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        和絡(luò)泄?jié)岱綄?duì)慢性腎功能衰竭大鼠內(nèi)皮素水平的影響

        2013-04-29 00:44:03馮廣青吳瓊

        馮廣青 吳瓊

        【摘要】 目的 研究單側(cè)輸尿管梗阻后,實(shí)驗(yàn)大鼠內(nèi)皮素水平以及腎功能等指標(biāo)的變化,從而探討與內(nèi)皮素相關(guān)的腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生機(jī)制及和絡(luò)泄?jié)岱綄?duì)延緩腎間質(zhì)纖維化的作用。方法 實(shí)驗(yàn)研究采用單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)誘導(dǎo)腎間質(zhì)纖維化的物模型,將48只Waster大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham)、模型組(UUO)、和絡(luò)泄?jié)岱街委熃M(UUO+REL),在術(shù)后3d、10d、20d、30d每組各取4只處死,處死前收集空腹血清,尿液標(biāo)本,檢測(cè)血漿內(nèi)皮素水平及肌酐、尿素氮水平和凝血機(jī)制,以及尿蛋白水平。結(jié)果 術(shù)后3天,各組大鼠血尿素氮、肌酐水平比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);術(shù)后10天,UUO組大鼠血尿素氮、肌酐升高,與相應(yīng)假手術(shù)組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01),手術(shù)后3天各組大鼠的內(nèi)皮素水平無(wú)顯著差異。結(jié)論 內(nèi)皮素(ET)參與了單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生發(fā)展全過(guò)程,和絡(luò)泄?jié)岱侥苡绊慐T的代謝,能夠降低ET水平,改善腎功能并延緩腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)展。

        【關(guān)鍵詞】 內(nèi)皮素;慢性腎功能衰竭;和絡(luò)泄?jié)岱?/p>

        doi:10.3969/j.issn.1004-7484(s).2013.09.005 文章編號(hào):1004-7484(2013)-09-4790-02

        1 資料與方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:健康Wistar大鼠48只,雌雄各半,6-8周齡,體重180-220g,平均體重200g,由青島市動(dòng)物研究所提供。于室溫23℃,用標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料分籠喂養(yǎng),每籠4只。自由飲水。12小時(shí)交替照明。

        1.2 實(shí)驗(yàn)藥品和絡(luò)泄?jié)岱?方劑:當(dāng)歸12g、川芎12g、赤芍12g、白術(shù)15g、制大黃10g、六月雪30g、土茯苓30g、海藻15g、葫蘆巴15g。由青島市中醫(yī)醫(yī)院制劑室制成滅菌濃煎密封制劑,藥物比重為1.10g/L,生藥含量為1.8g/ml。

        1.3 儀器和試劑 全自動(dòng)生化分析儀、722s分光光度計(jì)、高速低溫臺(tái)式離心機(jī)3K30型、可調(diào)式微量移液器、恒溫水浴箱、無(wú)菌工作臺(tái)、天平、臺(tái)式離心機(jī)、超凈工作臺(tái)、代謝籠、照相裝置等均為國(guó)產(chǎn)。低溫冰箱、內(nèi)皮素試劑盒。

        1.4 實(shí)驗(yàn)方法

        1.4.1 實(shí)驗(yàn)分組 48只大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后隨機(jī)分為Ⅰ組——假手術(shù)組(Sham)、Ⅱ組——模型組(UUO)、Ⅲ組——中藥灌胃組(UUO+REL),每組16只。

        1.4.2 模型制作及動(dòng)物處理 參考《現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)》,采用單側(cè)輸尿管結(jié)扎法(UUO)進(jìn)行腎間質(zhì)纖維化模型制備。正常對(duì)照組開腹后不結(jié)扎輸尿管,直接縫合。REL組在術(shù)后第一天開始給予和絡(luò)泄?jié)岱綕饪s液1.5ml灌胃,早晚各一次,對(duì)照組灌等量生理鹽水。全部大鼠術(shù)后均以原方式喂養(yǎng)。術(shù)后3、10、20、30天每組各殺4只大鼠。處死前留取24小時(shí)尿,腹主動(dòng)脈穿刺取血檢測(cè)血生化指標(biāo)。

        1.4.3 大鼠的處死及標(biāo)本的采集和處理

        1.4.3.1 血液標(biāo)本 每只大鼠用10%水合氯醛4ml/kg腹腔注射麻醉后,腹腔正中切口打開腹腔,腹主動(dòng)脈穿刺抽血5ml,分別裝密封試管三只。

