邢 娟王潤潤

（1 南陽市中心醫(yī)院，河南 南陽 473000；2 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453003）

三七皂甙Rb對實驗性腦梗死大鼠全血碳氧血紅蛋白的影響

邢 娟1王潤潤2

（1 南陽市中心醫(yī)院，河南 南陽 473000；2 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453003）

目的 研究三七皂甙Rb1對大鼠腦梗死后全血碳氧血紅蛋白及梗死面積的影響。方法 采用SD雄性大鼠，通過栓塞大腦中動脈并于1h后再灌注復(fù)制局灶性缺血再灌注損傷模型。通過生化檢測、免疫組織化學(xué)染色等方法觀察腦缺血再灌注損傷后全血碳氧血紅蛋白(COHb)含量以及不同劑量的三七皂甙Rb1對COHb的含量等方面的影響。結(jié)果 ①腦缺血再灌注損傷后，模型組的全血碳氧血紅蛋白含量顯著高于假手術(shù)組（P＜0.05），并在再灌注24h達(dá)到一個高峰。②給予中劑量三七皂甙Rb1（10mg/kg）與模型組相比可顯著升高腦缺血再灌注損傷后全血碳氧血紅蛋白含量（P＜0.05）。結(jié)論 大鼠腦缺血再灌注損傷后全血碳氧血紅蛋白含量顯著升高。三七皂甙Rb1通過增加COHb含量改善腦缺血再灌注后的腦損傷，并減小腦梗死的體積。本研究為今后對腦梗死的治療和科研可能提供了一個嶄新的思路。

三七皂甙Rb1；大鼠；腦梗死；全血碳氧血紅蛋白

腦血管病在世界和我國都屬于三大死亡原因之一，具有發(fā)病率高、致殘率高和病死率高的“三高”特點[1]。常規(guī)的西藥治療往往會產(chǎn)生很多不良反應(yīng)，而中藥具有不良反應(yīng)小、從根本上治愈疾病等優(yōu)點，所以從祖國傳統(tǒng)中藥寶庫中開發(fā)治療腦血管疾病的藥物具有非常重大的意義。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗動物：10周齡Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠，體質(zhì)量250～300g，清潔級。由新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。儀器與試劑：C Eclipse E200顯微鏡（日本Nikon公司）；微量加樣器（德國eppendorf公司）；三七皂甙Rb1（中國藥品生物制品檢定所）等。

1.2 方法

選用SD大鼠80只，動物在實驗前稱重，再按照隨即化的方法分為3組，每組20只。具體分組為：模型+生理鹽水組（下文均簡稱模型組）、三七皂甙Rb1低劑量組（下文均簡稱低劑量組）、三七皂甙Rb1中劑量組（下文均簡稱中劑量組）、三七皂甙Rb1高劑量組（下文均簡稱高劑量組）。

選用日本進(jìn)口魚線[2,3]。將3頭端燒成一光滑圓球，直徑在0.22mm左右，千分尺篩選。圓球制成后在距頭端5、16～18和20～22 mm處進(jìn)行標(biāo)記，浸泡于體積分?jǐn)?shù)0.75的乙醇中備用。

CO含量的間接測定（全血碳氧血紅蛋白含量測定）采用雙波長定量測定，參照樂宏元等[4]方法，新鮮血標(biāo)本加入Na2S2O4，使樣品中多組分血紅蛋白轉(zhuǎn)化Hb和COHb 2個組分，在紫外分光光度計上，用420nm和432nm兩個波長測定吸光度，依比爾定律建立綜合方程式，求出全血COHb百分比(代表內(nèi)源性CO水平)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 腦缺血再灌注損傷后各時間點大鼠全血COHb含量變化，發(fā)現(xiàn)與假手術(shù)組的相應(yīng)時間點血COHb含量相比，模型組大鼠血中COHb含量顯著升高，進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)比較均有顯著性差異（P＜0.05）。見表1。對于模型灌注24h時間點達(dá)到一個峰值，然后再降低的趨勢。這提示我們在缺血再灌注損傷后24h時間點觀測COHb含量是比較靈敏的。

2.2 三七皂甙Rb1對大鼠腦缺血再灌注損傷后全血COHb含量的影響在大鼠腦缺血再灌注損傷24h后，從心臟取血進(jìn)行全血COHb含量的檢測，發(fā)現(xiàn)給予高、中、低劑量的三七皂甙Rb1，其血液中COHb含量均高于模型組的水平，且比較具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。統(tǒng)計學(xué)比較分析發(fā)現(xiàn)只有中劑量組的COHb含量顯著高于其他兩種劑量（P＜0.05），而高、低劑量組之間得差異無顯著性。

