[摘要] 目的 了解2012年恩施州手足口病的病原體型別及分布特征，為今后制定預(yù)防及控制防治策略提供依據(jù)。 方法 采用實(shí)時(shí)熒光PCR法進(jìn)行腸道病毒EV71型和CA16型的核酸檢測。 結(jié)果 574例標(biāo)本中，EV71、CA16、其他腸道病毒的陽性率分別為35.27%、33.09%、31.64%；皰疹液中腸道病毒檢出率最高（86.67%），其次為肛拭子（82.98%）；發(fā)病年齡主要集中在4歲以下兒童，腸道病毒檢出率72.22%；男女性別之間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；發(fā)病季節(jié)呈現(xiàn)2個(gè)高峰，第一個(gè)高峰為4～6月，第二個(gè)高峰為10～11月。 結(jié)論 2012年引起恩施州手足口病流行的主要病原體為EV71和CA16，同時(shí)還有其他腸道病毒流行；4歲以下兒童為手足口病高危人群；好發(fā)于夏秋季；皰疹液是手足口病的敏感標(biāo)本，肛拭子次之。

[關(guān)鍵詞] 手足口??；EV71型；CA16型；其他腸道病毒；實(shí)時(shí)熒光PCR

[中圖分類號] R181.8 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 2095-0616（2013）07-85-03

手足口?。╤and foot and mouth disease，HFMD）是嬰幼兒常見傳染病，主要由多種腸道病毒引起，其病毒屬于小RNA病毒科腸道病毒性屬，最常見的是EV71型和CA16型。多發(fā)于5歲以前兒童，好發(fā)于夏秋季，世界大部分地區(qū)均有流行報(bào)道[1]。我國于2008年5月納入丙類法定傳染病管理。為了解恩施州手足口病腸道病毒以及EV71型和CA16型的流行分布特征，本研究對2012年手足口病臨床診斷病例進(jìn)行病原學(xué)檢測結(jié)果分析。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源

收集2012年恩施州恩施市、建始縣、巴東縣、利川市、宣恩縣、來鳳縣、鶴峰縣、咸豐縣8個(gè)縣市疾控中心送檢的咽拭子204份、皰疹液135份、肛拭子235份，共計(jì)574份病例標(biāo)本，標(biāo)本采集后48 h內(nèi)置-4℃保存，或-80℃度保存，冷藏送檢。

1.2 儀器和試劑

儀器用德國Rotor-Gene Q實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀；病毒RNA的提取用RNA mini Kit試劑盒（QINGEN公司，74104），提取后立即進(jìn)行檢測或放-80℃度保存；核酸擴(kuò)增采用實(shí)時(shí)熒光逆轉(zhuǎn)錄PCR（real-time PCR）方法檢測，試劑盒為北京金豪公司和廣州華瑞安公司、廣州達(dá)安公司產(chǎn)品。核酸提取與擴(kuò)增的檢測步驟、反應(yīng)條件嚴(yán)格按試劑說明書進(jìn)行，試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 病原學(xué)檢測情況

574份病例標(biāo)本，共檢出陽性病例414份，總陽性率為72.13%（414/574）。其中EV71陽性病例146例、CA16陽性病例137例、EV（其他腸道病毒）陽性病例131例，分別占陽性病例的35.27%（146/414）、33.09%（137/414）、31.64%（131/414）。其他腸道病毒因?yàn)樵噭┑脑?，沒有作進(jìn)一步分型鑒定。

2.2 不同類型標(biāo)本檢出情況

共收到病例標(biāo)本574份，其中咽拭子標(biāo)本202份，皰疹液標(biāo)本135份，肛拭子標(biāo)本235份，咽拭子、皰疹液、肛拭子分別檢出陽性標(biāo)本為102、117、195份，陽性檢出率分別為50.00%、86.67%、82.98%，皰疹液標(biāo)本陽性檢出率最高，肛拭子次之，咽拭子標(biāo)本陽性檢出率最低。不同類型標(biāo)本陽性檢出率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=75.379，P<0.05）

