遲海濤 金 蕊 叢 博 白 鷹

（大連大學(xué)附屬新華醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，遼寧 大連 116021）

sIL-2R、IL-6在重癥肌無力胸腺瘤中的表達(dá)及意義

遲海濤 金 蕊 叢 博 白 鷹

（大連大學(xué)附屬新華醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，遼寧 大連 116021）

目的 探討可溶性白細(xì)胞介素 2 受體（sIL-2R）、白細(xì)胞介素 6（IL-6）在胸腺瘤合并 MG 發(fā)病機(jī)制中的作用。方法 搜集胸腺切除手術(shù)的 27 例胸腺瘤患者的相關(guān)資料，對(duì)切除的胸腺瘤組織用免疫組化的方法，確定 SIL-2R、IL-6 在胸腺瘤組織中的表達(dá)情況。結(jié)果 SIL-2R 細(xì)胞因子、IL-6 在胸腺瘤合并 MG 的胸腺瘤組織呈高表達(dá)。結(jié)論 可溶性白細(xì)胞介素 2 受體（SIL-2R）、IL-6 在胸腺瘤合并 MG 的表達(dá)呈正相關(guān)。

重癥肌無力；可溶性白細(xì)胞介素 2 受體 (SIL-2R)；白細(xì)胞介素 6(IL-6)；胸腺瘤

重癥肌無力（Myasthenia Gravis，MG）主要是由乙酰膽堿受體抗體（acetylcholine receptor antibody，AchR）介導(dǎo)的，針對(duì)神經(jīng)肌肉接頭處突觸后膜上乙酰膽堿受體（AchR）的自身免疫性疾病[1]，它的發(fā)病因素是多方面的，如遺傳方面、自身的抵抗力及免疫力、細(xì)胞因子作用、胸腺異常等。

本實(shí)驗(yàn)通過免疫組化方法對(duì)切除的胸腺瘤組織，確定sIL-2R、IL-6在胸腺瘤組織中的表達(dá)情況，探討其在胸腺瘤合并MG發(fā)病機(jī)制中的作用。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器

1.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑

兔抗人sIL-2R、CD4、IL-6多克隆抗體，生物素標(biāo)記的羊抗兔IgG二抗、辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素及DAB顯色劑（美國SANTA CRUZ公司）。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

BX-50Olympus顯微鏡（日本），6382E超低溫冰箱（美國NUIAR），HH-W21Cu600電熱恒溫水溫箱（美國），LeicaTP1020組織脫水機(jī)（德國Leica）。

1.1.3 研究對(duì)象

選取27例在2003年至2007年大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院住院行胸腺切除術(shù)的胸腺瘤患者，其中男14例，年齡15～67歲，女13例，年齡25～76歲；其中9例合并MG,發(fā)病率33.33%（年齡15～65歲），其中男6例，女3例；未合并MG18例（年齡23～76歲），其中男7例，女11例。分為MG組和非MG組。MG組為胸腺瘤合并MG，非MG組為胸腺瘤不伴MG。

1.1.4 組織標(biāo)本

上述27例患者手術(shù)治療切除的胸腺瘤組織蠟塊標(biāo)本。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)本處理及染色

免疫組化方法：操作步驟嚴(yán)格按說明書要求。將腺瘤組織蠟塊切片成4μm厚，去掉蠟封，室溫下孵育10min 3%H2O2，用高壓蒸汽法進(jìn)行抗原修復(fù)，沖洗時(shí)用蒸餾水，浸泡在0.01mmol/LPBS（磷酸緩沖液）中持續(xù)5min，正常山羊血清室溫孵育一刻鐘，把血清清除，加入一抗工作液，兔抗人sIL-2R多克隆（1∶100）、IL-6抗體（1∶200），次日，用0.01mmol/L PBS沖洗三次，每次3min；滴加生物素標(biāo)記的羊抗兔IgG二抗，在37℃下孵育時(shí)間為20min，沖洗液以及沖洗次數(shù)與時(shí)間同樣按上述步驟；滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，孵育時(shí)間及溫度同上，同上述方法沖洗，DAB顯色劑顯色、自來水徹底沖洗、蘇木素復(fù)染、常規(guī)脫水、透明和封片。PBS代替一抗做空白對(duì)照，已知陽性標(biāo)本做陽性對(duì)照。

1.2.2 陽性結(jié)果判斷

sIL-2R和IL-6陽性表達(dá)信號(hào)位于細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，結(jié)果的認(rèn)定采用 許 良 中 等[2]的 方 法 ， 在 腫 瘤 細(xì) 胞 中 以 陽 性 細(xì) 胞 的 占 比 及 著 色 的強(qiáng)弱來判定。陽性細(xì)胞數(shù)最小0分，最大4分；無陽性細(xì)胞計(jì)0分；＜25 %計(jì)1分；26 %～50 %計(jì)2分；51 %～75 %計(jì)3分；＞75 %計(jì)4分。著色強(qiáng)度最小0分，最大3分，無著色為0分；淡黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分。將兩項(xiàng)指標(biāo)的評(píng)分相加，根據(jù)總的分?jǐn)?shù)分為4級(jí)，即0～1分為陰性（-）；2～3分為弱陽性（+）；4～5分為中度陽性（ +～++ ）；6～7分為強(qiáng)陽性（ ++～+++ ）。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS13.0軟件包來處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，F(xiàn)isher比較組間確切概率。

