劉健威

（遼寧中醫(yī)藥大學2010級研究生課程進修班，遼寧 沈陽 110032）

不同體質(zhì)SD大鼠在腦缺血再灌注損傷后血清中VEGF的表達

劉健威

（遼寧中醫(yī)藥大學2010級研究生課程進修班，遼寧 沈陽 110032）

目的 探討不同體質(zhì)SD大鼠急性局灶性腦缺血再灌注后血清中VEGF的表達。方法 構(gòu)建寒、熱、常體等3中不同體質(zhì)的SD大鼠模型，給予急性局灶性腦缺血再灌注損傷，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測不同體質(zhì)大鼠腦缺血再灌注 24h 后血清中 VEFG 的表達情況。結(jié)果 不同體質(zhì)大鼠在腦缺血再灌注 24h 后血清中 VEGF 均有表達，3 種體質(zhì)大鼠 VEFG 表達與假手術(shù)組比較，C、D 兩組差異明顯（P＜ 0.05），寒體質(zhì)大鼠血中 VEGF 表達與其他兩種體質(zhì)大鼠比較，血清中 VEGF 表達水平低（P＜ 0.05）。結(jié)論 不同體質(zhì) SD 大鼠腦缺血再灌注損傷后，血清中 VEGF 均有表達，寒體組 VEFG 表達水平明顯低于其他體質(zhì)組，說明寒體組大鼠預后較差。

體質(zhì)；VEGF；腦缺血再灌注

中醫(yī)學強調(diào)“不治已病，治末病”。近年來，隨著對中醫(yī)文獻的信息挖掘，有很多學者發(fā)現(xiàn)單純“辨證論治”不能全面地概括中醫(yī)的診療模式。提出“辨體—辨證—辨病”診療模式[1-3]。其中，“辨體”將人作為研究的主體，指出人的體質(zhì)對相關(guān)疾病的診斷、治療、預防以及對亞健康的干預具有獨特的優(yōu)勢。這一診療模式的提出，促進了現(xiàn)代中醫(yī)學對中醫(yī)體質(zhì)學說的研究。近年來隨著對中醫(yī)體質(zhì)的研究不斷深入，認為中醫(yī)體質(zhì)與腦卒中的發(fā)病關(guān)系存在一定的關(guān)系[4]。本文通過酶聯(lián)免疫吸附法檢測不同體質(zhì)SD大鼠腦缺血再灌注損傷后24h血清中VEGF的表達水平，探討不同體質(zhì)對腦卒中的影響，為臨床腦卒中的治療提供一點理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

清潔級SD大鼠，雌雄各半，由遼寧中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。將經(jīng)過四代體質(zhì)強化繁育后的大鼠，寒性體質(zhì)中隨機選取10只作為寒體組；熱性體質(zhì)中隨機選取10只作為熱體組；常性體質(zhì)中隨機選取10只作為常體組；另隨機選取10只未經(jīng)過體質(zhì)篩選的SD大鼠作為假手術(shù)組。

1.2 寒、熱、常體大鼠模型的建立

根據(jù)匡調(diào)元《中醫(yī)實驗病理學》的理論，復制3種不同體質(zhì)的SD大鼠模型[5]。具體步驟如下：①根據(jù)大鼠肛溫高低，自然狀態(tài)下篩選寒、熱、常體三種體質(zhì)的SD大鼠（185±50）g，每組各30只。按體質(zhì)類型及性別分籠飼養(yǎng)。寒性體質(zhì)大鼠0.5mL/（只·d），黃連解毒湯煎液灌胃，熱性體質(zhì)大鼠0.5mL/（只·d），附子理中湯煎液灌胃，常體質(zhì)大鼠0.5mL/（只·d），生理鹽水灌胃，時間為1個月[6]，達到對不同體質(zhì)大鼠進行體質(zhì)強化的效果。1個月后同組之間雌雄大鼠進行交配，所產(chǎn)子代大鼠按體質(zhì)類型及性別繼續(xù)分籠飼養(yǎng)至體質(zhì)量（185±50）g時，各組子代采用上述同樣方法分組給予灌胃處理，重復親代大鼠體質(zhì)強化過程并且1個月后繼續(xù)進行交配，以進一步強化培育體質(zhì)表象，直至子四代鼠體質(zhì)量（185±50）g時，進行腦缺血再灌注模型制備。

