王云俊 牛清華

（山西醫(yī)科大學(xué)，山西 太原 030001）

Survivin和IL-8在乳腺癌組織中的表達(dá)及二者的相關(guān)性

王云俊 牛清華

（山西醫(yī)科大學(xué)，山西 太原 030001）

目的 探討乳腺癌組織中存活素（survivin）和白介素-8（IL-8）的表達(dá)情況及它們之間的相關(guān)性。方法 采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)52例乳腺癌組織中survivin和IL-8蛋白的表達(dá)情況，并分析它們之間的相互關(guān)系。結(jié)果 52例乳腺癌組織中survivivn的表達(dá)陽(yáng)性率為71.2%（37/52），IL-8的表達(dá)陽(yáng)性率為61.5%（32/52）。在32例IL-8表達(dá)陽(yáng)性的病例中survivin的陽(yáng)性表達(dá)率為87.5%（28/32），而在20例IL-8表達(dá)陰性的病例中survivin的陽(yáng)性表達(dá)率為55%（11/20）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理分析得出兩者具有相關(guān)性P＜0.001，相關(guān)系數(shù)r=0.365。結(jié)論 survivin 在乳腺癌組織中的表達(dá)與IL-8的表達(dá)呈正相關(guān)，提示survivin與IL-8在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中具有協(xié)同作用。

乳腺癌；免疫組織化學(xué)；survivin；IL-8

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一，病死率非常高。其發(fā)病率近年在世界范圍內(nèi)均呈上升趨勢(shì)，采取積極有效的防治措施以控制其發(fā)生發(fā)展成為當(dāng)務(wù)之急。本文的主要目的是通過檢測(cè)乳腺癌組織中的survivin和IL-8的表達(dá)情況并且分析這些基因蛋白之間的相互關(guān)系以及與臨床病理之間的關(guān)系來探討survivin和IL-8在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為治療腫瘤的藥物作用靶點(diǎn)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般材料

本實(shí)驗(yàn)所用的材料均來自山西醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院2009年8月-2011年8月有完整病例資料經(jīng)手術(shù)切除的乳腺癌標(biāo)本共52例，發(fā)病年齡38～75歲，均為浸潤(rùn)性非特殊癌，術(shù)前均未接受過非甾體類抗炎藥（NSAIDs）治療和放化療。所有組織經(jīng)4%甲醛溶液固定，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，常規(guī)HE染色，光鏡下觀察，病理明確診斷。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

Survivin兔抗人多克隆抗體、IL-8兔抗人單克隆抗體以及DAB顯色試劑盒均購(gòu)自于北京中杉金橋試劑公司，免疫組化染色試劑盒（SP-1020）購(gòu)于武漢博士德試劑公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

采用免疫組織化學(xué)染色S-P法檢測(cè)survivin和IL-8在乳腺癌組織中的表達(dá)情況。具體操作步驟按照S-P試劑盒操作說明來進(jìn)行，用已知陽(yáng)性標(biāo)本作陽(yáng)性對(duì)照，用PBS代替一抗作陰性對(duì)照；觀察survivin及IL-8在乳腺癌組織中免疫組化染色情況。

1.4 結(jié)果判定

Survivin的陽(yáng)性著色位于細(xì)胞漿或細(xì)胞核。參照文獻(xiàn)[1]采用半定量積分法進(jìn)行結(jié)果判定：400倍光鏡下連續(xù)觀察5個(gè)高倍視野，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜5%為0分，5%～25%為l分，25%～50%為2分，50%～75%為3分，＞75%為4分。染色強(qiáng)度評(píng)分：無染色為0分，淡黃色為1分，黃或深黃色為2分，褐色或棕褐色為3分。兩項(xiàng)積分相乘＞4分為陽(yáng)性。IL-8陽(yáng)性反應(yīng)為胞漿呈棕黃色染色，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜或等于10%為陰性，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞10%為陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)資料均采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，各組間數(shù)據(jù)及率的比較進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 Survivin和IL-8在乳腺癌組織中的表達(dá)

survivin在乳腺癌組織中陽(yáng)性著色定位于細(xì)胞漿或細(xì)胞核。52例乳癌組織中陽(yáng)性表達(dá)37例、陰性表達(dá)15例，陽(yáng)性率為71.2%。IL-8在乳腺癌石蠟切片中陽(yáng)性著色定位于細(xì)胞漿。52例乳癌組織中陽(yáng)性表達(dá)32例，陰性表達(dá)20例，陽(yáng)性率為61.5%。

