摘 要：建立了分散液液微萃取-反萃取-接受相固化與高效液相色譜聯(lián)用測(cè)定減肥茶中西布曲明的方法。優(yōu)化的條件為：400 L石油醚為L(zhǎng)甲醇為分散劑、14 萃取劑、120 L 0.2 mol/L HCl溶液和1 L甲醇的混合溶液為接受相，萃取2 min。在優(yōu)化條件下西布曲明的富集因子可達(dá)130倍。方法的線性范圍為0.6～200 /L，檢測(cè)出限為0.2 /L，定量限為0.6 /L。樣品加標(biāo)回收率介于91.9%～108.4%，日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于14%。

關(guān)鍵詞：分散液液微萃取-反萃取-接受相固化；高效液相色譜；西布曲明

1 引 言

西布曲明是一種中樞神經(jīng)抑制劑，可抑制去甲腎上腺素、5-羥色胺和多巴胺的再攝取，長(zhǎng)期服用可引起血壓升高，心率加快、厭食、肝功能異常等，重者可危及生命^[1]。由于西布曲明價(jià)格低廉，屢被一些不法商家違禁加入減肥食品中，因此，建立復(fù)雜基質(zhì)中西布曲明的快速分離分析方法具有重要意義。

已有文獻(xiàn)報(bào)道了液液萃?。↙LE）或固相萃?。⊿PE）與儀器聯(lián)用^[2～7]檢測(cè)血漿和保健品中的西布曲明，然而，LLE和SPE需要較大量有機(jī)溶劑、操作繁瑣耗時(shí)^[8]。分散液液微萃取-上浮溶劑固化法（DLLME-SFO）是Zanjani等^[9]于2007年提出來(lái)的一種新萃取技術(shù)，具有萃取時(shí)間短、有機(jī)萃取劑用量少和富集因子高等優(yōu)點(diǎn) [10～17]。但由于所用萃取劑為熔點(diǎn)接近室溫的有機(jī)溶劑，沸點(diǎn)較高，在氣相色譜分析中保留時(shí)間較長(zhǎng)，溶劑峰會(huì)對(duì)保留時(shí)間相近組分造成干擾^[10]，且由于是將有機(jī)相直接進(jìn)樣，使用HPLC進(jìn)行分析時(shí)，可選的有機(jī)相很有限，多是十一醇或十二醇^[11～17]，這在一定程度上限制了該方法與HPLC分析的兼容性。

在DLLME-SFO的基礎(chǔ)上，本研究提出了一種基于接受相固化的分散液液微萃取-反萃取-接受相固化 （DLLME-BE-SAP） 新技術(shù)，通過(guò)將分散液液微萃取反萃取后的接受相水溶液固化，分離后將接受相冰粒室溫溶解后直接進(jìn)樣HPLC分析，有效避免了有機(jī)萃取溶劑進(jìn)樣對(duì)色譜柱的污染、擴(kuò)大了有機(jī)萃取溶劑的選擇范圍，提升了萃取方法與HPLC的兼容性。由于萃取和反萃取均采用了分散液液微萃取技術(shù)，與常規(guī)的三相液相微萃取相比，萃取時(shí)間明顯縮短，簡(jiǎn)化了分離操作。目前，涉及接受相固化的微萃取技術(shù)尚未見報(bào)道。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

1100液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司），由G1312A液相泵、G1316A柱溫箱、G1315二極管陣列檢測(cè)器和7725手動(dòng)進(jìn)樣閥組成。超純水由Millipore公司的Milli-Q純水系統(tǒng)（Bedford，MA，美國(guó)）制得。

鹽酸西布曲明（中國(guó)藥品生物制品檢定所），甲醇和乙腈（色譜純），其它試劑為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?。兩種市售減肥茶（Dietic tea）a和b。

儲(chǔ)備液的配制：準(zhǔn)確稱取10 mg鹽酸西布曲明，用甲醇溶解并定容至10 mL，配制成1 g/L的西布曲明儲(chǔ)備液。標(biāo)準(zhǔn)溶液由一定體積的儲(chǔ)備液稀釋制得。

