[摘要]目的 探討E-cadherin、Ki-67在乳腺髓樣癌中表達(dá)及臨床病理意義。方法 采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)42例乳腺髓樣癌中E-cadherin、Ki-67的表達(dá)。結(jié)果 E-cadherin和Ki-67蛋白表達(dá)陽(yáng)性率在乳腺髓樣癌中表達(dá)分別為81%（34/42）和76.2%（32/42）。E-cadherin表達(dá)陽(yáng)性率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著相關(guān)（P<0.05），而與患者年齡、腫瘤大小及是否遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)（P>0.05）；Ki-67表達(dá)及陽(yáng)性程度隨著病理組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而增加。結(jié)論 E-cadherin和Ki-67蛋白的表達(dá)差異是影響乳腺髓樣癌預(yù)后的重要原因。

[關(guān)鍵詞] 乳腺髓樣癌；E-cadherin；Ki-67；臨床病理特征

[中圖分類(lèi)號(hào)] R737.9 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2013）19-123-03

乳腺癌中髓樣癌較為少見(jiàn)，據(jù)統(tǒng)計(jì)，髓樣癌占全部乳腺癌的2.25%～5%[1]，取決于診斷的嚴(yán)格程度。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)乳腺髓樣癌中E-cadherin、Ki-67蛋白的表達(dá)結(jié)合臨床病理特征，探討兩者的表達(dá)與乳腺髓樣癌臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集南昌市第三醫(yī)院2010～2013年收治的42例乳腺髓樣癌標(biāo)本，這些標(biāo)本均經(jīng)手術(shù)切除，有完整的臨床病理資料。病例全部為女性，年齡30～69歲?；颊咝g(shù)前未接受任何治療。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

乳腺癌標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋組織，切片厚度3μm，連續(xù)切片裱片于用多聚賴(lài)氨酸處理的玻片上，60℃烘烤4h備用。免疫組化標(biāo)記采用EnVision二步法：常規(guī)石蠟切片脫蠟至水，高壓鍋抗原修復(fù)，每張切片滴加1滴3%過(guò)氧化氫溶液，室溫下孵育10min，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶；每張切片滴加1滴E-cadherin、Ki-67抗體，37℃孵育60min ，每張切片滴加1滴二抗，室溫孵育30min，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封片。E-cadherin、Ki-67試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋有限公司，用已知的陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定

結(jié)果判定根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例及著色強(qiáng)度，綜合制定免疫組化半定量計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)。陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)分<10%，0分；11～25%，1分；26～50%，2分；51～75%，3分；>75%，4分。著色強(qiáng)度計(jì)分：弱，1分；中，2分；強(qiáng)，3分。兩個(gè)分值相加為最終判定結(jié)果：≤2分（-）；3分（+）；4～5分（++）；6～7分（+++）[2]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，E-cadherin、Ki-67表達(dá)在研究對(duì)象組間的差異性采用x2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 臨床病理資料

發(fā)病年齡：患者發(fā)病年齡為30～69歲；發(fā)病部位為左乳19例，右乳23例。腫瘤大小分別為≤2cm 13例，2～5cm 25例，≥5cm 4例。臨床分期分別為Ⅰ期+Ⅱ期23例，Ⅲ期+Ⅳ期19例。腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為率為19%（8/42）。組

織學(xué)分級(jí)為2級(jí)19例，3級(jí)23例。

2.2 鏡檢

乳腺髓樣癌組織學(xué)特征：（1）合體細(xì)胞結(jié)構(gòu)在腫瘤組織中所占比例>75%，瘤細(xì)胞呈片狀分布，厚度常超過(guò)4或5個(gè)細(xì)胞，被少量疏松結(jié)締組織分隔，有時(shí)可見(jiàn)灶狀壞死和鱗狀上皮化生；（2）全部腫瘤組織均不具有腺樣或小管樣結(jié)構(gòu)；（3）間質(zhì)中彌漫的淋巴漿細(xì)胞浸潤(rùn)為其顯著特點(diǎn)，但淋巴漿細(xì)胞密度在不同病例有所差別；單核細(xì)胞缺乏或顯著，可以掩蓋癌細(xì)胞，有時(shí)可見(jiàn)淋巴濾泡和（或）上皮樣肉芽腫形成；（4）癌細(xì)胞常呈圓形、胞質(zhì)豐富，泡狀核，有1個(gè)或數(shù)個(gè)核仁；核多形性中度到顯著，核級(jí)屬于2或3級(jí)，核分裂多見(jiàn)，有時(shí)可見(jiàn)非典型巨細(xì)胞；（5）低倍鏡下，更容易觀察到腫瘤組織的完整邊界；腫瘤邊界呈推擠狀，在腫瘤外圍有清楚的纖維帶[3]。

2.3 E-cadherin、Ki-67在腫瘤組織中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系

E-cadherin和Ki-67蛋白表達(dá)陽(yáng)性率在乳腺髓樣癌中表達(dá)分別為81%（34/42）和76.2%（32/42）。見(jiàn)表1。E-cadherin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著相關(guān)（P<0.05），而與患者年齡、腫瘤大小及是否遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)（P>0.05）；Ki-67表達(dá)率及陽(yáng)性程度隨著病理組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而增加。E-cadherin和Ki-67蛋白免疫組化染色結(jié)果見(jiàn)圖1和圖2。