表 大鼠腦缺血再灌注損傷后不同時間點全血COHb含量（n=8）

3 討 論

腦血管疾病是嚴(yán)重危害人類健康的主要疾病之一。我國腦血管病病死率遠(yuǎn)高于心臟病及癌癥，其中缺血性腦血管疾病占60%～80%[5]。腦血管病具有發(fā)病率高、致殘率高、病死率高的特點，是威脅人類尤其是中老年人健康的常見病、多發(fā)病。因而對缺血性腦血管病的治療一直是臨床和基礎(chǔ)研究的重要內(nèi)容。

3.1 大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷過程中腦血流量變化及全血碳氧血紅蛋白(COHb)含量變化。線栓法建立大鼠大腦中動脈阻塞模型不需開顱，創(chuàng)傷較小，特別適合局灶性腦缺血再灌注損傷的研究[6,7]。我們的實驗研究中，選擇腦缺血再灌注損傷后以CO及其合成酶做為關(guān)注的焦點，這種內(nèi)源性CO對生物體功能的維持是必不可少的，它能夠影響中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)的功能。CO還可通過直接調(diào)節(jié)K+離子通道的活性傳遞生理信息[8]。Brain等[9]發(fā)現(xiàn)CO能使大腦中動脈產(chǎn)生擴(kuò)張，擴(kuò)張程度與CO濃度有關(guān)。CO可通過活化可溶性鳥苷酸環(huán)化酶，抑制血小板聚集，從而降低血黏度，改善微循環(huán)。但是血紅素氧合酶作為CO的體內(nèi)唯一生成酶，在缺血再灌注損傷后產(chǎn)生CO變化是可以反映的，所以我們可以推測這些酶在缺血再灌注損傷后的活性和表達(dá)上均會有相應(yīng)的改變的。

3.2 三七皂甙Rb1對大鼠腦缺血再灌注損傷的影響。三七主要成分包括三七總皂甙（PNS）、三七素、黃酮、揮發(fā)油、氨基酸、糖類及各種微量元素等，具有改善心肌缺血、降血脂、降血壓、抗血栓、抗休克、抗纖維化活性、抗炎、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、降血糖、抗衰老、增強(qiáng)免疫力等多方面的作用[10]。其中三七的單體Rb1、Rb2、Rc、Re、Rg等成分均與活血功能有關(guān)，在這些單體中三七皂甙Rb1又是含量較高的成分，而且近年的研究發(fā)現(xiàn)三七皂甙Rb1的腦保護(hù)功能是多方面的。而我們的實驗表明給予三七皂甙Rb1后，內(nèi)源性CO生成增加了，同時檢測到海馬中HO-1活性的升高，這些數(shù)據(jù)提示我們，合適劑量的三七皂甙Rb1所產(chǎn)生的腦梗死體積減小和神經(jīng)功能缺損減弱這些現(xiàn)象，這些現(xiàn)象在三七皂甙Rb1抗腦缺血再灌注損傷的機(jī)制方面給予我們新的啟發(fā)。

[1] 王東吉,武凡.三七皂甙單體Rb1對大鼠腦缺血再灌注時腦細(xì)胞凋亡及cPLA2蛋白表達(dá)的影響[J].中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志,2007,22 (5):414.

[2] 徐佳,葛林寶,徐鳴曙,等.大鼠栓線法MCAO模型中栓線插入深度的研究[J].上海實驗動物科學(xué),2002,22(4):209-212.

[3] 李萌,裘明德,康篤倫.大鼠可恢復(fù)血流的局部腦缺血模型的研究[J].蘭州大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版,1990,16(2):768.

[4] 樂宏元,宋小興,劉和平.一氧化碳血紅蛋白雙波長定量測定[J].臨床檢驗雜志,1996,14(2):87-88.

[5] 包金風(fēng),張曉文,盧新政,等.參三七皂甙Rb1、Rg1預(yù)適應(yīng)對肥厚心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷細(xì)胞凋亡的影響[J].甘肅醫(yī)藥,2010,29 (2):121-124.

[6] Prieto R,Carceller F,Roda JM,et al.The intraluminal thread model revisited: rat stain differences in local cerebralblood flow[J]. Neurol Res,2005,27(1): 47-52.

[7] 謝惠芳,徐如祥,陳中燦.線栓法制作大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型的改進(jìn)[J].中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志,2007,6(4): 340-342.

[8] Prabhakar NR,Dinermen JL,Again FH,et al.Carbon monoxide:a role in carotid body chemoreception[J].Proc Natl Acad Sci USA, 1995,92(6):1994.

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[10] 李曉宇,郝海平,王廣基,等.三七總皂苷多效應(yīng)成分整合藥代動力學(xué)研究[J].中國天然藥物,2008,6(5):377-381.

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1671-8194（2013）20-0084-02