1.3 腦缺血再灌注模型制備

三種體質(zhì)組大鼠參照Longa法，采用改良的血管內(nèi)栓線技術(shù)制備大鼠急性局灶性腦缺血再灌注模型[7]。在室溫（22 ℃）條件下，10%水合氯醛（330 mg/kg）腹腔麻醉，消毒頸部皮膚，沿頸正中線做一長度約2 cm的切口，仔細鈍性分離暴露出右側(cè)頸總動脈（CCA）、右頸外動脈（ECA）和右頸內(nèi)動脈（ICA）。在ECA遠端距CCA分叉3 mm處結(jié)扎ECA。再用電凝器在結(jié)扎點遠心端電凝ECA，用眼科手術(shù)剪在結(jié)扎點和電凝點之間剪斷ECA。然后將ECA向鼠尾方向牽拉，使ECA和ICA成一條直線。動脈夾夾閉CCA近心端和ICA遠心端，在ECA結(jié)扎點前端剪一“V”形小口，緩慢將栓塞線經(jīng)ECA插入ICA，打開ICA遠心端的動脈夾。根據(jù)栓塞線上的標記，判斷栓塞線插入的深度。當CCA分叉進入栓塞線1.9 cm處標記，在“V”形切口近心端結(jié)扎ECA，使栓塞線和ECA固定在一起。剪斷各結(jié)扎點上的手術(shù)線，消毒并逐層縫合切口，將栓塞線多余的部分縫合在創(chuàng)口之間，暴露于皮外。栓塞2 h后，緩慢拔出尼龍線進行再灌注。假手術(shù)組在同等手術(shù)環(huán)境下，只作頸部皮膚切開以及血管暴露，然后給予縫合。

1.4 標本采集

腦缺血再灌注模型制作成功24h后，各組大鼠經(jīng)斷髓處死后，均采用腹主動脈才學進行血清標本采集，無菌條件下采集5mL/只，放于促凝管中，室溫放置2h，低溫離心機3000轉(zhuǎn)/min，離心10min，用移液器吸取上清液，放入EP管中，-80℃冰存，待用。

1.5 指標檢測

各組采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）檢測血清中VEGF的含量。

1.6 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（χ—±s）表示，采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件的單因素方差分析進行統(tǒng)計處理。

2 結(jié) 果

表1 各組大鼠腦缺血再灌注24h后血清中VEGF含量（χ—±s)

不同體質(zhì)大鼠在腦缺血再灌注24h后血清中VEGF均有表達，且3種體質(zhì)大鼠與假手術(shù)組比較，B組表達水平低，P＞0.05,不具有統(tǒng)計數(shù)意義；C、D兩組表達水平均較高，P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。不同體質(zhì)組大鼠組間比較，寒體組VEGF表達最低，與其他兩組比較存在明顯差異，P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。提示不同體質(zhì)SD大鼠腦缺血再灌注損傷后，血清中VEGF均有表達，寒體組VEFG表達水平明顯低于其他體質(zhì)組，說明寒體組大鼠預后較差。見表1。

3 討 論

血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是一種是高度保守的同源二聚體糖蛋白，由兩個亞基以二硫鍵相聯(lián)而成。它以特異的旁分泌方式作用于血管內(nèi)皮細胞[8]。其具有促使內(nèi)皮細胞增殖、遷移，誘導新生血管的生成，并可顯著增加微血管的通透性的功能。有研究表明當大鼠大腦缺血再灌注損傷后，可以誘導VEGF表達增強在梗死灶周圍可見VEGF免疫陽性著色血管，說明VEGF可以促進血管的增生[9]并能減輕缺血造成的神經(jīng)細胞損害[10]。

中醫(yī)理論認為疾病的發(fā)生與正氣盛衰有關(guān)?！端貑枴ご谭ㄕ摗贰罢龤獯鎯?nèi)，邪不可干?！倍龤馐怯审w質(zhì)產(chǎn)生，現(xiàn)代中醫(yī)研究表明體質(zhì)是發(fā)病的內(nèi)在依據(jù)，體質(zhì)的不同人群在腦卒中的發(fā)生率上存在明顯差異。在缺血性腦卒中的患者內(nèi)中醫(yī)體質(zhì)類型多以氣虛質(zhì)、陰虛質(zhì)和痰濕質(zhì)為多[11]。中醫(yī)理論認為“因人制宜”是根據(jù)不同個體的體質(zhì)特點，制定適宜的治療、預防、保健等措施。體質(zhì)對于個體而言具有獨特性。