2 結(jié) 果

2.1 sIL-2R的表達(dá)

sIL-2R陽性反應(yīng)為棕黃色顆粒狀染色，在胸腺瘤中的具體表達(dá)見表1。

2.2 IL-6的表達(dá)

IL-6陽性反應(yīng)呈棕黃色顆?；驁F(tuán)塊狀染色，在胸腺瘤中的具體表達(dá)見表2。

3 討 論

胸腺瘤大多伴有數(shù)量不等的反應(yīng)性不成熟的T淋巴細(xì)胞，T細(xì)胞受體（TCR）在其成熟的過程中基因重新排列，以至于激活了自身的免疫反應(yīng)。胸腺瘤合并MG患者其增生的胸腺髓質(zhì)內(nèi)表達(dá)豐富的AchR與表達(dá)主要組織相容性復(fù)合體（MHC）Ⅱ類分子的并指狀細(xì)胞密切接觸，說明MG與胸腺免疫異常有關(guān)。

表1 sIL-2R在胸腺瘤中的表達(dá)

表2 IL-6在胸腺瘤中的表達(dá)

sIL-2R是體內(nèi)免疫系統(tǒng)激活的標(biāo)志之一，是由IL-2Rα鏈解產(chǎn)生可溶性糖基化蛋白，可直接體現(xiàn)出重癥肌無力患者有關(guān)淋巴細(xì)胞的增殖和激活情況[3]。朱元貴等人發(fā)現(xiàn)[4]，重癥肌無力患者血清sIL-2R均高出正常水平，尤其是伴有胸腺瘤的重癥肌無力患者，增高更加明顯，且MG其血清sIL-2R水平增高與其病情呈線性關(guān)系，但從未報(bào)到過有關(guān)sIL-2R在胸腺瘤組織中的表達(dá)。

IL-6是由諸多細(xì)胞產(chǎn)生，包括活化的單核、T淋巴、內(nèi)皮細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞等，IL-6的表達(dá)是由體內(nèi)多種淋巴和非淋巴細(xì)胞完成的。B淋巴細(xì)胞后期的活化主要由IL-6誘導(dǎo)，從而合成大量的分泌型免疫球蛋白。同時(shí)，IL-6對(duì)T細(xì)胞的活化、增殖和分裂也具誘導(dǎo)作用。在重癥肌無力時(shí)，IL-6有利于對(duì)B淋巴細(xì)胞的促進(jìn)分化及增殖作用，從而產(chǎn)生抗體，上調(diào)了對(duì)細(xì)胞的免疫。MG患者較健康對(duì)照組抗原特異性外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-6水平增高[5]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)MG組胸腺瘤組織中IL-6的表達(dá)做了檢測(cè)，結(jié)果顯示MG組明顯高于非MG組（P＜0.05），說明IL-6可能參與胸腺瘤MG的發(fā)病機(jī)制。

總之，本研究結(jié)果顯示，在伴發(fā)MG的胸腺瘤組織中，sIL-2R和IL-6均高表達(dá)，極有可能是高水平sIL-2R的作用機(jī)制對(duì)T細(xì)胞增殖起了引導(dǎo)作用，產(chǎn)生大量IL-6，從而激發(fā)活化后期B淋巴細(xì)胞合成大量分泌型免疫球蛋白，增加了IgG，IgA，IgM的分泌，導(dǎo)致大量的AChR破壞，引起突觸后膜傳遞障礙形成重癥肌無力。提示sIL-2R、IL-6在胸腺瘤伴發(fā)MG的發(fā)病過程中起重要的作用。對(duì)初步評(píng)價(jià)胸腺瘤伴發(fā)重癥肌無力患者體內(nèi)免疫狀況并判斷其預(yù)后具有重要的指導(dǎo)意義。

[1]Link H,Xiao BG.Rat models as tool to develop new immunotherapies [J].Immunol Rev,2001,184:117-128.

[2]許良中,楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)[J].中國癌癥雜志,1996,6(4): 229-231.

[3]Rubin LA,Kurman CC.Soluble interleukin-2 receptors are released from actired human lymphoid cells [J].Immunol,1985,135(5): 3172-3177.

[4]朱元貴,彭旭.重癥肌無力患者的血清SIL-2R的研究[J].中國神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志,1998,5(2):100.

[5]張栩,孫兆林.重癥肌無力患者外周血單個(gè)核細(xì)胞水平的測(cè)定[J].青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2003,39(4):38.

The Roles of sIL-2R, IL-6 in Pathogenesis of Thymoma with Myasthenia Gravis

CHI Hai-tao, JIN Rui, CONG Bo, BAI Ying
(Department of Neurology, Xinhua Hospital Affiliated to Dalian University, Dalian 116021, China)

ObjectiveTo explore the roles of sIL-2R, IL-6 in the pathogenesis of thymona with myasthenia gravis.MethodA analysis of 27 cases of thymona for whom thymectomy were performed was made. The immunohistochemical staining with sIL-2R, IL-6 was performed on the parrafined sections of the 27 thymona specimen.ResultsIn the 27 thymectomy patients, sIL-2R.ConclusionsIL-2R, IL-6 are important in pathogenesis for thymoma with MG and may also initiate the MG's autoimmune reactions.

Myasthenia gravis(MG); sIL-2R; IL-6; Thymoma

R746.1

：B

：1671-8194（2013）07-0039-02