2.2 Survivin和IL-8在乳腺癌組織中的表達(dá)與臨床病理的關(guān)系

見表1。

表1 Survivin和IL-8在乳腺癌組織中的表達(dá)與臨床病理的關(guān)系

2.3 Survivin與IL-8在乳腺癌組織中表達(dá)情況之間的關(guān)系

在IL-8表達(dá)陽(yáng)性的乳腺癌患者中survivin陽(yáng)性表達(dá)率為87.5%，而在IL-8表達(dá)陰性的乳腺癌患者中survivin陽(yáng)性表達(dá)率為55%，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理兩者具有顯著相關(guān)性（P＜0.001），相關(guān)系數(shù)：r=0.365。

3 討 論

Survivin屬于凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族中的一個(gè)新成員，除了具有很強(qiáng)的抗凋亡作用之外，它還參與細(xì)胞的增殖、分裂以及細(xì)胞周期的調(diào)控有關(guān)[2]。Survivin主要表達(dá)于胚胎和發(fā)育中的胎兒組織，在成人終末分化組織（除了睪丸、胎盤和胸腺）通常不表達(dá)，而在多種惡性腫瘤組織（如乳腺癌、肺癌、胃癌、卵巢癌、膀胱癌、結(jié)腸癌等）中異常高表達(dá)。主要是通過直接或間接抑制Caspase3和Caspase7的活性而阻斷細(xì)胞的凋亡過程[3]。被認(rèn)為是第一個(gè)直接將凋亡與細(xì)胞惡性度關(guān)聯(lián)在一起的分子，具有多重功能，不僅能夠抑制細(xì)胞凋亡還能啟動(dòng)細(xì)胞增殖，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期。在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中survivin的過表達(dá)促使S期核轉(zhuǎn)運(yùn)加速，幫助細(xì)胞逃避細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)，加快向S期轉(zhuǎn)換，抑制G1期阻滯，通過調(diào)控有絲分裂促進(jìn)轉(zhuǎn)化細(xì)胞異常增殖[4]。Survivivn在正常人組織中是一個(gè)“關(guān)閉”的基因，在腫瘤組織中被激活而參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。而且，不同組織中的作用機(jī)制不同，因此被看作腫瘤相關(guān)因子[5]。

IL-8是一種具有多功能、多細(xì)胞來源的趨化性細(xì)胞因子，在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮十分重要的作用。近年來發(fā)現(xiàn)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[6]，可刺激腫瘤細(xì)胞增殖誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞移動(dòng)，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移[7].關(guān)于IL-8基因表達(dá)的調(diào)節(jié)，主要集中于其在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。在IL-8啟動(dòng)子上有兩個(gè)區(qū)域?qū)L-8的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)非常重要，它們分別是遠(yuǎn)端結(jié)合AP-1的位點(diǎn)和近端結(jié)合NF-κB及NF-IL-6的位點(diǎn)。在靜息狀態(tài)的情況下，NF-κB 二聚體通過與其抑制物 IκB以非共價(jià)結(jié)合無活性的三聚體形式存在于細(xì)胞漿。當(dāng)在其受到細(xì)胞外信號(hào)刺激時(shí)，與細(xì)胞膜受體特異性結(jié)合并改變受體的空間構(gòu)象，從而激活NIK，NIK再進(jìn)一步激活I(lǐng)KKs，后者可使無活性的三聚體中的IκBN 端兩個(gè)保守的Ser 殘基磷酸化。IκB的磷酸化的結(jié)果導(dǎo)致其N端第21位和22位賴氨酸殘基通過泛素連接酶與多個(gè)泛素分子共價(jià)結(jié)合。經(jīng)過磷酸化和泛素化以后，IκB的構(gòu)象被改變并被ATP依賴性的26S蛋白酶體識(shí)別并降解，從而使受 IκB 抑制的NF-κB釋放出來，并成為有活性的二聚體形式進(jìn)而轉(zhuǎn)位到胞核，與IL-8基因上的κB序列特異性結(jié)合后上調(diào)IL-8基因的表達(dá)[8,9]進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞的增殖。

通過誘導(dǎo)TNF受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中NF-κB誘導(dǎo)survivin表達(dá)，而survivin大量表達(dá)可降解IκB，解除I-κB對(duì)NF-κB活性的抑制，使細(xì)胞免于凋亡。NF-κB的亞單位轉(zhuǎn)活化的異位表達(dá)可誘導(dǎo)促癌基因c-myc啟動(dòng)區(qū)的激活，p50主要參與基因啟動(dòng)子增強(qiáng)子κB序列特異性結(jié)合[10]，p65轉(zhuǎn)錄調(diào)控survivin的表達(dá)[11]，抑制caspase-3和caspase-7的活性，從而阻斷細(xì)胞凋亡，共同參與腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展過程。很多研究發(fā)現(xiàn)survivin及IL-8均具有明顯的促腫瘤血管生成的作用，而血管的生成在乳腺癌的發(fā)生、浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移過程起到重要作用。由此可推測(cè)：二者在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中可能是通過紛繁交錯(cuò)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)發(fā)揮作用。

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1671-8194（2013）19-0231-02