劉淑榕 王立興

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高效液相色譜法測定三日重生顆粒中鹽酸麻黃堿的含量

劉淑榕1王立興2

1．福建醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院；2．福州市長富星生物醫(yī)藥科技有限公司

建立高效液相色譜法測定三日重生顆粒中鹽酸麻黃堿的含量。選用Lichrospher-C18色譜柱（250mm× 4.6mm，5μm），以乙腈-0.1%磷酸溶液（10:90）為流動相，檢測波長為210nm,柱溫為30℃，流速為1.0mL/min。鹽酸麻黃堿在0.027264μg～0.27264μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9999。平均回收率為98.8%，RSD為1.25%。該方法準(zhǔn)確可靠、精密度高、重現(xiàn)性好，可用于三日重生顆粒中鹽酸麻黃堿的含量測定。

三日重生顆粒 鹽酸麻黃堿 高效液相色譜法

本處方由麻黃、大黃等八味組成，其中麻黃為處方中的君藥。麻黃中主要有效成份為麻黃堿，它具有明顯的興奮中樞，舒張支氣管平滑肌，鎮(zhèn)痛及抗炎作用[1]，對本品的療效起得重要作用，故選擇測定麻黃中的鹽酸麻黃堿為定量指標(biāo)。參考相關(guān)文獻(xiàn)[2-3]，建立高效液相色譜法測定鹽酸麻黃堿的含量。該方法準(zhǔn)確可靠、精密度高、重現(xiàn)性好、專屬性強(qiáng)，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Hitach L-2000高效液相色譜儀（L-2400紫外—可見光檢測器、L-2130泵）；T2000p色譜工作站；Lichrospher -C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）。AG135十萬分之一電子天平（METTLER TOLEDO），AR2140萬分之一電子天平(上海奧豪斯)，上海查理JL-120超聲儀。

1.2 試藥

鹽酸麻黃堿對照品（批號：171241－200506，供含量測定用，由中國藥品生物制品檢定所提供）；三日重生顆粒（批號：090607，香港震誠藥業(yè)有限公司）。乙腈為色譜純；甲醇、磷酸為分析純；蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

色譜柱：Lichrospher - C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（10:90）；柱溫：30℃；流速：1.0mL/min；檢測波長：210nm；進(jìn)樣量：10μL。

經(jīng)波長掃描，鹽酸麻黃堿在210nm處有最大吸收峰，在此波長下選用乙腈-0.1%磷酸溶液（10:90）為流動相，流速為1.0mL/min時，鹽酸麻黃堿素的對稱度（fs）為1. 0，分離度（R）大于1.5，理論塔板數(shù)（N）大于3000，且陰性無干擾。結(jié)果見圖1。

a．鹽酸麻黃堿對照品　　b．三日重生顆粒樣品　　c．缺麻黃陰性樣品

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸麻黃堿素對照品適量，加甲醇制成每1mL含4μg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

本品內(nèi)容物適量，研成細(xì)粉，取約0.5g，精密稱定，置100mL具塞錐形瓶中，精密加入0.1mol/L鹽酸溶液25mL，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用0.1mol/L鹽酸溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10mL，用氨水調(diào)pH值至11～12，再用乙醚提取兩次，每次25mL，合并乙醚提取液，加1%鹽酸甲醇溶液2mL，低溫蒸至近干，殘留物用流動相溶解，移至10mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性范圍的考察

精密稱取鹽酸麻黃堿對照品5.68mg，置于25mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取對照品溶液3mL，置于25mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，得濃度為27.264μg/mL的對照品溶液。精密吸取對照品溶液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，分別置于10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別吸取上述對照品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，以進(jìn)樣量（W）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程：A=1768131.6×W-2749.8，r =0.9999。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿在0.027264μg～0.27264μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗

取同一份鹽酸麻黃堿對照品溶液（C=5.4528μg/mL），按上述的色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣測定6次，測定峰面積，RSD為0.23%。結(jié)果表明，該儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

按2.3方法制備三日重生顆粒供試品溶液，在上述色譜條件下，分別在制備后的0h，1h，2h，4h，8h進(jìn)行測定峰面積，RSD為0.47%。結(jié)果表明，供試品溶液在8h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗

精密量取三日重生顆粒樣品溶液6份，精密稱定，按2.3方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定，測得鹽酸麻黃堿的平均含量為0.2022mg/g,RSD為0.83%。結(jié)果表明，本實(shí)驗方法具有較好的重復(fù)性。

2.8 回收率試驗

精密量取三日重生顆粒樣品溶液6份，每份0.5g，分別向樣品中加入鹽酸麻黃堿對照品溶液（C=52.3μg/mL）1.0mL，按2.3方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定。結(jié)果表明，本實(shí)驗方法準(zhǔn)確度良好。結(jié)果見表1。

表1　 回收率試驗結(jié)果

2.9 樣品的測定

取3批三日重生顆粒樣品，按2.3方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定，結(jié)果見表2。

表2　 三批中試樣品含量測定結(jié)果

3 討論

本實(shí)驗參考中國藥典及相關(guān)文獻(xiàn)的流動相，選用乙腈-0.1%磷酸溶液（10:90）為流動相，流速為1.0mL/min。

在試驗的過程中發(fā)現(xiàn)，加乙醚提取樣品后，可以減少雜峰的干擾。水溶液的pH調(diào)到堿性時，有助于麻黃堿的提取分離，減少乙醚提取次數(shù)。

本試驗建立了HPLC法測定三日重生顆粒中鹽酸麻黃堿含量的方法，該方法操作簡便，分離效果好，結(jié)果穩(wěn)定可靠，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

[1] 段永平,段醒妹.麻黃藥用成分與藥理作用研究進(jìn)展[J].赤峰學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版),2008,24(5):117-118.

[2] 江濤,莫斯.HPLC方法測定追風(fēng)透骨膠囊中鹽酸麻黃堿的含量[J].今日藥學(xué), 2010,20(10):37-39.

[3] 余翔,夏平.高效液相色譜法測定咳立停糖漿中鹽酸麻黃堿含量[J].藥物鑒定, 2010,19(19):24-25.