劉福元，張云峰，王海萍，劉華，楊旭民

（1.新疆農(nóng)墾科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，新疆石河子832000；2.新疆新農(nóng)乳業(yè)有限責(zé)任公司，新疆阿克蘇843015；3.新疆兵團農(nóng)四師畜牧獸醫(yī)站，新疆伊寧835000）

奶牛子宮內(nèi)膜炎病料細菌的分離及藥敏試驗

劉福元1，張云峰1，王海萍2，劉華2，楊旭民3

（1.新疆農(nóng)墾科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，新疆石河子832000；2.新疆新農(nóng)乳業(yè)有限責(zé)任公司，新疆阿克蘇843015；3.新疆兵團農(nóng)四師畜牧獸醫(yī)站，新疆伊寧835000）

選阿克蘇地區(qū)某牛場患臨床型子宮內(nèi)膜炎奶牛6頭，采子宮分泌物進行細菌的分離、純化、染色鏡檢，并自制藥敏紙片，對分離的細菌進行藥物敏感試驗。結(jié)果顯示：分離的主要細菌為鏈球菌、葡萄球菌和大腸桿菌。分離的3種菌對鹽酸林可霉素和諾氟沙星均高度敏感，可作為該牛場子宮內(nèi)膜炎治療藥物的選擇參考。

奶牛子宮內(nèi)膜炎；細菌分離；藥敏試驗

奶牛子宮內(nèi)膜炎是牛場的一種常見病，主要引起奶牛不孕，延長產(chǎn)間距，從而導(dǎo)致養(yǎng)殖經(jīng)濟效益下降。很多研究表明，引起子宮內(nèi)膜炎的主要原因是微生物的感染，包括細菌、真菌、支原體、病毒等。細菌的感染在奶牛子宮內(nèi)膜炎的發(fā)生中起著最重要的作用[1]。導(dǎo)致奶牛子宮內(nèi)膜炎的細菌復(fù)雜多樣，在生產(chǎn)中由于長期大量使用同類抗生素，使致病菌產(chǎn)生耐藥性，增加了治療的難度。筆者根據(jù)基層奶牛場現(xiàn)有的診斷條件，對患有子宮內(nèi)膜炎的奶牛宮內(nèi)分泌物進行了細菌的分離培養(yǎng),并自制了藥敏紙片，對分離的主要細菌進行藥敏試驗，旨在為奶牛場治療該病篩選高敏藥物，達到較好的治療效果。

1 材料及方法

1.1 藥敏紙片的制作

試驗所使用的藥物有8種，分別是青霉素G、鏈霉素、鹽酸林可霉素、諾氟沙星、土霉素、卡那霉素、慶大霉素、磺胺嘧啶鈉。按照杭州天和微生物試劑有限公司產(chǎn)品的常用抗生素紙片含藥量,進行藥物濃度計算與稀釋。

制備好的干燥藥敏紙片分裝在小瓶內(nèi)密封，放干燥器中低溫保存?zhèn)溆?，有效?-6個月。

1.2 病料采集與細菌分離

阿克蘇地區(qū)某牛場，經(jīng)臨床確診患子宮內(nèi)膜炎的奶牛6頭，采集其子宮分泌物。先用溫水沖洗患牛陰戶,再用高錳酸鉀溶液清洗消毒，然后按直腸把握法通過滅菌輸精管先給子宮注入10 mL滅菌生理鹽水,再抽取子宮分泌物1~2 mL，及時送實驗室用于細菌分離。

將子宮內(nèi)膜炎病料用劃線法分別接種于普通瓊脂、血平板、麥康凱瓊脂、SS瓊脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)16～18 h。觀察各種培養(yǎng)基上菌落形態(tài)，同時對不同形態(tài)的單個菌落進行革蘭氏染色鏡檢，觀察細菌形態(tài)。同時對病料直接涂片染色，觀察細菌形態(tài)，與培養(yǎng)物染色對比，找出優(yōu)勢菌。最后分別挑取單個菌落接種到普通營養(yǎng)肉湯中培養(yǎng)，以備藥敏試驗使用。

