肖惠煊　周建中　莫煥桐　王奕忠

[摘要] 目的 探討應(yīng)用流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)測(cè)定特發(fā)性血小板減少性紫癜患者外周血中血小板相關(guān)免疫球蛋白水平及T淋巴細(xì)胞亞群變化情況。方法 采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)我院25例特發(fā)性血小板減少性紫癜患者（觀察組），對(duì)照組（正常健康者）25例，對(duì)兩組患者外周血中血小板相關(guān)免疫球蛋白水平及T淋巴細(xì)胞亞群變化比較分析。 結(jié)果 觀察組患者外周血中血小板相關(guān)免疫球蛋白水平均明顯高于對(duì)照組（P<0.05）；觀察組患者的CD3+，CD3+CD4+亞群明顯較對(duì)照組降低（P<0.05），而其CD3+CD8+亞群明顯較對(duì)照組升高（P<0.05），且CD3+CD4+/ CD3+CD8+比值顯著降低（P<0.05）。 結(jié)論 特發(fā)性血小板減少性紫癜患者外周血中血小板相關(guān)免疫球蛋白水平明顯增高，T淋巴細(xì)胞亞群變化明顯，與該病免疫機(jī)制有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 特發(fā)性血小板減少性紫癜；血小板相關(guān)免疫球蛋白；T淋巴細(xì)胞亞群；流式細(xì)胞儀

[中圖分類號(hào)] R554+.6；R446.63 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 2095-0616（2013）09-124-03

免疫性血小板減少性紫癜（immune thrombocytopenic purpura，ITP），是較為常見的出血性疾病，由血小板自身抗體誘導(dǎo)血小板破壞引起的自身免疫性疾病，慢性ITP起病隱襲，癥狀多變，感染時(shí)除發(fā)現(xiàn)血小板減少外，可無(wú)明顯臨床癥狀和體征，出現(xiàn)皮膚瘀點(diǎn)和瘀斑[1]。目前臨床病情復(fù)雜的準(zhǔn)確診斷有一定困難，外周血中血小板相關(guān)免疫球蛋白水平及T淋巴細(xì)胞亞群變化情況已成為ITP臨床診斷、指導(dǎo)治療季評(píng)估預(yù)后的只要指標(biāo)，本研究通過(guò)應(yīng)用流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)測(cè)定特發(fā)性血小板減少性紫癜患者外周血中血小板相關(guān)免疫球蛋白水平及T淋巴細(xì)胞亞群變化情況，探討其臨床診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2011年9月～2012年9月入院治療的35例特發(fā)性血小板減少性紫癜患者，男15例，女20例，年齡17～54歲，平均（38.5±5.8）歲，均為出診患者，均符合《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》[2]的相關(guān)ITP診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除其他免疫性疾病。對(duì)照組35例為正常入院進(jìn)行體檢的健康人群，肝腎功能正常，無(wú)免疫性疾病，外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)正常，男16例，女19例，年齡18～56歲，平均（38.9±5.5）歲，兩組患者在年齡、性別方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 熒光標(biāo)記單克隆抗體：鼠抗人CD3- PECY5/CD4-FITC/CD8-PE三色標(biāo)記和同型對(duì)照鼠抗人IgG1-PECY5/IgG1-FITC/IgG-PE均購(gòu)自法國(guó)Immunotech公司。Beckman Coulter EPICS XL型流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)Beckman-Coulter公司。

1.2.3 T淋巴細(xì)胞亞群變化檢測(cè) 采取患者新鮮的100 μL抗凝血標(biāo)本于樣品測(cè)定管內(nèi)，標(biāo)出處理采用CD41-PE進(jìn)行熒光標(biāo)記處理，然后分別以鼠抗人IgG（γ）-FITC、IgM（μ）-FITC及IgA（α）-FITC單克隆抗體標(biāo)記血小板，并且用同型對(duì)照單克隆抗體同法標(biāo)記并處理對(duì)照組樣本，洗滌后待上機(jī)檢測(cè)。將流式細(xì)胞儀調(diào)整最佳工作狀態(tài)后，以血小板設(shè)門，每份樣品收集檢測(cè)1000個(gè)細(xì)胞，分別讀取CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+亞群的百分比。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)樣本檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，結(jié)果采用（）形式表示，采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