        1.4.3.2 24小時(shí)尿蛋白采集 處死大鼠前一天金屬代謝籠收集24小時(shí)尿量,收集前大鼠禁食不禁水。記錄每只大鼠24小時(shí)尿總量,取適量(約5ml)用比濁法測(cè)定尿蛋白濃度,24小時(shí)尿蛋白定量=尿蛋白濃度×24小時(shí)尿量。

        1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)用(χ±s)表示。應(yīng)用SPSS12.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料采用單因素方差分析和q檢驗(yàn)(Newman-Keuls法)。相關(guān)分析采用兩變量間直線相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)意義,P<0.01為差異有顯著性統(tǒng)計(jì)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 實(shí)驗(yàn)大鼠腎功能變化 術(shù)后3天,各組大鼠血尿素氮、肌酐水平比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);術(shù)后10天,UUO組大鼠血尿素氮、肌酐升高,與Sham組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01),隨時(shí)間進(jìn)展血尿素氮、肌酐逐漸升高,REL組血肌酐、尿素氮較UUO組下降(P<0.01),但未降至Sham組水平,見表1。

        2.4 實(shí)驗(yàn)大鼠凝血機(jī)制變化 手術(shù)后3天各組大鼠的APTT水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),術(shù)后3天、10天、20天、30天UUO大鼠APTT水平呈遞減態(tài)勢(shì),Sham組則呈現(xiàn)遞增態(tài)勢(shì),但組間對(duì)比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),REL組大鼠APTT在10天以后相對(duì)比Sham組和UUO組縮短(P<0.05),組間對(duì)照有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。FIB檢測(cè)數(shù)值顯示UUO組在各個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)顯著高于其他兩組(P<0.01)。REL組與UUO組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),與Sham組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),見表4。

        3 討論

        腎間質(zhì)纖維化幾乎是各種腎臟疾病進(jìn)展到終末期腎衰竭的共同途徑和主要病理基礎(chǔ),內(nèi)皮素(endothelin,ET)是Yanagisawa等于1988年從豬主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液中分離出的一種小分子生物活性肽,除了收縮血管作用外,ET還是一個(gè)強(qiáng)大的炎癥介質(zhì)。近年來(lái)的研究表明,ET參與了腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)展過(guò)程。生理?xiàng)l件下血漿中ET達(dá)到很高水平是不可能的。但試驗(yàn)證實(shí):發(fā)生腎功能衰竭的動(dòng)物血漿內(nèi)皮素、尿內(nèi)皮素及腎組織中內(nèi)皮素的含量均有顯著的增高。有人對(duì)CRF患者透析前后血漿內(nèi)皮素水平作了對(duì)照,結(jié)果有顯著差異。并有人提出ET水平的高低可以作為反映腎功能衰竭病情嚴(yán)重性的一個(gè)指標(biāo)。

        在治療腎臟病方面:當(dāng)歸具有防治腎缺血再灌注損傷的作用,以及抗氧化和清除自由基的作用,可提高機(jī)體的抗氧化能力,抑制由自由基參與的糖基化終末產(chǎn)物(AGE)的產(chǎn)生,保護(hù)超氧化物歧化酶(SOD)活性,使腎臟基質(zhì)細(xì)胞的增值受到抑制,從而抑制了腎小球的損害,減少尿蛋白,保護(hù)腎功能。

        慢性腎功能衰竭的中醫(yī)臨床分型中,各個(gè)類型都存在內(nèi)皮素升高,也都有血瘀證兼夾存在,提示“久病致瘀,久病入絡(luò)”,和絡(luò)泄?jié)岱☉?yīng)該作為腎功能衰竭治療的基本治則和絡(luò)泄?jié)岱浇?jīng)實(shí)驗(yàn)研究和臨床驗(yàn)證,安全有效,能影響ET的代謝,降低ET水平,還能夠改善脂質(zhì)代謝,改善凝血功能,從多個(gè)環(huán)節(jié)實(shí)現(xiàn)延緩腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)展,從而達(dá)到改善腎功能的目的。

        參考文獻(xiàn)

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        [2] 趙玉庸.腎毒清對(duì)慢性腎功能衰竭大鼠血脂及內(nèi)皮素影響的研究[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2002,8(12):23-25.

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