1.3 藥敏試驗

將每種細菌培養(yǎng)物用生理鹽水稀釋，使其渾濁度相當(dāng)于0.5麥氏比濁管。用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液均勻致密涂布于M-H培養(yǎng)基表面。用無菌鑷子取不同藥敏片貼到培養(yǎng)基表面。直徑為90 mm的平皿貼紙片7張，兩紙片中心距離不少于24 mm，紙片與平皿邊不少于15 mm，藥敏紙片一旦接觸平板即不再移動。記錄每種藥敏片的名稱。4℃作用2 h后置37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24 h后取出，測量抑菌圈直徑。

每種細菌做4個重復(fù)。觀察紙片周圍有無抑菌圈，測量其直徑的大小，計算其平均值，并按照葛兆宏主編《動物微生物》藥敏試驗判定標準判定最后試驗結(jié)果[2]。

2 結(jié)果

2.1 細菌的分離培養(yǎng)

采集的病料進行細菌分離培養(yǎng)，通過分離細菌的菌落形態(tài)和革蘭氏染色特征（表1），初步分析認為，本奶牛場子宮內(nèi)膜炎病料中的主要細菌有3種，分別是鏈球菌、葡萄球菌和大腸桿菌。

2.2 細菌藥敏試驗結(jié)果分析

分離的三種主要菌重復(fù)進行藥敏試驗測量的每種藥物抑菌圈的直徑，按照標準判定結(jié)果為（表1）：鏈球菌對鹽酸林可霉素和諾氟沙星高度敏感，對土霉素、卡那霉素、慶大霉素及磺胺嘧啶鈉敏感，對青霉素G、鏈霉素不敏感。葡萄球菌對鹽酸林可霉素、諾氟沙星和磺胺嘧啶鈉高度敏感，對卡那霉素、鏈霉素和慶大霉素敏感，對青霉素G和土霉素不敏感。大腸桿菌對鹽酸林可霉素、諾氟沙星及卡那霉素高度敏感，對土霉素、慶大霉素及磺胺嘧啶鈉敏感，對青霉素G、鏈霉素不敏感。最終可以選擇鹽酸林可霉素和諾氟沙星兩種藥物應(yīng)用于患子宮內(nèi)膜炎的奶牛治療。

表1 三種細菌藥敏試驗結(jié)果 mm

3 討論

本試驗對奶牛子宮內(nèi)膜炎病料分離到細菌菌落形態(tài)觀察和涂片染色結(jié)果，認為該牛場奶牛子宮內(nèi)膜炎病料中的主要細菌有鏈球菌、葡萄球菌及大腸桿菌，與徐耀基（1998）[3]、孔祥峰（2005）[4]、楊克禮(2008)[5]、陳星（2010）[6]等報道的結(jié)果相一致，與李有文等[1]對新疆阿克蘇地區(qū)某牛場的20頭子宮內(nèi)膜炎奶牛分離出的大腸桿菌(占53.1%)和科氏葡萄球菌(占38.2%)以及干燥棒狀桿菌、亞利桑那沙門菌、魯氏不動桿菌等不完全一致，這可能是由于不同牛場主要致病菌群不同，也可能是本試驗采集的患牛的頭數(shù)較少的原因。

藥敏試驗結(jié)果表明，鹽酸林可霉素和諾氟沙星對三種分離的致病菌均高度敏感，可作為該牛場治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的首選藥物。青霉素G、鏈霉素、土霉素、卡那霉素、慶大霉素、磺胺嘧啶鈉等藥物的抑菌效果相對較差，可能與其長期使用這些藥物而產(chǎn)生耐藥性有關(guān)。李有文等[1]藥敏試驗認為慶大霉素和妥布霉素對所分離的病原菌普遍有較好的抑制作用，這可能是由于不同牛場使用的抗生素不同及所產(chǎn)生的耐藥性不同，細菌種類不同，試驗所用的藥物也不完全相同所致。這進一步說明各牛場子宮內(nèi)膜炎中的細菌種類及其對藥物的敏感性都不盡相同，也提示我們在藥物治療類似病例時，不能一味地套用別的牛場的試驗結(jié)果或治療經(jīng)驗。

