王慧娟，任翠愛，張鵬

(1.濰坊醫(yī)學(xué)院;2.濰坊醫(yī)學(xué)院附屬濰坊市人民醫(yī)院，山東 濰坊 261000)

急性髓細(xì)胞白血病(acute myeloid leukemia，AML)是發(fā)生于血液系統(tǒng)的惡性腫瘤，因髓系白血病細(xì)胞惡性克隆性增殖而使骨髓正常造血受抑制。其異質(zhì)性常常表現(xiàn)為不同的細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫表型及細(xì)胞遺傳學(xué)類型。識(shí)別這些特點(diǎn)對(duì)患者選擇治療方案及判斷預(yù)后等提供重要依據(jù)。本研究采用三色流式細(xì)胞術(shù)和CD45 /SSC 設(shè)門對(duì)91 例AML患者進(jìn)行分析，探討其免疫表型特點(diǎn)及與細(xì)胞遺傳學(xué)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 病例資料

所選病例主要為2011 年3 月至2012 年10 月濰坊醫(yī)學(xué)院附屬濰坊市人民醫(yī)院住院的初治成人AML 患者共91 例。其中男性54 例，女性37 例，年齡18～76 歲，中位年齡43.5 歲，按FAB 分型標(biāo)準(zhǔn)，M112 例，M223 例，M330例，M418 例，M56 例，M62 例，所有患者均在治療前行骨髓細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)檢查，66 例(72.5%)行染色體核型分析。

1.2 免疫表型

取治療前患者骨髓2 mL，肝素抗凝，采用單克隆抗體四色直接免疫熒光和流式細(xì)胞儀測(cè)定。所用單抗包括髓系CD11b、CD13、CD14、CD15、CD33、CD117、MPO，淋系CD7、CD10、CD19、CD56，干/祖 細(xì) 胞 系CD34、CD38、HLA－DR。所用FACS Calibur 流式細(xì)胞儀及McAb 單抗均購自美國Becton Dickison 公司。結(jié)果以髓系抗原陽性細(xì)胞≥20%、胞漿抗原MPO≥10%為陽性標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 核型分析

取治療前患者骨髓3 mL，肝素抗凝，采用24 h 培養(yǎng)法常規(guī)制備染色體標(biāo)本，G 顯帶處理，100 倍油鏡下至少分析20 個(gè)中期分裂細(xì)胞，根據(jù)《國際人類細(xì)胞遺傳學(xué)命名法》(ISCN 1995)命名核型。

1.4 治療方案

AML (非M3)患者誘導(dǎo)緩解采用蒽環(huán)類藥物聯(lián)合阿糖胞苷(Ara－C)，蒽環(huán)類藥物根據(jù)患者年齡及經(jīng)濟(jì)狀況選用柔紅霉素(D)或去甲氧柔紅霉素(I)或高三尖杉酯堿(H)，鞏固及強(qiáng)化治療給予上述方案及中劑量阿糖胞苷循環(huán)應(yīng)用。M3 患者誘導(dǎo)緩解采用三氧化二砷聯(lián)合全反式維甲酸，鞏固及強(qiáng)化治療同AML (非M3)患者，誘導(dǎo)緩解后判斷完全緩解(CR)和未緩解(NR)，參考張之南主編的《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》［1］。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用卡方檢驗(yàn)或Fisher 確切概率法檢驗(yàn)，以P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 免疫表型

91 例髓系白血病患者中，各FAB 亞型具體的免疫表型特征見表1，主要抗原表達(dá)情況如下:CD33、CD13、MPO、CD117 表達(dá)最常見，分別達(dá)90.1%、87.9%、83.6%、83.5%，干/祖細(xì)胞標(biāo)記CD38、HLA－DR、CD34 表達(dá)率分別為82.4%、59.3%、47.3%。30 例M3 患者中只有1 例表達(dá)CD34，均無HLA－ DR 表達(dá)。CD14 表達(dá)僅見于M4、M5，分別為22.2%和50.0%，CD15 在M4、M5 中最常見，表達(dá)分別高達(dá)57.1%、60.0%，其陽性率明顯高于M2，兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.005，0.03)。淋系標(biāo)志中，CD7 是最常表達(dá)的淋系標(biāo)志，占24.2%，其次是CD19 (12.1%)，CD10 表達(dá)較少見。CD56 在M5 患者中陽性率最高，達(dá)50.0%，其次為M2、M1、M4。

表1 91例AML 患者各FAB 亞型免疫分型表達(dá)情況

2.2 細(xì)胞遺傳學(xué)

91 例患者中，可供核型分析者66 例(72.5%)，核型異常者52 例(78.8%)，52 例核型異常者，13 例t (8;21)異常者10 例見于M2 患者，2 例見于M4 患者，1 例見于M5 患者，26 例t (15;17)異常者均見于M3 患者，1例inv (16)異常者見于M4EO 患者，具體核型特征見表2。

2.3 免疫表型與細(xì)胞遺傳學(xué)的關(guān)系

染色體為t (8;21)的M2 中和染色體為t (15;17)的M3 中CD7 陽性表達(dá)約占2.8% (1/36)，明顯低于其它染色體異常的CD7 的陽性率68.8% (11/16)(P ＜0.05)。22 例表達(dá)CD7 抗原的AML，化療后7 例獲完全緩解，并均于緩解后1～6 個(gè)月內(nèi)復(fù)發(fā)。

