[摘要] 目的 運用脫氫表雄酮誘導(dǎo)SD幼年大鼠多囊卵巢綜合征（PCOS）模型，并在藥物注射劑量上對文獻報道方法進行改良，研究模型的卵巢形態(tài)學(xué)和性激素等改變。 方法 采用23日齡SD雌大鼠，造模組每日皮下注射濃度為30 mg/mL的脫氫表雄酮，注射量為0.2 mL/100 g體重，連續(xù)注射20 d后。禁食于第21天測空腹血糖，處死測激素FSH、LH、T。結(jié)果 造模組體重顯著高于對照組（P<0.05）。造模組卵巢呈多囊樣改變、閉鎖卵泡增多，閉鎖卵泡直徑明顯大于對照組。造模組血清T、FSH、空腹血糖水平明顯高于對照組（P<0.05）。 結(jié)論 脫氫表雄酮誘導(dǎo)的多囊卵巢綜合征模型的卵巢病理改變和激素改變與PCOS患者相似，是研究多囊卵巢綜合征比較理想的模型。

[關(guān)鍵詞] 脫氫表雄酮；多囊卵巢綜合征；造模

[中圖分類號] R332 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）07-35-03

多囊卵巢綜合征（polycystic ovarian syndrome，PCOS）是一種發(fā)病多因性、臨床表現(xiàn)呈多態(tài)性的內(nèi)分泌綜合征，以雄激素過多和持續(xù)無排卵（chronic anovulation）為臨床主要特征，育齡婦女中PCOS的患病率為5%～10%，是導(dǎo)致生育期婦女月經(jīng)紊亂最常見的原因之一[1]。PCOS發(fā)病機制非常復(fù)雜，至今尚無定論，涉及到多系統(tǒng)多因素，成為近年來的研究熱點。目前，PCOS的動物模型比較多，筆者經(jīng)過大量文獻檢索對比，認(rèn)為現(xiàn)階段以脫氫表雄酮（dehydroepiandrosterone，DHEA）為造模藥物誘導(dǎo)SD大鼠的PCOS模型較為成功，筆者在張曉薇等[2]造模試驗的基礎(chǔ)上加以改進，同樣達到造模效果，且更易于實際操作。

1 資料與方法

1.1 實驗動物

20日齡SD清潔級雌大鼠24只，由成都達碩生物科技有

限公司提供，合格證號：SYXK（川）2008-24，體重為52～84 g不等，按體重由小到大編號，用隨機數(shù)字表隨機分為造模組、對照組，每組12只。

1.2 實驗條件

實驗場所為成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥理實驗室，實驗動物使用許可證號為：SYXK（川）2008-028，溫度22～24℃，濕度65%～75%，清潔飼養(yǎng)，給水充分，環(huán)境安靜，實驗室環(huán)境符合清潔級動物飼養(yǎng)要求。

1.3 藥物和試劑

脫氫表雄酮（DHEA）購自武漢遠城科技發(fā)展有限公司，促卵泡生長激素（follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH）酶聯(lián)免疫檢測試劑盒、促黃體生成激素（luteinizing hormone，LH）酶聯(lián)免疫檢測試劑盒、睪酮（testosterone，T）酶聯(lián)免疫檢測試劑盒、注射用茶油均購自成都亞芯科技有限公司。

1.4 實驗方法

所有大鼠在20日齡斷奶，喂以顆粒飼料，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，從23日齡開始造模。

參考張曉薇等[2]造模方法，該方法注射DHEA用量為6 mg/（100g體重·d）+0.2 mL注射用油劑，溶劑用量始終保持0.2 mL不變，但DHEA用量每天每只大鼠均不同，所以注射液濃度不斷變化。故在實際操作中，每天每只大鼠均需稱量不等的DHEA單獨配制不同濃度的注射液，且DHEA溶解度低，僅微溶于油劑，每配制一支注射液需花較長時間待其溶解，故該造模方法在較大樣本量的實驗中可操作性較差。

筆者遂嘗試對DHEA注射液的配制進行調(diào)整。按原方法DHEA 6 mg/（100g體重·d）+0.2 mL注射用油劑來換算，100 g體重大鼠應(yīng)配制注射液濃度為6 mg/0.2 mL，即30 mg/mL，將此作為DHEA注射液的標(biāo)準(zhǔn)濃度，注射量按0.2 mL/100 g體重來計算。這樣，注射液濃度保持恒定，可提前配制待DHEA溶解均勻，按不同大鼠重量抽吸不同體積的注射液即可。與原造模方法相比，DHEA用量一致，注射液濃度恒定便于配制和操作，注射液用量根據(jù)體重來變化。

