[摘要] 目的 探討化癥止痛巴布劑中主要有效成分馬錢子堿、丹皮酚的高效液相色譜測定法（HPLC）。 方法 采用HPLC法，Xterra RP18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相為氯仿：甲醇：0.1%氨水進行梯度洗脫，檢測波長為240nm，流速為1.0mL/min，柱溫為25℃。 結(jié)果 馬錢子堿的線性范圍為0.95～11.4μg/mL（r=0.9993），平均回收率為98.98%（RSD=1.36%），丹皮酚的線性范圍為2.623～31.28μg/mL（r=0.9997），平均回收率為97.92%（RSD=3.15%）。結(jié)論 HPLC法測定化癥止痛巴布劑中有效成分馬錢子堿、丹皮酚的方法簡便、可靠，可以有效的控制制劑的質(zhì)量。

[關(guān)鍵詞]化癥止痛巴布劑；HPLC；馬錢子堿；丹皮酚

[中圖分類號] R284 [文獻標(biāo)識碼] B [文章編號] 2095-0616（2013）19-61-02

巴布劑又稱為巴布貼、巴布膏，指的是藥材提取物、藥材與適宜的親水性的基質(zhì)混勻后涂布于背襯材料上所制成的貼膏劑。巴布劑最早是起源于日本[1]。其臨床特點是刺激性、過敏性小，用藥方便、療效明顯，已經(jīng)成為極具市場潛力的新型制劑[2]。化癥止痛巴布劑中主要藥材包括三七、細辛、紅花、延胡索、制馬錢子、徐長卿等，本實驗采用高效液相色譜法測定化癥止痛巴布劑中制馬錢子、徐長卿的有效成分馬錢子堿、丹皮酚的含量，以為其質(zhì)量標(biāo)準提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

采用美國Waters公司生產(chǎn)的高效液相色譜儀器，美國美特勒電子分析天平，馬錢子堿對照品（購于中國生物制品檢定所，批號：120514）、丹皮酚對照品（購于中國生物制品檢定所，批號：20120625）；化癥止痛巴布劑由我試驗科室提供；甲醇為色譜純，水為三蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇

色譜柱為Xterra RP18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相為氯仿︰甲醇︰0.1%氨水（90︰10︰0.25、75︰25︰0.25、65︰35︰0.25、55︰45︰0.25）進行梯度洗脫，每間隔40min變換一次流動相的比例，檢測波長為240nm，進樣量為20μL，流速為1.0mL/min，柱溫為25℃。理論塔板數(shù)計算不低于3000。在上述色譜條件下馬錢子堿和丹皮酚的分離度良好。色譜圖見圖1。

2.2 對照品溶液的配制

分別精密稱取馬錢子堿、丹皮酚對照品各2.0、4.0mg，甲醇定溶至20mL的容量瓶中，搖勻后即得馬錢子堿和丹皮酚儲備溶液，分別得到1.0、2.0mg/mL的溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取化癥止痛巴布劑，搗碎后用研缽將貼劑研細，后過5號篩。精密稱定0.5mg，放置錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，超聲處理45min，取出后自然放置，室溫后稱定重量，用甲醇補足減少的重量，搖勻后過濾，濾液采用0.22μm的微孔濾膜過濾，即得供試品溶液，放置于4℃的冰箱中，備用。

2.4 線性關(guān)系的考察

分別精密吸取對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，分別置于15mL容量瓶中，分別用甲醇稀釋至刻度，按照2.1項下的色譜條件分別進樣20μL，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y）、對照品含量作為橫坐標(biāo)（X），分別得到馬錢子堿的回歸方程為：Y=7.864X+22.91，r=0.9993，線性范圍為0.95～11.4μg/mL。丹皮酚的回歸方程為：Y=47.268X+4.817，r=0.9997，線性范圍為2.623～31.28μg/mL。

2.5 精密度試驗

按照2.2項下對照品配制的方法制備樣品溶液，按照2.1項下的色譜條件連續(xù)進樣5次，測得馬錢子堿的RSD值為0.57%，丹皮酚的RSD值為2.36%。

2.6 穩(wěn)定性試驗

供試品溶液分別在0、2、4、6、10、14、18、24h進樣，按照2.1項下的色譜條件，測得峰面積。結(jié)果表明在24h范圍內(nèi)供試品溶液的含量基本穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的樣品約1.0g，共5份，分別加入一定量的馬錢子堿、丹皮酚對照品溶液，按照線性關(guān)系方程進行含量的測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

2.8 樣品的測定

分別取不同廠家的化癥止痛巴布劑，批號分別為20090526、20091205、20100605，按照2.3項下所示的方法制備供試品溶液，進行測定，每批樣品重復(fù)測定3次，以外標(biāo)法計算馬錢子堿和丹皮酚的含量，平均含量分別為0.495、0.982mg/g。

3 討論

巴布劑是一種外用貼膏劑，在日本有較久的應(yīng)用歷史。系藥材提取物、藥材和（或）化學(xué)藥物與適宜的親水性基質(zhì)混合后，被涂布在背襯材料上制成的貼膏劑，由背襯（常用無紡布、彈力布）、膏體、防黏膜（膏體表面的隔離膜）組成[3]。化癥止痛巴布劑中主要藥材包括三七、細辛、紅花、延胡索、制馬錢子、徐長卿等，其中有效成分包括馬錢子堿以及丹皮酚，文獻中多報道采用薄層色譜法測定丹皮酚的含量[4]，本實驗采用高效液相色譜法測定化癥止痛巴布劑中制馬錢子、徐長卿的有效成分馬錢子堿、丹皮酚的含量。

3.1 流動相的選擇

試驗過程中嘗試了采用甲醇︰水、甲醇︰水︰氯仿、氯仿︰甲醇︰水、氯仿︰甲醇︰氨水（0.25%）作為流動相體系進行色譜的分離考察[5]，結(jié)果表明在采用氯仿：甲醇：水進行梯度洗脫，馬錢子堿與丹皮酚的色譜分離度較好。因此，本文采用氯仿：甲醇：水作為實驗過程中的流動相。

3.2 波長的選擇

配制一定濃度的馬錢子堿和丹皮酚對照品溶液，在波長為250～550nm內(nèi)進行紫外光的掃描，結(jié)果表明，馬錢子堿在254nm處有最大吸收[6]，丹皮酚在274nm處有最大吸收[7]，因在274nm處馬錢子堿吸收較低，因此試驗過程中選擇兩種成分的共同最大吸收波長240nm。

3.3 提取方法的選擇

本試驗對化癥止痛巴布劑溶液采用了加熱回流，超聲提取兩種方式，以50%、60%、70%、80%四種不同濃度的甲醇作為溶劑，分別采用30、45、60min進行正交試驗[8]。結(jié)果表明，提取條件為80%甲醇溶液，超聲提取45min的效果最好。

總之，采用高效液相色譜法測定化癥止痛巴布劑中馬錢子堿、丹皮酚的含量，該方法操作簡單、穩(wěn)定性好、精密度高，無過多的干擾因素，因此可以作為實驗中的檢測手段。

[參考文獻]

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（收稿日期：2013-07-15）