表2 66例AML 患者染色體核型

3 討 論

近幾十年，隨著免疫表型檢測(cè)的廣泛應(yīng)用，免疫表型及其與遺傳學(xué)和細(xì)胞形態(tài)學(xué)的關(guān)系得以深刻研究［2］。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行免疫學(xué)分型并結(jié)合細(xì)胞遺傳學(xué)檢測(cè)已成為提高診斷正確率、臨床個(gè)體化治療及判斷預(yù)后的主要依據(jù)。本研究對(duì)91 例AML 患者的免疫表型特征進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示CD33、CD13、MPO、CD117 最常見，干/祖細(xì)胞標(biāo)記CD38 在各亞型中及HLA－DR、CD34 在非M3 患者中表達(dá)也較高，這與干/祖細(xì)胞標(biāo)記隨著細(xì)胞的成熟其抗原表達(dá)逐漸減弱有關(guān)。

M3 患者高表達(dá)CD13 和CD33，均為100%，與Hayden［3］等報(bào)道一致。30 例M3 患者只有1 例表達(dá)CD34，缺乏HLA－DR 表達(dá)，且僅有的1 例表達(dá)CD34 的M3 患者首次誘導(dǎo)未達(dá)完全緩解，緩解后于11 w 復(fù)發(fā)，可能與CD34在M3 中表達(dá)導(dǎo)致臨床不良預(yù)后相關(guān)［4］。

CD14 是單核細(xì)胞特異性標(biāo)記，本研究病例中CD14 僅見于M4 和M5，陽性率為分別為22.2%和50%。CD14 主要表達(dá)于成熟單核細(xì)胞表面，不表達(dá)于原始單核細(xì)胞表面，所以CD14 雖是單核細(xì)胞較特異性標(biāo)志，但往往敏感性不高。故應(yīng)結(jié)合細(xì)胞形態(tài)學(xué)及遺傳學(xué)綜合判斷。

淋系抗原的表達(dá)也較常見于AML 的免疫表型中。淋系標(biāo)志中，CD7 對(duì)AML 治療、預(yù)后等各方面的影響一直存在爭(zhēng)議。本研究發(fā)現(xiàn)，(1)CD7 最常表達(dá)，占24.2%，其次是CD19 (12.1%)，CD10 表達(dá)較少見;(2)CD7 表達(dá)較少見于伴有t (8;21)的M2 和t (15;17)的M3 等預(yù)后好的核型中，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與Kornblau［5］等發(fā)現(xiàn)CD7陽性表達(dá)極少出現(xiàn)在預(yù)后好的核型如t (8;21)，inv (16)及t (15;17);(3)表達(dá)CD7 的AML 患者CR 率低于不表達(dá)CD7 的AML CR 率，兩者有顯著性差異 (27.3% vs 72.5%，P ＜0.05)。由此推測(cè)CD7 可能是獨(dú)立的危險(xiǎn)因素。CD56 屬于細(xì)胞黏附分子家族，是最先發(fā)現(xiàn)的自然殺傷細(xì)胞的標(biāo)志，后來又發(fā)現(xiàn)在一些包括AML 和淋巴系統(tǒng)的惡性腫瘤中陽性表達(dá)。其可能作用為介導(dǎo)細(xì)胞至細(xì)胞和參與細(xì)胞毒作用［6－7］，在白血病患者病情發(fā)生、發(fā)展中起重要的作用。本研究中，CD56 陽性表達(dá)占19.5% (15/77)，CD56 陽性表達(dá)與CD56 陰性表達(dá)比較，兩者完全緩解率(CR)無顯著差別(P ＞ 0.05)。而Irena［6］2077－2082等報(bào)道CD56 陽性表達(dá)與CR 無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與CD56 抗原主要表達(dá)在正常的單核細(xì)胞和單核細(xì)胞衍生的細(xì)胞表面，而單核白血病一般預(yù)后較差有關(guān)［8］。

13 例t (8;21)異常者10 例見于M2 患者，2 例見于M4 患者，1 例見于M5 患者，其中附加染色體異常占t (8;21)3 例，占23.1%，低于賴悅云［9］等報(bào)道62.5%，可能與本研究病例少有關(guān)。3 例附加染色體為del (9)(q13q21)/ del (9) (q12q32)/－Y。Schoch［10］等曾提出附加del (9q)是t (8;21)(q22;q22)AML 預(yù)后不良的標(biāo)志之一。

免疫表型分析結(jié)合細(xì)胞遺傳學(xué)可近一步為白血病的診斷分型、個(gè)體化治療、判斷預(yù)后等各方面提供有價(jià)值的依據(jù)，兩者的相關(guān)性提示某些抗原的陽性表達(dá)可能與染色體核型的異常改變密切相關(guān)。

［1］張之南，沈悌.血液病診斷與療效標(biāo)準(zhǔn)［M］.第3 版.北京:科學(xué)出版社，2007:132－133.

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