摘要：建立了毛細(xì)管電泳電致化學(xué)發(fā)光聯(lián)用技術(shù)（EEL）檢測(cè)煙草浸出液中尼古丁含量的方法?？疾炝藱z測(cè)電位、檢測(cè)池中Rubpy）2+濃度和緩沖液p值、E運(yùn)行緩沖液濃度和p值、進(jìn)樣時(shí)間和電壓，以及E分離電壓等實(shí)驗(yàn)條件對(duì)尼古丁測(cè)定的影響。在優(yōu)化的條件下，尼古丁檢測(cè)的線性范圍為低濃度段：～ μgL（r>999）、高濃度段：～ μgL（r>996），檢出限為 μgL（N=）。將本方法用于種品牌的煙草浸出液中尼古丁含量的測(cè)量，測(cè)定值均與煙盒上尼古丁的標(biāo)注值相吻合，樣品的加標(biāo)回收率為9%～6%。

關(guān)鍵詞：毛細(xì)管電泳； 電致化學(xué)發(fā)光； 聯(lián)吡啶釕； 尼古丁； 煙草

引言

煙堿（Nicotine），俗名尼古丁，分子式 N2，是一種特殊的生物堿，也是煙草的重要成分。少量尼古丁對(duì)中樞神經(jīng)有興奮作用，而大量尼古丁對(duì)心血管和呼吸系統(tǒng)有直接的毒害作用。目前，尼古丁的測(cè)定方法主要包括色譜法、質(zhì)譜法、分光光度法和極譜分析法等。這些方法都在不同程度上存在不足之處，如操作繁瑣、耗時(shí)，使用有機(jī)溶劑，運(yùn)行成本高等。因此，發(fā)展一種新的測(cè)量體系，實(shí)現(xiàn)對(duì)尼古丁方便、快速、靈敏的檢測(cè)尤為重要。

毛細(xì)管電泳（apillary electrophoresis，E）作為一種液相分離技術(shù)，具有分離效率高、分析速度快、樣品用量少、裝置簡(jiǎn)單等特點(diǎn)。電致化學(xué)發(fā)光（Electrochemiluminescence，EL）作為一種低背景分析技術(shù)，具有裝置簡(jiǎn)單、靈敏度高及可進(jìn)行原位檢測(cè)等特點(diǎn)。EEL技術(shù)將E和EL的優(yōu)點(diǎn)有機(jī)結(jié)合起來，成為現(xiàn)代分析化學(xué)中一種重要的痕量分析技術(shù)。如iu等采用IO為工作電極，利用EEL技術(shù)實(shí)現(xiàn)了脯氨酸的高靈敏檢測(cè)；hang等利用發(fā)光二極管誘導(dǎo)熒光技術(shù)（LEI）和EEL技術(shù)結(jié)合，構(gòu)建ELEIEL體系，對(duì)一些生物堿和氨基酸進(jìn)行了檢測(cè)。

本研究利用尼古丁對(duì)Rubpy）2+的EL信號(hào)增強(qiáng)作用，建立了毛細(xì)管電泳電致化學(xué)發(fā)光聯(lián)用技術(shù)（EEL）檢測(cè)煙草浸出液中尼古丁含量的方法。

2實(shí)驗(yàn)部分

2儀器與試劑

MPIA型EEL檢測(cè)儀（西安瑞邁分析儀器有限公司），包括數(shù)控毛細(xì)管電泳高壓電源（～2 kV）、電化學(xué)分析儀和多功能化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀；三電極系統(tǒng)包括直徑 μm鉑盤電極（工作電極）、鉑絲電極（輔助電極）和AgAgl電極（參比電極）；分離毛細(xì)管為未涂層石英毛細(xì)管（ cm×2 μm id， 河北省永年銳洋色譜器件有限公司）；p型酸度計(jì)（北京環(huán)宇科信科技有限公司）；A Gen Pure純水機(jī)（德國(guó)A公司）。Rubpy）l2·62O（Aldrich公司）；尼古丁標(biāo)準(zhǔn)品（ gL 百靈威科技有限公司）；其它試劑均為分析純。紅金龍、白沙煙、廬山香煙樣品均購(gòu)于超市。

22實(shí)驗(yàn)方法

工作電極用 Al2O粉末拋光，在水中超聲洗凈后，將其放置在正對(duì)毛細(xì)管出口末端處。實(shí)驗(yàn)前將毛細(xì)管依次用 molL l、超純水、 molL NaO各沖洗2 min，然后用2 mmolL PB（p ）溶液平衡2 h。發(fā)光檢測(cè)池中添加 mmolL Rubpy）2+和 mmolL PB（p 8）混合液，測(cè)定時(shí)，將毛細(xì)管進(jìn)樣端插入2 mmolL PB（p ）中，待發(fā)光信號(hào)基線穩(wěn)定之后，采用電動(dòng)進(jìn)樣方式在 kV電壓下進(jìn)樣 s，然后施加 kV的電泳電壓進(jìn)行分離檢測(cè)，光電倍增管負(fù)高壓為8 V。為了獲得良好的重現(xiàn)性，減小由于溶劑蒸發(fā)對(duì)測(cè)定的影響，每 h 更換一次Rubpy）2+溶液。所有進(jìn)樣溶液在進(jìn)入毛細(xì)管前需用22 μm醋酸纖維素膜過濾。

