[摘要] 目的 分析乳腺癌17號(hào)染色體多體在HER-2基因狀態(tài)及臨床病理特征中的意義。 方法 應(yīng)用熒光原位雜交 （FISH）技術(shù)檢測(cè)186例浸潤(rùn)性乳腺癌患者石蠟切片中HER-2基因擴(kuò)增與17號(hào)染色體多體情況，并分析17號(hào)染色體多體與HER-2基因擴(kuò)增及各臨床病理特征的關(guān)系。 結(jié)果 186例樣本中，17號(hào)染色體多體比例為43.0%（80/186），其中HER-2基因擴(kuò)增組66.3% （53/80），HER-2基因未擴(kuò)增組25.5% （27/106），前者顯著高于后者 （x2=30.929，P=0.000）；17號(hào)染色體多體與腫瘤大小及腫瘤分級(jí)顯示相關(guān)（r=-0.188，P=0.001；r=0.159，P=0.03），而與年齡、Ki67、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移﹑ER、PR表達(dá)及ER/PR狀態(tài)無(wú)關(guān)。 結(jié)論 17號(hào)染色體多體與HER-2基因擴(kuò)增者相關(guān)；并且可能提示乳腺癌患者預(yù)后不良。

[關(guān)鍵詞] 乳腺腫瘤；HER-2基因；17號(hào)染色體；熒光原位雜交

[中圖分類號(hào)] R737.9 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2013）19-33-03

乳腺癌原癌基因HER-2（人表皮生長(zhǎng)因子受體2）的狀態(tài)與乳腺癌患者預(yù)后及應(yīng)用靶向治療藥物密切相關(guān)[1-2]。應(yīng)用熒光原位雜交（FISH）技術(shù)能很好的反應(yīng)HER-2基因擴(kuò)增狀態(tài)，但在檢測(cè)的過(guò)程中常會(huì)出現(xiàn)17號(hào)染色體（CSP17）多體性，而17號(hào)染色體多體是否可以判定患者預(yù)后、指導(dǎo)術(shù)后放化療、及其和HER-2基因狀態(tài)的關(guān)系是近年學(xué)者研究的熱點(diǎn)。本研究主要應(yīng)用FISH技術(shù)檢測(cè)186例浸潤(rùn)性乳腺癌患者的HER-2基因及17號(hào)染色體多體性，旨在探討17號(hào)染色體多體與HER-2基因擴(kuò)增及乳腺癌患者臨床病理特征關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

2010年11月～2013年5月在我科進(jìn)行FISH 檢測(cè)的浸潤(rùn)性乳腺癌患者186例，年齡26～69歲。石蠟切片3μm，分別用于FISH檢測(cè)與IHC 檢測(cè)。

1.2 試劑與探針

IHC檢測(cè)用基因科技 （上海） 有限公司抗體，ER 克隆號(hào)：SP1；PR 克隆號(hào)：SP2； Ki-67 克隆號(hào)：MIB-I。FISH檢測(cè)使用北京金普嘉公司HER-2基因擴(kuò)增試劑盒。

1.3 方法

1.3.1 IHC技術(shù)及結(jié)果判定 采用免疫組化evision法進(jìn)行檢測(cè)。ER、PR棕色陽(yáng)性定位于細(xì)胞核內(nèi)：（-）<10%表達(dá)陽(yáng)性；（+） 10%～30%表達(dá)陽(yáng)性；（++）：30%～50%表達(dá)陽(yáng)性；（+++）>50%表達(dá)陽(yáng)性。Ki67以<50%為低表達(dá)，以≥50%為高表達(dá)[3]。

1.3.2 FISH技術(shù)及結(jié)果判定 按照北京金普嘉公司HER-2基因擴(kuò)增試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。FISH結(jié)果判定： （1） 紅信號(hào)明顯成簇成團(tuán)：判定為簇狀擴(kuò)增；（2） 若不是 （1） 的情況，計(jì)數(shù)30個(gè)細(xì)胞計(jì)算Ratio值：Ratio<1.8為陰性；Ratio>2.2為陽(yáng)性；Ratio介于1.8～2.2之間時(shí)，增加計(jì)數(shù)細(xì)胞。以綠色信號(hào)≥3判定為17號(hào)染色體多體[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件分析，組間比較用x2檢驗(yàn)，秩和檢驗(yàn)及Spearman等級(jí)相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義。

2 結(jié)果

2.1 17號(hào)染色體多體與HER-2基因擴(kuò)增的相關(guān)性

186例浸潤(rùn)性乳腺癌患者標(biāo)本中，17號(hào)染色體多體的比例為 43.0%（80/186），其中HER-2基因擴(kuò)增組66.3% （53/80），HER-2基因未擴(kuò)增組25.5%（27/106），前者顯著高于后者（x2=30.929，P=0.000）。見(jiàn)表1。

