摘要：建立了在線凈化液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定動物源食品中金剛烷胺的殘留。樣品用甲醇1%三氯乙酸或乙腈提取，提取液用陽離子交換在線凈化柱（ycloneMX）凈化，%氨水甲醇溶液將分析物洗脫轉(zhuǎn)入至apcellPakMG18分析柱，經(jīng)色譜分離后，用串聯(lián)質(zhì)譜檢測。方法的定量限（LOQ）牛奶為2μgkg，動物組織和雞蛋為μgkg，在1～2μgL濃度范圍內(nèi)呈良好線性，線性相關(guān)系數(shù)大于999。方法在個水平的添加回收率為8%～96%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在%～9%之間。方法簡單快速，回收率高，重現(xiàn)性好，適用于動物源食品中金剛烷胺殘留的定量及確證分析。

關(guān)鍵詞：在線凈化液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜；金剛烷胺；殘留；動物源食品

1引言

金剛烷胺是一種對稱的三環(huán)狀胺，可以抑制病毒穿入宿主細(xì)胞，并影響病毒的脫殼，抑制其繁殖，在臨床上能有效預(yù)防和治療各種A型流感病毒的感染，同時也是帕金森綜合癥的治療藥物。但金剛烷胺對食用者可能產(chǎn)生嗜睡、失眠、眩暈、抑郁、惡心、食欲減退等多種不良反應(yīng)，具有一定的毒副作用。而且，長期使用金剛烷胺可以使病毒產(chǎn)生不同程度的耐藥性，誘導(dǎo)產(chǎn)生新型耐藥病毒。因此，我國農(nóng)業(yè)部發(fā)布了《關(guān)于清查金剛烷胺等抗病毒藥物的緊急通知》，規(guī)定除經(jīng)批準(zhǔn)生產(chǎn)、使用的疫苗產(chǎn)品外，禁止使用其它藥物防治高致病性禽流感等一類病原微生物引起的病毒性疫病。但目前我國畜禽飼養(yǎng)中濫用金剛烷胺現(xiàn)象嚴(yán)重，急需建立快速、靈敏、準(zhǔn)確的動物源食品中金剛烷胺殘留量的分析方法。

目前，檢測金剛烷胺的方法有氣相色譜質(zhì)譜法（GM）＼[12＼]、液相色譜法（PL）＼[～7＼]和液相色譜質(zhì)譜法LM＼[8～12＼]，方法多應(yīng)用于生物體液和醫(yī)藥中金剛烷胺的檢測＼[1～11＼]，而動物組織中金剛烷胺殘留的檢測方法較少＼[12＼]。L和GM均需要復(fù)雜的衍生處理過程，具有高選擇性、高靈敏度特點的LM在金剛烷胺的檢測具有一定的優(yōu)勢，但仍需要較好的前處理以降低LM的基質(zhì)效應(yīng)，尤其是對于復(fù)雜的動物組織樣品。urbolow在線凈化技術(shù)結(jié)合了擴(kuò)散、化學(xué)和體積排除的原理，在捕獲感興趣分析物的同時，快速凈化樣品；與串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用，在簡化樣品前處理的同時保證了方法的靈敏度，是近年發(fā)展起來的一種新型聯(lián)用檢測技術(shù)，已在殘留分析得到了較好的應(yīng)用＼[1～1＼]。本研究采用該技術(shù)建立了動物源食品中金剛烷胺殘留的檢測方法，方法簡單、快速，回收率穩(wěn)定、靈敏度高，能夠?qū)Φ蜐舛鹊慕饎偼榘愤M(jìn)行定性與定量分析，已應(yīng)用本實驗室的日常檢測工作。

2實驗部分

21儀器與試劑

urbolow在線凈化液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國hermoFisher公司），由多功能自動進(jìn)樣器（配有1μL定量環(huán)）、兩個耐壓12kPa的四元梯度液相泵、六通閥切換裝置、多元柱切換裝置和QQuantumUltra三重四極桿質(zhì)譜儀組成。igmaK1型離心機(jī)美國igma公司，P21型均質(zhì)器（瑞士Kinematica公司）。

甲酸、異丙醇、乙腈、丙酮和氨水為色譜純，水經(jīng)MilliQ純系統(tǒng)處理（美國Millipore公司）。

鹽酸金剛烷胺對照品，購于中國藥品生物制品檢定所。

22實驗方法

221在線凈化色譜條件在線凈化程序主要為凈化和分離過程，凈化過程（）在上樣泵驅(qū)動凈化流動相在urbolow柱完成，分離過程PL是洗脫泵驅(qū)動分析流動相在分析柱上完成，整個程序通過兩個六通閥切換實現(xiàn)流路的改變。的凈化柱為ycloneMX柱mm×mm6μmParticlesize6poresize，流動相A為1mmolL乙酸銨01%乙酸溶液、為乙腈、為丙酮乙腈異丙醇（∶∶VV）、為%氨水甲醇溶液。進(jìn)樣量為μL。PL的分析柱apcellPakMG18柱1mm×21mm，μm；流動相A為%甲酸溶液，流動相為乙腈，其在線凈化程序見表1，其中在程序中每步的變化采用瞬變模式，PL每步的變化除最后一步采用瞬變模式外其它步驟間改變采用漸變模式。整個運行時間為8min，在～7min切入質(zhì)譜系統(tǒng)。