本實驗通過探討不同體質(zhì)SD大鼠急性局灶性腦缺血再灌注后血清中VEGF的表達，試論不同體質(zhì)對實驗性大鼠腦缺血再灌注損傷后的恢復是否有一定的影響。通過實驗發(fā)現(xiàn)在不同體質(zhì)SD大鼠中，當腦缺血再灌注損傷24h后，寒體組的血清中VEGF的表達水平明顯低于其他體質(zhì)組表達水平?？梢酝茰y當寒體組大鼠發(fā)生腦缺血再灌注后，由于VEGF表達水平較低使得缺血區(qū)域內(nèi)新生血管數(shù)量減少不利于腦缺血再灌注后缺血區(qū)域的恢復。本實驗驗證了不同中醫(yī)體質(zhì)對疾病恢復存在差異。為從調(diào)節(jié)體質(zhì)角度達到對疾病預防治療目的，提供了一定的實驗基礎(chǔ)。

[1]靳琦,王琦.“辨體—辨病—辨證診療模式”的理論要素與臨床應用[J].北京中醫(yī)藥大學學報,2009,26(1):41-45.

[2]李曉輝,王雨波.淺談“辨體論治”[J].國醫(yī)論壇,2003,18(2):43.

[3]劉平.“病—證—效”結(jié)合研究的思考與探討[J].上海中醫(yī)藥大學學報,2007,2l(1):4-7.

[4]王萬群,杜慧萍.陰虛體質(zhì)與腦卒中的發(fā)病關(guān)系及其防治[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育,2009,7(12):178.

[5]匡調(diào) 元 .中醫(yī) 實 驗 病 理 學 [M].上 海 :上 海 科 學 普及 出版社 ,1995: 105-115.

[6]周小軍,安輝,田道法,等.寒熱證豚鼠變應性鼻炎細胞功能及形態(tài)學觀察[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2001,3(21):209-212.

[7]馬賢德,孫宏偉.腦缺血再灌注大鼠模型制備的實驗研究[J].中華中醫(yī)藥學刊,2009,6(1):39-41.

[8]朱 正,沈 虹,張海濤,等.血管內(nèi)皮 生長因子在 胰 腺 癌中的表 達及意義[J].中國血液流變學雜志,2003,13(4):357-358.

[9]陶陶,陳 莉 芬,胡長 林 ,等.大 鼠 局 灶 性 腦 缺 血再 灌 注 后VEGF及VEGF-mRNA的表達[J].重慶醫(yī)科大學學報,2005,30(2):210-212.

[10]曼淑梅,崔靜,王林,等.血管內(nèi)皮生長因子對大鼠腦缺血再灌注模型的神經(jīng)保護作用[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志,2005,15(15):2253-2255.

[11]張云云,張海梅,郭德瑩,等.168例缺血性腦卒中患7者體質(zhì)特點研究[J].上海中醫(yī)藥雜志,2008,42(2):31-34.

The Different of Constitution of SD Rats Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury Serum VEGF Expression

LIU Jian-wei
(2010 Postgraduate Course, Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Shenyang 110032, China)

ObjectiveTo investigate the different physical SD rats acute focal cerebral ischemia reperfusion serum VEGF expression.MethodsCold, Heat, Normal body 3 different physical build SD rat model, given the acute focal cerebral ischemia-reperfusion injury, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to detect different constitution rat brain ischemia after 24h of reperfusion the serum VEFG the expression.ResultsPhysique rats 24h after reperfusion serum VEGF expression in cerebral ischemia, three kinds the physique expression of rat VEFG in comparison with the sham group differences are significant (P＜0.05), cold constitution rats blood in the expression of VEGF and The other two physical rats, serum VEGF levels (P＜0.05).ConclusionThe physique SD rat brain after ischemia-reperfusion injury, serum VEGF expression, the cold body the group VEFG expression levels were significantly lower than that of other physical group, cold body of rats with poor prognosis.

Constitution; VEGF; Cerebral ischemia

R541

：B

：1671-8194（2013）10-0051-03