標(biāo)準(zhǔn)品的處理：將尼古丁標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成 mgL儲(chǔ)備液，放冰箱 ℃中保存，使用時(shí)逐級(jí)稀釋至需要的濃度。

樣品的處理：去除煙卷外殼紙，準(zhǔn)確稱取經(jīng)粉碎的 g煙絲樣品，置于 mL錐形瓶中，用 mL超純水超聲波提取 min，過濾，浸提液置 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

結(jié)果與討論

尼古丁在Rubpy）2+ EEL系統(tǒng)中的電化學(xué)及EL響應(yīng)

利用恒電位方式控制工作電極電壓，如圖所示，在 s處，電流明顯增大，說明此時(shí)電極表面有氧化還原反應(yīng)發(fā)生。同時(shí)，在EL譜圖中， s處的EL強(qiáng)度顯著增大，說明尼古丁對(duì)Rubpy）2+的EL有明顯增強(qiáng)作用，可利用這種增強(qiáng)作用實(shí)現(xiàn)對(duì)尼古丁的定量測(cè)定。尼古丁在金屬電極表面的電化學(xué)氧化包含一個(gè)脫氫的過程，脫氫后的尼古丁自由基具有很好的還原性，與氧化態(tài)的Rubpy）+反應(yīng)，促使其產(chǎn)生激發(fā)態(tài)的，從而促進(jìn)EL的產(chǎn)生。

2優(yōu)化條件

2檢測(cè)電位的影響當(dāng)按恒電位方式控制工作電極電位在～ V（vs AgAgl）范圍內(nèi)變化時(shí)（圖2），EL強(qiáng)度開始隨著電位的增加而增大，且當(dāng)電位達(dá)到 V時(shí)，EL強(qiáng)度達(dá)到最大值；而當(dāng)電位超過 V 后，EL 強(qiáng)度又隨電位的增加而下降。這主要是由于Rubpy）+的電生效率與施加在工作電極上的氧化電位值有關(guān)。當(dāng)電極電位值未達(dá)到最佳電位時(shí)，由于Rubpy）+的電生效率低，電解產(chǎn)生的2毛細(xì)管運(yùn)行緩沖液濃度和p值的影響考察了PB濃度在～ mmolL范圍內(nèi)對(duì)EL強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明，當(dāng)PB濃度低于2 mmolL時(shí)，EL強(qiáng)度隨著PB濃度的增大而增強(qiáng)；但PB濃度高于2 mmolL時(shí)，EL強(qiáng)度隨著PB濃度的增大而減小，且焦耳熱效應(yīng)加劇，峰形變寬，信噪比變差。因此，選擇2 mmolL PB作為毛細(xì)管電泳運(yùn)行緩沖溶液。

實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)運(yùn)行緩沖液的p=時(shí)，EL強(qiáng)度達(dá)最大值。因此，選擇運(yùn)行緩沖液的p=。

2進(jìn)樣電壓和時(shí)間的影響分別對(duì)進(jìn)樣電壓（6～6 kV）和進(jìn)樣時(shí)間（6～6 s）進(jìn)行了考察。結(jié)果表明，當(dāng)進(jìn)樣電壓為 kV、進(jìn)樣時(shí)間為 s時(shí)，具有最大的EL強(qiáng)度；而當(dāng)進(jìn)樣電壓高于 kV、進(jìn)樣時(shí)間大于 s時(shí)，峰展寬嚴(yán)重。因此，本研究中進(jìn)樣電壓和進(jìn)樣時(shí)間分別選擇 kV和 s。

2分離電壓的影響在8～8 kV，對(duì)分離電壓進(jìn)行了考察（圖）。結(jié)果表明，隨著分離電壓的增大，遷移時(shí)間縮短。而當(dāng)分離電壓低于 kV時(shí)，EL強(qiáng)度隨著分離電壓的增大而迅速增強(qiáng)；當(dāng)分離電壓高于 kV時(shí)，EL強(qiáng)度開始下降，這可能是由于大量分析物從毛細(xì)管進(jìn)入檢測(cè)池，導(dǎo)致電極表面Rubpy）2+濃度降低，而且在此范圍內(nèi)峰型變寬，焦耳熱變大，基線升高。因此，綜合考慮靈敏度、峰寬、噪聲、焦耳熱及遷移時(shí)間等因素，選擇 kV作為毛細(xì)管電泳的分離電壓。