3 討論

特發(fā)性免疫性血小板減少性紫癜是自身免疫性疾病，主要由血小板自身抗體誘導(dǎo)血小板破壞引起，主要臨床表現(xiàn)為出血，黏膜及皮膚出血，血小板減少，嚴(yán)重者如顱內(nèi)出血可危及生命。根據(jù)患者具體發(fā)病年齡、臨床表現(xiàn)及血小板持續(xù)減少時(shí)間等，分為急性型和慢性型，急性型多見于兒童，常為自限性，慢性型好發(fā)于青年女性，多發(fā)病于20～50歲之間，女性發(fā)病率較男性高2～3倍，絕大多數(shù)慢性ITP患者缺乏前驅(qū)癥狀或病因。ITP的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜多樣，慢性ITP起病隱襲，多數(shù)患者病因不清少數(shù)與感染有關(guān)。目前研究普遍認(rèn)為是機(jī)體細(xì)胞免疫異常導(dǎo)致血小板自身抗體產(chǎn)生，單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)中體液免疫介導(dǎo)的血小板破壞增加、骨髓巨核細(xì)胞損傷或功能異常使血小板產(chǎn)生降低，目前有更多的研究證實(shí)越來(lái)越多的淋巴細(xì)胞異常存在于患者體內(nèi)，可能是ITP發(fā)病起重要作用[3]。血小板自身抗體可能來(lái)源于機(jī)體免疫系統(tǒng)針對(duì)血小板骨架蛋白或糖蛋白（platelet surface glycoproteins，GP）如GPⅡb/GPⅢa、GPIb/IX產(chǎn)生的自身抗體并結(jié)合在血小板膜上，也可能是血清中抗體分子或抗原-抗體復(fù)合物在血小板表面的粘著或覆蓋。目前很多研究結(jié)果也表明，ITP患者除自身體液免疫異常外，還伴有細(xì)胞免疫異常，T淋巴細(xì)胞亞群、細(xì)胞因子表達(dá)及功能改變與發(fā)病機(jī)制有密切關(guān)系，感染發(fā)生時(shí)，巨噬細(xì)胞上的Fc受體和C3b受體數(shù)量增多，親和力增高，使裹有PAIgG的血小板更易被破壞[4]。同時(shí)，細(xì)菌可直接損害巨核細(xì)胞，使血小板的產(chǎn)生減少。

臨床上對(duì)ITP患者的診斷技術(shù)主要以血小板相關(guān)免疫球蛋白（platelet-associated immunoglobin，PAIg）和T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)為主，慢性ITP患者曾經(jīng)接受長(zhǎng)期多種治療（包括糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑及脾切除術(shù)等），可抑制抗體產(chǎn)生，導(dǎo)致抗體滴度未達(dá)到檢測(cè)最低限。因此，血小板相關(guān)抗體的檢測(cè)對(duì)于初診患者的意義較大[5-6]。本研究通過(guò)應(yīng)用流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)測(cè)定特發(fā)性血小板減少性紫癜患者外周血中血小板相關(guān)免疫球蛋白水平及T淋巴細(xì)胞亞群變化情況進(jìn)行分析討論，結(jié)果顯示觀察組患者外周血中血小板相關(guān)免疫球蛋白水平均明顯高于對(duì)照組（P<0.05）；觀察組患者的CD3+、CD3+CD4+亞群明顯較對(duì)照組降低（P<0.05），而其CD3+CD8+亞群明顯較對(duì)照組升高（P<0.05），且CD3+CD4+/CD3+CD8+比值顯著降低（P<0.05），與以往的相關(guān)研究結(jié)論基本一致。

綜上，通過(guò)應(yīng)用流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)測(cè)定特發(fā)性血小板減少性紫癜患者外周血中血小板相關(guān)免疫球蛋白水平及T淋巴細(xì)胞亞群變化情況的分析，ITP患者外周血淋巴細(xì)胞亞群水平存在異常情況，提示T細(xì)胞亞群水平及分布異常在發(fā)病過(guò)程起重要作用，患者體內(nèi)細(xì)胞免疫和體液免疫紊亂，因此動(dòng)態(tài)觀察外周血淋巴細(xì)胞亞群水平的變化對(duì)于了解ITP患者病情，判斷療效及預(yù)后均有一定意義[7-10]。

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（收稿日期：2013-04-08）