0.05

組別 炎性細胞總數(shù)中性粒細胞 巨噬細胞 淋巴細胞空白對照組1.90±1.41★▲0.47±0.27★0.24±0.14★▲1.21±1.43★模型對照組4.77±2.12▲0.97±0.91▲0.83±0.75▲2.95±1.71▲黑膏藥組3.50±2.81★0.63±0.96★0.41±0.58★2.30±1.12治療組 2.21±1.91★▲0.33±0.16★▲0.40±0.50★1.50±1.01★▲

3 討論

本方以《傷寒論》烏頭湯為基本方進行加減而成，烏頭湯能溫經(jīng)散寒止痛，主治寒痹。因臨床所見椎間盤脫出癥患者大多畏寒怕冷，所以我校附屬醫(yī)院以本方制成黑膏藥外敷取得良好效果。然而黑膏藥采用麻油炸法，對中藥材中各種有效成份的提取度很小，難以達到有效的治療濃度；而且，中藥復方制劑的成分復雜，通常不提取單一純品，用藥劑量一般較大，又可容納中藥復方的極細藥粉、提取藥物等，工藝條件簡單，適合中醫(yī)藥的發(fā)展[2]。本文通過動物實驗證實，制劑改革后，使用溫陽通絡(luò)凝膠制劑用藥1周時無明顯變化，用藥3周時其鎮(zhèn)痛效果明顯優(yōu)于黑膏藥；在抗炎方面，新制劑與傳統(tǒng)制劑相比，對于神經(jīng)根上炎性細胞的總數(shù)有顯著地統(tǒng)計學意義。

[1]車立新,依力哈爾?沙迪克,謝淑萍,等.手術(shù)和保守治療腰椎間盤術(shù)后椎間盤炎療效的病例對照研究[J].中國骨傷,2012,25(8)：670-673.

[2]王金鳳,蔡興東.中藥凝膠劑研究近況[J].中國當代醫(yī)藥,2011, 18(2)：14-15.

[3]Olmarker K, Nutu M, Storkson It, et a1.Changes in Spontaneous Behavior in Rats Exposed to Experimental Disc Herniation are Blocked by SelectivenTNF-Alpha Inhibition[J].Spine,2003,28： 1635-1642.

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】1673-5846(2013)08-0038-02腰椎間盤突出癥是常見病、多發(fā)病。保守治療可以獲得較為滿意的遠期療效[1]。中藥外敷一直是有效的治療方法，但制劑落后，制劑改革勢在必行，而凝膠制劑的研究日益受到重視[2]。溫陽通絡(luò)凝膠將傳統(tǒng)的黑膏藥改成凝膠制劑，通過實驗研究，驗證其療效和發(fā)現(xiàn)其作用機理，更好地為臨床應(yīng)用提供科學依據(jù)。

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