樣品溶液的制備：減肥茶磨成粉末，稱取減肥茶A1.25 g、減肥茶B 1.0 g各一份，分別置于2個(gè)100 mL小燒杯中，用2 mL沸水浸泡10 min，均定容至100 mL，溶液經(jīng)減壓抽濾，上清液即為樣品溶液。加標(biāo)樣品除在樣品中加入實(shí)量西布曲明外，其它步驟同上。

2.2 色譜條件

3.1.3 萃取時(shí)間 考察了萃取時(shí)間分別為30，60，90，120和150 s時(shí)對(duì)西布曲明富集因子的影響，對(duì)應(yīng)的富集因子分別為84.1，102，114.4，129.0和99.1，可見，萃取120 s時(shí)，能獲得較高的富集因子。

3.1.4 接受相組成 西布曲明是叔胺化合物，實(shí)驗(yàn)選擇酸性水溶液作為接受相，通過(guò)使西布曲明質(zhì)子化實(shí)現(xiàn)反萃取。分別考察了0.1和0.2 mol/L 的CH3COOH，HCl，HNO3，H2SO4和H3PO4溶液作為接受相時(shí)對(duì)西布曲明富集因子的影響.結(jié)果表明，采用0.2 mol/L HCl作為接受相時(shí)，西布曲明可以獲得最大的富集因子。為了縮短反萃時(shí)間，實(shí)驗(yàn)還考察了接受相加入分散劑甲醇對(duì)西布曲明富集因子的影響，考察的甲醇與HCl溶液體積比分別為1∶14，2∶13，3∶12，4∶11和5∶10，當(dāng)甲醇與HCl體積比為1∶14時(shí)，西布曲明有最大的富集因子，且接受相凝固速度快。當(dāng)甲醇與HCl的體積比大于3∶12時(shí)，接受相幾乎不能凝固，這可能是由于甲醇的熔點(diǎn)太低（ 98 ℃）所致。反萃振搖30 s，反萃效率（接受相中西布曲明的物質(zhì)的量與原料液和萃取后料液中西布曲明的物質(zhì)的量差值的比值）大于97%。本實(shí)驗(yàn)選擇14

采用本方法對(duì)市售減肥茶a和b進(jìn)行分析。以減肥茶a為例，相關(guān)色譜圖如圖2c和2d。圖2c說(shuō)明，減肥茶a中未檢出西布曲明，圖2d顯示加標(biāo)樣品中的西布曲明能夠順利被檢出。同樣，減肥茶b中也未檢出西布曲明。對(duì)減肥茶樣品進(jìn)行高、中、低濃度的標(biāo)準(zhǔn)加入回收分析，西布曲明萃取后獲得的加標(biāo)回收率介于91.9%～108.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差介于5.1%～14%，說(shuō)明本方法具有較好的精密度和準(zhǔn)確度，可用于減肥茶中西布曲明的分析。

3.3 與其它方法的比較

將本方法與文獻(xiàn)方法進(jìn)行比較（表1）可知，本方法借助簡(jiǎn)便的DLLME-BE-SAP對(duì)西布曲明進(jìn)行分離富集，有機(jī)萃取溶劑消耗少、萃取時(shí)間短，采用價(jià)格相對(duì)便宜的HPLC-UV進(jìn)行檢測(cè)，靈敏度高于一般的HPLC-UV和CE，甚至高于或接近部分HPLC-MS方法。

4 結(jié) 論

本研究建立了一種操作簡(jiǎn)便、萃取時(shí)間短、與HPLC兼容性好的DLLME-BE-SAP樣品分離富集方法，通過(guò)將分散液液微萃取反萃取后的接受相水溶液固化，分離后將接受相冰粒室溫溶解后直接進(jìn)樣HPLC分析，對(duì)減肥茶中痕量違禁藥物西布曲明進(jìn)行了檢測(cè)。