本試驗所采集的病料，均來自從澳大利亞引入的荷斯坦奶牛的后代，在澳大利亞奶?；径紝嵭蟹拍粒M入國內(nèi)實行圈養(yǎng)，使得奶牛產(chǎn)前普遍存在運動不足，營養(yǎng)物質(zhì)過剩的現(xiàn)象，導(dǎo)致母體過肥，胎兒過大，難產(chǎn)率加大，人工助產(chǎn)，常常引起產(chǎn)道損傷及感染，加上環(huán)境不潔，患子宮內(nèi)膜炎的幾率加大。李正國等調(diào)查顯示48.05%的子宮內(nèi)膜炎患病與人工助產(chǎn)有關(guān)[7]，因此合理配制圍產(chǎn)前期日糧，加強產(chǎn)房及運動場的環(huán)境衛(wèi)生，正確助產(chǎn)，實行嚴密的產(chǎn)后生殖監(jiān)護，是降低奶牛子宮內(nèi)膜炎的關(guān)鍵。

[1]李有文，劉孝杰，陶大勇.奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌分離鑒定及藥敏試驗[J].畜牧與獸醫(yī),2011,43(1):16-19.

[2]葛兆宏編.動物微生物[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2001,155-167.

[3]徐耀基.奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌藥敏試驗[J].中國奶牛,1998，(4):42-43.

[4]孔祥峰,劉志剛.南京某奶牛場子宮內(nèi)膜炎病原菌分離鑒定及藥敏試驗[J].中國獸醫(yī)雜志,2005,4(8): 21-22.

[5]楊克禮,徐滌平.奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌藥敏試驗[J].甘肅畜牧獸醫(yī),2008,203(6):2-3.

[6]陳星,胡松華.奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗[J].中國獸醫(yī)雜志,2010,46(1):43-44.

[7]李正國,羅瑞卿.新疆石河子市及周邊地區(qū)奶牛子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病規(guī)律調(diào)查[J].中國奶牛,2009,(6): 35-38.

Isolation and Drug Sensitivity Test of Pathogenic Bacteria Causing Cow Endometritis

LIU Fu-yuan1，ZHANG Yun-feng1，WANG Hai-ping2，LIU Hua2，YANG Xu-min3
（1.Husbandry and Veterinary Institute,Xinjiang Academy of Agricultural and Reclamation Science,Shihezi 832000，China;2.Akzo Sunon Dairy Products Co.,Ltd，Akzo 843015,China; 3.Husbandry and Veterinary Station,No.4 farming Division in Xinjiang Production and Construction Corps, Yining 835000,China）

6 cows suffered from endometritis in Aksu were selected and the pathogens were isolated and examined with smear Gram stain from the uterine secretions．A drug sensitive test was performed for pathogenic bacteria with self-made susceptibility paper.The results indicated that the main species of isolated bacteria were Streptococcus,Staphylococcus and E.coli.The drug susceptibility test results showed that Lincomycin hydrochloride and norfloxacin were highly sensitive against the isolated three pathogens and could be used as the preferred drugs for the treatment of cow endometritis in the cattle farm．This study was aimed to take advantage of the existing condition in cattle farm,and screen out high-sensitivity drugs for the treatment of cow endometritis,and promote the use of technology.

cow endometritis;isolation of bacteria;drug sensitivitive test

S858.23

A

1003－6377（2013）01－0065-03

2012-11-11

新疆兵團科技攻關(guān)項目（2010GG57）；農(nóng)四師科技發(fā)展專項基金項目（KJZX200811）

劉福元（1968-），男，陜西長安人，研究員，主要從事動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)及奶牛養(yǎng)殖方面的研究工作。