2.2 17號(hào)染色體多體與各臨床病理特征聯(lián)系

不同腫瘤分級(jí)及腫瘤大小的17號(hào)染色體倍體性分布不同，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （x2=16.221，P=0.000；x2=6.549，P=0.038）。17號(hào)染色體多體與腫瘤分級(jí)呈正相關(guān)（r=0.159 P=0.03），與腫瘤大小呈負(fù)相關(guān) （r=-0.188，P=0.001），而與年齡、Ki67、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移﹑ER、PR表達(dá)及ER/PR狀態(tài)無(wú)關(guān)（P>0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

人類大多數(shù)腫瘤都有基因組不穩(wěn)定性的遺傳學(xué)特征[5]，其中的染色體不穩(wěn)定（chromosomal instability，CIN）主要是由于保持細(xì)胞基因組完整性的染色體不穩(wěn)定基因突變引起[6]。乳腺癌作為女性腫瘤死亡原因的第二位[7]，其17號(hào)染色體變異是近年研究的熱點(diǎn)，其不僅可能與HER-2基因擴(kuò)增相關(guān)，還可能是評(píng)價(jià)乳腺癌預(yù)后，指導(dǎo)治療的獨(dú)立因素。

本研究結(jié)果中，17號(hào)染色體多體比例43%，與王富文等[8]（38%）及呂亞莉等[9] （45.9%）報(bào)道的存在不同差異，但結(jié)果基本一致，這與各個(gè)統(tǒng)計(jì)資料差異有關(guān)。17號(hào)染色體多體在HER-2基因擴(kuò)增組的分布 （66.3%） 顯著高于HER-2基因未擴(kuò)增組 （25.5%）（P=0.000），同大多數(shù)學(xué)者報(bào)道一致[9-11]，提示HER-2基因擴(kuò)增的患者17號(hào)染色體變異更顯著，這可能是很多學(xué)者認(rèn)為17號(hào)染色體多體與乳腺癌患者預(yù)后不良有關(guān)的原因，分析其機(jī)制可能是（1）：CSP17多體者HER-2基因拷貝數(shù)改變繼而使HER-2蛋白增多，致患者預(yù)后不良。（2）[12]：CIN基因突變，其中Raf基因突變后導(dǎo)致一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白過(guò)度消耗而與乳腺癌患者預(yù)后相關(guān)。

有研究[13]報(bào)道，HER-2基因無(wú)擴(kuò)增但17號(hào)染色體多體者與既無(wú)HER-2基因擴(kuò)增也無(wú)17號(hào)染色體多體者比較，其組織學(xué)分級(jí)更高、腫瘤分級(jí)更高及雌孕激素陰性陰性率更高，而這些臨床病理特征往往提示該患者預(yù)后不良，也有研究者報(bào)道[14]乳腺癌中染色體倍體性與腫瘤細(xì)胞分化程度﹑存活率及復(fù)發(fā)率無(wú)關(guān)。

本研究進(jìn)一步分析了17號(hào)染色體多體與臨床病理特征的相關(guān)性，結(jié)果顯示17號(hào)染色體多體在腫瘤分級(jí)中分布具有顯著差異且兩者呈正相關(guān) （P<0.05），腫瘤分級(jí)越高，17號(hào)染色體多體分布越多，陳紅等[15]報(bào)道17號(hào)染色體多體與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER和PR的陰性狀態(tài)顯著相關(guān)，Tsukamoto等[16]報(bào)道17號(hào)染色體多體與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。盡管各個(gè)學(xué)者分析結(jié)果情況存在不同差異，但都提示17號(hào)染色體多體可以在一定程度上預(yù)測(cè)乳腺癌轉(zhuǎn)歸。另外本研究中17號(hào)染色體多體與乳腺癌腫瘤大小呈負(fù)相關(guān)，可能與當(dāng)前國(guó)內(nèi)醫(yī)療技術(shù)提高、醫(yī)保覆蓋廣，患者診治早相關(guān)，需要擴(kuò)大統(tǒng)計(jì)資料進(jìn)一步確定。2007年ASCO/CAP推薦檢測(cè)乳腺癌HER-2狀態(tài)應(yīng)用IHC和FISH，指南規(guī)定FISH報(bào)告為HER-2/CSP17比例來(lái)判定HER-2狀態(tài)，但是由于17號(hào)染色體變異率大，且可能與乳腺癌患者不良預(yù)后因素相關(guān)，建議分別報(bào)告HER-2基因擴(kuò)增情況以及CEP17的信號(hào)數(shù)目。并且在2009年有學(xué)者建議[17]：HER-2基因狀態(tài)陰性、17號(hào)染色體多倍體的患者仍可適用靶向藥物治療，也提示了17號(hào)染色體多體的重要性。

綜上所述，筆者認(rèn)為17號(hào)染色體多體性在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。一方面HER-2基因擴(kuò)增者的17號(hào)染色體多體分布顯著高于未擴(kuò)增組，另一方面可以一定程度上判斷乳腺癌患者預(yù)后。因此建議FISH檢測(cè)結(jié)果報(bào)告應(yīng)同時(shí)報(bào)告HER-2基因擴(kuò)增情況及CEP17信號(hào)數(shù)目。

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（收稿日期：2013-08-19）