易必新 王 斌 李昌亮 王偉姣

（湖南省食品藥品檢驗研究院，湖南 長沙 410001）

HPLC法測定鹽酸丁卡因麻黃堿溶液中鹽酸丁卡因的含量

易必新 王 斌 李昌亮 王偉姣

（湖南省食品藥品檢驗研究院，湖南 長沙 410001）

目的 建立高效液相色譜法測定鹽酸丁卡因麻黃堿溶液中鹽酸丁卡因的含量方法。方法 采用 Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱；以0.05mol/L 磷酸二氫鉀溶液 [用稀磷酸或三乙胺調(diào)節(jié) pH 值至（3.0±0.1）]-乙腈（70 ∶ 30）；檢測波長：310nm；流速：1mL/min；進(jìn)樣量：20μL；柱溫：30℃。結(jié)果 鹽酸丁卡因在 1.02～50.95μg/mL 范圍內(nèi)線性良好（r2=1），平均回收率為 100.31%，RSD 為 0.61%（n=9）。結(jié)論 該方法可有效的測定樣品中鹽酸丁卡因的含量，精密度高、方法簡便準(zhǔn)確可靠。

鹽酸丁卡因；高效液相色譜；含量測定

鹽酸丁卡因麻黃堿溶液為醫(yī)院制劑，主要成分為鹽酸丁卡因和鹽酸麻黃堿，用于鼻腔檢查時麻醉黏膜表面[1]。處方：鹽酸丁卡因10g，鹽酸麻黃堿30g，蒸餾水加至1000mL。有標(biāo)準(zhǔn)[2]只對鹽酸丁卡因和麻黃堿進(jìn)行了總量控制。文獻(xiàn)[3,4]采用紫外分光光度法測定鹽酸丁卡因制劑的中鹽酸丁卡因的含量，《中國藥典》2010年版二部[5]中鹽酸丁卡因原料和制劑的含量測定分別采用電位滴定法與紫外-可見分光光度法，結(jié)果不太可靠，為了更好的控制產(chǎn)品質(zhì)量，本研究在參考相關(guān)文獻(xiàn)[6-9]的基礎(chǔ)上并建立了高效液相色譜法測定其鹽酸丁卡因的含量。

1 儀器與試藥

儀器：UV-2550紫外分光光度計；AE240電子分析天平（精密度：十萬分之一）。供試品：輔料和樣品（批號20120913、 20120914）均由某醫(yī)院提供。對照品：鹽酸丁卡因?qū)φ掌罚ㄖ袊幤飞镏破窓z定所 批號100456-200301 含量100%）。試劑：水為重蒸餾水；磷酸、三乙胺、磷酸二氫鉀均為分析純；乙腈為色譜純。

2 試驗方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent ZORBAX SB-C18液相色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液[用稀磷酸或三乙胺調(diào)節(jié)pH值至（3.0±0.1）]-乙腈（70∶30）；檢測波長：310nm；柱溫：30℃；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：20μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液

圖1 HPLC色譜圖（A．供試品溶液；B.對照品溶液；C.陰性對照溶液）

精密稱取鹽酸丁卡因?qū)φ掌?0mg，置100mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，精密取5mL。置50mL量瓶中，加流動相稀釋，搖勻即得。

2.2.2 供試品溶液

精密量取本品2mL，置100mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，置50mL量瓶中，加流動相稀釋，搖勻即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備

取鹽酸麻黃堿12mg，置50mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，精密量取5mL，置20mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

在上述的液相色譜條件下，分別精密量取陰性樣品溶液、供試品溶液、對照品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果見圖1，表明在上述色譜條件下，陰性對照溶液在鹽酸丁卡因峰處未出現(xiàn)色譜峰，說明空白輔料對該方法測定無干擾。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取鹽酸丁卡因?qū)φ掌?.02038g，置100mL量瓶中，加流動相溶解后，加流動相稀釋至刻度，作貯備液。分別精密量取貯備液0.1mL、0.5mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL置20mL量瓶中，各加流動相稀釋至刻度搖勻，依次進(jìn)樣，記錄峰面積。以鹽酸丁卡因的濃度（C）為橫座標(biāo)，峰面積（A）為縱座標(biāo)做線性回歸，得回歸方程A=105458C+5725.4（r2=1）。結(jié)果表明，該方法在測定1.02～50.95μg/mL的鹽酸丁卡因時有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗

取供試品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果主峰面積的RSD為0.15%（n=6），表明進(jìn)樣精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗

取同一批樣品，依法配制供試品溶液6份，按上述色譜條件依法測定，6份樣品含量測定結(jié)果的RSD為0.24%（n=6），表明該試驗的重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液分別于0、2、4、8、12、18、24h取樣測定，結(jié)果主峰面積的RSD為0.52%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收試驗

精密稱定鹽酸丁卡因?qū)φ掌?6mg、20mg、24mg各三份，分別置100mL量瓶中，各加入適量空白輔料，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5mL，置50mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，作供試品溶液；照含量測定方法測定其加入量，見表1。

2.9 樣品含量測定

精密量取2.2項下配制的供試品溶液20μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密稱取鹽酸丁卡因?qū)φ掌?，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。按上述方法，分別測得2批鹽酸丁卡因的含量，測定結(jié)果如下：批號20120913：百分含量102.5%；RSD 0.28%；批號20120914：百分含量103.9%；RSD 0.1%。

表1 回收試驗測定結(jié)果

3 討 論

3.1 檢測波長的選擇

由鹽酸丁卡因?qū)φ掌啡芤涸?00～400nm的紫外掃描圖可知，鹽酸丁卡因在310nm與226nm的波長處吸收最大，在310nm波長處的吸收值比226nm高，故選310nm作為檢測波長。

3.2 流動相比例的選擇

采用0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液[用稀磷酸或三乙胺調(diào)節(jié)pH值至（3.0±0.1）]-乙腈（80∶20），鹽酸丁卡因的出峰時間比較慢。為了節(jié)約時間與成本，將比例調(diào)節(jié)至0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈（70∶30），鹽酸丁卡因的出峰時間為8min左右，主峰的對稱性好，所以選擇此比例作為流動相的比例。

[1]姚家春.2%鹽酸丁卡因溶液的制備及臨床應(yīng)用含量[J].臨床合理用藥雜志,2012,5(3C):101.

[2]劉麗娟,魏愛英.實用醫(yī)院外用制劑手冊[M].濟(jì)南:山東科學(xué)技術(shù)出版社,1999:39.

[3]章國鈞,邱在峰.上海市醫(yī)院制劑手冊[M].3版.上海:上?？萍汲霭嫔?1995:416-417.

[4]戴華生.復(fù)方鹽酸丁卡因的溶液的含量測定[J].海峽藥學(xué),2007, 19(10):67-68.

[5]國家藥典委員會.中國藥典2010年版(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:630-631.

[6]羅亞虹,陳瑩.高效液相色譜法測定鹽酸丁卡因滴眼液中兩組分含量[J].藥物鑒定,2008,18(14):31-32.

[7]高美英.高效液相色譜法測定鹽酸卡因滴眼液的含量[J].海峽藥學(xué),2003,15(3):32-33.

[8]朱晶.HPLC法測定鹽酸丁卡因膠漿中鹽酸丁卡因的含量[J].中國醫(yī)藥指南,2011,9(29):235-236.

[9]徐華,李浩.高效液相色譜法快速測定皰疹靈中甲硝唑與鹽酸丁卡因含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2001,21(10):629.

Determinetion of Tetracaine Hydrochloride and Ephedrine Hydrochloride Solution by HPLC

YI Bi-xin, WANG Bin, LI Chang-liang, WANG Wei-jiao
(Hunan Food and Drug Inspection Institute, Changsha 410001, China)

ObjectiveTo establish a HPLC method for determining the content of tetracaine hydrochloride in tetracaine hydrochloride and ephedrine hydrochloride solution.MethodsThe separation was performed on agilent ZORBAX SB-C18. The mobile phase was composed of 0.05mol/L potassium dihydrogen phosphate solution [adjusted with phosphoric acid or triethylamine to pH(3±0.1)]-acetonitrile (70∶30). The detection wavelength was 310nm，the flow rate was 1.0mL/min, and the column temperature was 30℃.ResultsThe linear range of tetracaine hydrochloride was 1.02-50.95μg/mL（r2=1）, the average recovery was 100.31%, and the RSD was 0.61% (n=9).ConclusionThis method can be effective determination of the content of tetracaine hydrochloride, high precision, the method is simple, accurate and reliable.

Tetracaine hydrochloride; HPLC; Content determination

R914.1

：B

：1671-8194（2013）07-0014-02