2.3 性別分布

574份病例標(biāo)本中，男性病例349份，女性病例225份。男性病例標(biāo)本中共檢出陽性病例254份，陽性率為72.78%（254/349）；其中EV71、CA16、其他腸道病毒陽性率分別為37.80%（96/254）、34.25%（87/254）、27.62%（71/254）。女性病例標(biāo)本中共檢出陽性病例160份，陽性率為71.11%（160/225）；其中其中EV71、CA16、其他腸道病毒陽性率分別為31.25%（50/160）、31.25%（50/160）、37.50%（60/160）。手足口病檢出陽性病例男女兒童性別比為1.59∶1（254/160）。經(jīng)x2檢驗(yàn)，男女兒童總感染率（x2=0.189，P=0.663，P>0.05），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。男女兒童分別感染EV71（x2=2.015，P=0.156，P>0.05）、CA16（x2=0.551，P=0.0.458，P>0.05）、其他腸道病毒差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=3.105，P=0.078，P>0.05）。

2.4 年齡分布

574份病例標(biāo)本中，發(fā)病年齡最小的6個(gè)月，最大的14歲，將病例分為7個(gè)年齡組，4歲以下兒童監(jiān)測病例數(shù)為400例，占全部病例數(shù)的69.69%（400/574），陽性病例299例，占全部陽性病例的72.22%（299/414）。4歲以下年齡組與4歲以上年齡組陽性率差異有顯著意義（x2=4.521，P=0.033，P<0.05）。4歲以下兒童為手足口病的高危人群。見表1。

.5 時(shí)間分布

2012年恩施州每個(gè)月均有手足口病的報(bào)道，發(fā)病呈2個(gè)季節(jié)高峰。第1個(gè)高峰是4～6月，共監(jiān)測病例378例，占全年發(fā)病數(shù)的65.85%（378/574），陽性病例240例，占全年陽性病例的57.97%（240/414），其中5月是典型的疫情高峰，主要是以EV71與CA16型同時(shí)流行；第2個(gè)高峰2.6 地區(qū)分布

2012年恩施州8個(gè)縣市均有手足口病流行。恩施、建始、來鳳、宣恩以EV71型為主，利川、鶴峰、咸豐以CA16型為主。8個(gè)縣市均還伴有欺他腸道病毒流行，其中以巴東和咸豐最多。見圖2。

3 討論

監(jiān)測結(jié)果顯示，574例手足口病病例標(biāo)本檢出陽性病例414例，陽性率為72.13%。EV71、CA16，其他腸道病毒陽性率分別為35.27%、33.09%、31.64%。本研究認(rèn)為2012年恩施州手足口病主要由EV71與CA16引起，同時(shí)伴其他腸道病毒流行。與2009年山東省[2]引起當(dāng)?shù)厥肿憧诓〉牟≡w以EV71為主的結(jié)果有所不同，說明腸道病毒在不同地區(qū)不同時(shí)間引起的流行狀況不盡相同。與2010～2011年曲靖市[3-4]相近，與王錦等[5]報(bào)道的目標(biāo)前我國手足口病的病原組成以EV71和CA16為主，同時(shí)呈現(xiàn)多樣化和復(fù)雜化的特點(diǎn)吻合。對不同類型手足口病標(biāo)本進(jìn)行檢測分析，咽拭子、皰疹液、肛拭子陽性檢出率分別為50.00%、86.67%、82.98%，皰疹液陽性率最高，肛拭子次之，咽拭子標(biāo)本陽性率最低。咽拭子標(biāo)本的采集可能是由于對采樣人員的要求高，采樣部位不容易掌握，或是患兒年齡小，不配合，采集難度大，采集質(zhì)量得不到保證，導(dǎo)致陽性率偏低。而皰疹液和肛拭子的陽性率高，達(dá)到82%以上，是手足口病敏感樣品，而且這兩種樣品采集相對簡單，在對患兒的樣品采集中，盡量采集皰疹液和肛拭子及糞便，以提高該病的確診率，盡早確定病原，早日治療。

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