從大鼠23日齡開始，造模組每日上午于頸背部皮下注射DHEA溶液（溶于注射用茶油，濃度為30 mg/mL，注射量為0.2 mL/100 g體重），對照組皮下注射油劑，注射量為0.2 mL/100 g。連續(xù)注射20 d。經(jīng)測量，從23～43日齡，SD雌大鼠體重約為50～150 g，故注射液用量約在0.1～0.3 mL間浮動。

1.5 標(biāo)本獲取及指標(biāo)檢測

注射第20天，于當(dāng)晚8時禁食不禁水，第21日早8時測空腹血糖，處死測FSH、LH、T。取雙側(cè)卵巢稱重，雙側(cè)卵巢做病理切片，HE染色，觀察卵巢大體解剖及光鏡改變，測量卵巢發(fā)育卵泡、閉鎖卵泡及囊狀卵泡直徑。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件包處理，兩組間對比用的是t檢驗，計量資料數(shù)據(jù)以（）表示。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

實驗前，兩組大鼠均發(fā)育正常，皮毛潤澤，行為、體征無明顯差異，反應(yīng)靈敏。實驗后，造模組與對照組相比皮毛顯凌亂骯臟，造模組有幾只尾部受傷，推測為打斗所致。兩組大鼠實驗過程中均有死亡，造模組死3只，對照組死2只，剔出實驗。實驗結(jié)果顯示，兩組大鼠實驗前體重?zé)o統(tǒng)計學(xué)差異，實驗后，造模組大鼠的最后體重和增長體重明顯高出對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

3 討論

多囊卵巢綜合征是育齡期女性月經(jīng)紊亂、不孕的常見原因，其病因病理非常復(fù)雜，發(fā)病機制至今未研究清楚。建立良好的動物模型對研究PCOS的發(fā)病機制和治療方法至關(guān)重要。目前，國內(nèi)外對PCOS已建立了多種造模方法，有雄激素造模法[2-4]、雌激素造模法[5-6]、孕激素聯(lián)合HCG造模法[7]、胰島素聯(lián)合HCG造模法[8]、芳香化酶抑制劑造模法[9]等，但這些造模方法都還不成熟完善，無法完全模擬臨床上PCOS患者發(fā)病。這是由于對PCOS的發(fā)病機制不明確，又要將其引入到動物模型的困難性所致。本-研究選取了目前比較認(rèn)可的DHEA造模法來進行驗證。該模型最大的優(yōu)點在于下丘腦-垂體-卵巢軸保持完整，且對人絨毛膜促性腺激素（HCG）、妊馬雌酮（PMSG）和黃體生成激素釋放激素（LHRH）具有反應(yīng)性。該模型的缺陷是，由于持續(xù)給予DHEA而導(dǎo)致大鼠體內(nèi)DHEA和雄稀二酮的水平升高，從而難以區(qū)分內(nèi)源性和外源性的雄激素，使一些研究體內(nèi)雄激素變化的實驗受到干擾[10]。

通過DHEA造模實驗發(fā)現(xiàn)，造模組的最后體重和增長體重比對照組明顯增高，符合人類PCOS特征，即50%的患者出現(xiàn)肥胖（體重指數(shù)≥25）。造模組的卵巢重量增加但不具有統(tǒng)計學(xué)差異，推測與大鼠卵巢太小，難以精確剝離有關(guān)。造模組的T和空腹血糖較對照組明顯增高，符合PCOS臨床特征，但造模組FSH升高、LH降低與PCOS不符。從卵巢病理來看，造模組的卵巢出現(xiàn)大量閉鎖卵泡，且閉鎖卵泡直徑較大，卵巢呈多囊樣改變，與PCOS的卵巢病理改變特征相類似。

綜上所述，故認(rèn)為DHEA造模法符合PCOS的卵巢特征性改變和主要內(nèi)分泌變化，是研究PCOS較為理想的模型。本文的造模方式參考以往的報道，在藥物注射用量上做了一些改進，使操作更加便捷，同時不影響造模效果，可加以推廣。

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（收稿日期：2013-03-18）