摘要：目的：通過(guò)HPLC法比較大黃不同炮制品中大黃酸、大黃素的含量。方法：采用Shim-pack VP-ODS（150mm×4.6mm，5μm）色譜柱；流動(dòng)相為甲醇-水（70：30，磷酸調(diào)至pH值=3）；柱溫：24℃；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：437nm。結(jié)果：大黃酸線性范圍為0.0132～0.132mg，r=0.9991，大黃素線性范圍為0.0066～0.132mg，r=0.9999。結(jié)論：大黃的不同炮制品中大黃酸、大黃素的含量不同，以生大黃中大黃素、大黃酸的含量最多，大黃炭中大黃素的含量最少，酒大黃中大黃酸的含量最少。

關(guān)鍵詞：大黃酸 大黃素 HPLC 生大黃 熟大黃 酒大黃大黃炭

大黃為蓼科植物掌葉大黃（Rheum palmatum L.）、唐古特大黃（Rheum tenguticum Maxim. ex Balf.）或藥用大黃（Rheum officinale Baill.）的干燥根及根莖。2005版藥典一部規(guī)定大黃飲片為大黃除去雜質(zhì)，洗凈，潤(rùn)透，切厚片或塊，晾干；酒大黃為取凈大黃塊，加酒拌勻，悶透，至鍋內(nèi)，用文火炒至規(guī)定的程度時(shí)，取出，放涼。照酒炙法炒干；熟大黃為取凈大黃塊，照酒燉法或蒸至內(nèi)外均呈黑色，加酒拌勻，加入液體輔料拌勻，置適宜的容器內(nèi)，加熱蒸透或至規(guī)定的程度時(shí)，取出，干燥；大黃炭為取凈大黃塊，照炒炭法炒至表面焦黑色、內(nèi)部焦褐色。酒大黃善清上焦血分熱毒。用于目赤咽腫，齒齦腫痛。熟大黃瀉下力緩，瀉火解毒。用于火毒瘡瘍。大黃炭涼血化瘀止血。用于血熱有瘀出血癥。大黃中其主要活性成分為大黃蒽醌衍生物如大黃素、大黃酸、大黃酚等。本文考察了大黃不同炮制品中大黃酸、大黃素的含量，經(jīng)測(cè)定在不同炮制品中大黃酸、大黃素在生大黃中的含量最多，大黃炭中大黃素的含量最少，酒大黃中大黃酸的含量最少。

實(shí)驗(yàn)部分

1 儀器與材料

島津LC-10ATVP高效液相色譜儀，SPD-10A紫外分析儀，CTO-10AS柱溫箱，DGU-12A脫氣機(jī)。KQ-25DE型數(shù)控超聲波清洗器。大黃酸標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為0757-200005），大黃素標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為110756-200110），生大黃[3]（天津中藥飲片廠生產(chǎn)，批號(hào)0509020），熟大黃（天津中藥飲片廠生產(chǎn)，批號(hào)0509016），酒大黃（天津中藥飲片廠生產(chǎn)，批號(hào)0508026），大黃炭（天津中藥飲片廠生產(chǎn)，批號(hào)0506023）。甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純，水為二次蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Shim-pack VP-ODS（150mm×4.6mm，5μm）色譜柱；流動(dòng)相為甲醇-水（70：30，磷酸調(diào)至pH值=3）；柱溫：24℃；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：437nm。進(jìn)樣量為20μl。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

2.2.1 制備大黃酸對(duì)照品溶液：稱取大黃酸對(duì)照品6.6mg，然后使用甲醇定容至50ml容量瓶中，就得到了大黃酸對(duì)照品儲(chǔ)備液體。

2.2.2 制備大黃素對(duì)照品溶液：和上面的方法一樣，也同樣可以制得大黃酸對(duì)照品儲(chǔ)備液體。

2.3 供試品溶液的制備

取生大黃、熟大黃、大黃炭、酒大黃藥材各20g，粉碎，過(guò)24目篩。精確稱取藥品粉末生大黃5.0056g、熟大黃5.0053g、大黃炭5.0049g、酒大黃5.0030g，分別置于4個(gè)50ml容量瓶中，加入40ml氯仿，于38℃超聲[1]提取30min，

靜置24h過(guò)濾，揮干氯仿，加適量甲醇轉(zhuǎn)溶于50ml容量瓶中。用移液管從50ml溶液中取1ml轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中定容，備用。

2.4 線性關(guān)系考察

2.4.1 大黃酸線性關(guān)系考察

精密吸取0.5ml、1ml、2ml、4ml、6ml、8ml和10ml大黃酸對(duì)照品溶液，并加甲醇定容于10ml量瓶中，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y= 673755.99X-33059.11，r=0.9991，表明大黃酸在0.0132～0.132mg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.4.2 大黃素線性關(guān)系考察

精密吸取0.5ml、1ml、2ml、4ml、6ml、8ml和10ml大黃素對(duì)照品溶液，并加甲醇定容于10ml量瓶中，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=249099.313X-15345426.367，r=0.9999，

表明大黃素在0.0066～0.132mg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.5 供試品含量測(cè)定

2.5.1 大黃酸的含量測(cè)定

取各個(gè)供試品按“2.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.5.2 大黃素的含量測(cè)定

取各個(gè)供試品按“2.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件下測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

3 結(jié)論

從測(cè)定結(jié)果可知以Shim-pack VP-ODS（150mm×4.6mm，5μm）色譜柱；流動(dòng)相為甲醇-水（70：30，磷酸調(diào)至pH值=3）；柱溫：24℃；流速：1.0ml/min為實(shí)驗(yàn)條件可使不同炮制品中大黃酸、大黃素達(dá)到基線分離。從色譜分析圖上可見(jiàn)，相同色譜條件下，大黃酸與大黃素成分所得樣品峰與各標(biāo)準(zhǔn)品峰對(duì)照，峰形一致，tR相同，因此認(rèn)為A、B 分別為大黃酸、大黃素單體成分見(jiàn)圖1?？梢哉J(rèn)為HPLC法用于不同炮制品中大黃酸、大黃素含量的測(cè)定是一種簡(jiǎn)便、有效的方法，同時(shí)HPLC法測(cè)定含量可為大黃的炮制方法提供科學(xué)依據(jù)。通過(guò)測(cè)定可知大黃酸、大黃素在生大黃中的含量最多，大黃炭中大黃素的含量最少，酒大黃中大黃酸的含量最少。

4 討論

目前大黃的炮制方法很多，各種方法對(duì)大黃中蒽醌類成分的含量都有不同的影響。本實(shí)驗(yàn)研究的目的是要提取大黃的不同炮制品中大黃酸、大黃素成分，并對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定，以便考察不同的炮制方法對(duì)大黃酸、大黃素含量的影響。根據(jù)游離蒽醌的溶解性，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，以氯仿為溶劑，采用超聲提取大黃酸、大黃素等蒽醌成分，以甲醇：水（70：30）加磷酸調(diào)PH=3為流動(dòng)相，蒽醌類單體成分能達(dá)到基線分離，保留時(shí)間適宜。本研究還證明，pH值萃取法[2]分離度不好，對(duì)于性質(zhì)相似、酸性強(qiáng)弱差別不大的大黃酸、大黃素等蒽醌單體成分分離存在局限性。因此以甲醇：水（70：30）為流動(dòng)相，進(jìn)行分離、純化，游離蒽醌成分可得到較好的分離。

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