3 討論

髓樣癌是乳腺癌中的一種特殊類(lèi)型，在2003版WHO腫瘤組織學(xué)分類(lèi)中，當(dāng)腫瘤的鏡下特征不能診斷為髓樣癌，但是當(dāng)腫瘤有顯著的合體細(xì)胞特征和其他2項(xiàng)或3項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，通常被診斷為非典型髓樣癌。一般認(rèn)為髓樣癌比常見(jiàn)的浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌預(yù)后要好[4-5]，但也有人對(duì)此質(zhì)疑[6-7]。髓樣癌10年生存率報(bào)道結(jié)果為從50%到超過(guò)90%不等，其中有多方面的原因，其中重要的一點(diǎn)就是納入病例標(biāo)準(zhǔn)不一致。

上皮鈣依賴(lài)黏附素是一類(lèi)依賴(lài)于鈣離子的細(xì)胞表面糖蛋白，主要參與同種細(xì)胞間的連接，分布于各種上皮組織中，對(duì)維持上皮細(xì)胞間的形態(tài)和組織以及完整性起著重要的作用，其編碼基因位于16q22～q23.1[8]。它的高表達(dá)使腫瘤呈膨脹性生長(zhǎng)，瘤細(xì)胞之間保持密切的接觸，使腫瘤組織難以脫離原發(fā)病灶而侵入周?chē)慕M織和血管，因此能起到抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移的作用，所以預(yù)后相對(duì)較好。本實(shí)驗(yàn)中，乳腺典型髓樣癌的E-cadherin與淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移率呈負(fù)相關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者E-cadherin表達(dá)陽(yáng)性率降低，提示E-cadherin表達(dá)陽(yáng)性者淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移的幾率降低，可以作為提示預(yù)后判斷的指標(biāo)之一。

Ki-67位于10號(hào)染色體上，由相對(duì)分子量345kD和395kD的2條多肽鏈組成的核蛋白。除G0、G1早期以外的細(xì)胞周期中，Ki-67蛋白均可表達(dá)，在G2和M期表達(dá)最強(qiáng)，

在有絲分裂后期迅速降解或失去其抗原性，在日常工作及實(shí)驗(yàn)中它被認(rèn)為是能夠比較全面反映細(xì)胞群體增殖活性的較可靠的客觀指標(biāo)之一。其陽(yáng)性表達(dá)是細(xì)胞增殖活性的重要標(biāo)記，常用來(lái)反映腫瘤細(xì)胞的增殖活性。本研究中，Ki-67表達(dá)陽(yáng)性率及陽(yáng)性程度隨著腫瘤病理組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而增加，與國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道一致，說(shuō)明乳腺癌腫瘤細(xì)胞的增殖與腫瘤細(xì)胞分化和淋巴道轉(zhuǎn)移密切相關(guān)；Ki-67的高表達(dá)可能是導(dǎo)致乳腺癌生物學(xué)特性的重要原因之一。病理組織學(xué)分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是評(píng)估病情嚴(yán)重程度、制定患者的治療方案、客觀評(píng)價(jià)療效以及幫助判斷預(yù)后的重要因素。Ki-67在乳腺癌中的高表達(dá)也說(shuō)明乳腺癌患者進(jìn)展更快、侵襲性更強(qiáng)、預(yù)后更差。因此，Ki-67的檢測(cè)已逐漸被作為反映腫瘤細(xì)胞增殖速度和提示腫瘤預(yù)后判斷的較好的生物學(xué)標(biāo)記。

總的來(lái)說(shuō)，典型髓樣癌有較好的預(yù)后，前提是診斷標(biāo)準(zhǔn)的嚴(yán)格把握，如何較好的鑒別髓樣癌和非典型髓樣癌，以便更準(zhǔn)確的判斷預(yù)后，還需要資料的不斷積累。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Vo T，Xing Y，Meric-Bernstam F，et al.Long-term outcomes in patients with mucinous，medullary，tubular，and invasive ductal carninomas after lumpectomy[J].Am J Surg，2007，194（4）：527-531.

[2] 張曉明，范嫏娣.乳腺髓樣癌與不典型髓樣癌臨床病理分析[J].臨床與病理實(shí)驗(yàn)學(xué)雜志，2005，20（4）：438-441.

[3] 程虹，戴林，郭雙平，等.乳腺及女性生殖器官腫瘤病理學(xué)和遺傳學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：24-25.

[4] Reinfuss M，Stelmach A，Mitus J，et al.Typical medullary carcinoma of the breast：a clinical and pathological analysis of 52 cases[J].J Surg Oncol，1995，60：89-94.

[5] Pedersen L，Zedeler K，Holck S，et al.Medullary carcinoma of the breast：prevalence and prognostic importance of classical risk factors in breast cancer[J].Eur J Cancer，1995，31：2289-2295.

[6] Thurman SA，Schnitt SJ，Connolly JL，et al.Outcome after breast conserving therapy for patients with stage I or II mucinous，medullary，or tubular breast carcinoma[J].Int J Radiat Oncol Biol Phys，2004，59：152-159.

[7] Perkins GH，Green MC，Middleton LP，et al.Medullary breast carcinoma：outcomes and prognosis with the utilization of chemotherapy[J].J Clin Oncol，2004，22：671.

[8] 李少林，陳曉品，吳凱南.乳腺癌的生物學(xué)特性和臨床對(duì)策[M].北京：科技出版社，2004：15.

（收稿日期：2013-07-04）