胡向陽，李 安，林春淑，楊 璇

（中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科，廣東 珠海 519000）

布渣葉水煎液對非酒精性脂肪肝大鼠血脂及炎癥反應(yīng)影響研究

胡向陽，李 安，林春淑，楊 璇

（中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科，廣東 珠海 519000）

目的：觀察布渣葉水煎液對非酒精性脂肪肝大鼠血脂、炎癥反應(yīng)的影響。方法：采用高脂飲食法制備大鼠模型，將48只Wistar雄性大鼠隨機(jī)分為正常對照組、模型對照組、非諾貝特組、布渣葉水煎液組，分別灌服生理鹽水、非諾貝特溶液、布渣葉水煎液。結(jié)果：布渣葉水煎液可降低非酒精性脂肪肝大鼠血清和肝組織TC、TG及肝指數(shù)，降低肝組織TNF-α、MCP-1和NF-κB等炎癥因子的表達(dá)。結(jié)論：布渣葉水煎液對非酒精性脂肪肝大鼠血脂、炎癥反應(yīng)具有改善作用。

布渣葉；大鼠；非酒精性脂肪肝；血脂；炎癥反應(yīng)

非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是指無過量飲酒史，以肝細(xì)胞脂肪變性和脂肪貯積為特征的臨床病理綜合征。包括單純性脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性肝纖維化和脂肪性肝硬化4個病理過程［1］。NAFLD通常被認(rèn)為是良性病變，但是研究顯示其是許多慢性肝臟疾病的早期階段，17%的NAFLD在5～ 10年內(nèi)發(fā)展為非酒精性脂肪性肝炎，10 ～ 15年內(nèi)肝硬化的發(fā)生率為15%～25%，NAFLD已被公認(rèn)為是隱匿性肝硬化的常見病因［2］。目前，對于NAFLD的治療多處于探索階段，尚無特效藥物，尋求防治NAFLD的有效藥物是當(dāng)前研究的特點(diǎn)。中醫(yī)認(rèn)為，NAFLD的發(fā)病多因嗜食肥甘厚味，體豐痰盛，或情志失調(diào)，或起居失常，脾失健運(yùn)，肝失疏泄，致使痰濁瘀毒郁結(jié)于肝臟。布渣葉，又名破布葉、山茶葉、爛布渣等，為椴樹科破布葉屬植物破布葉（Microcos paniculata Linn）的干燥葉，主要分布于我國廣東、廣西、海南等地。本品味甘、淡，性微寒，無毒，民間常采布渣葉曬干泡水當(dāng)茶飲，其是“廣東涼茶”、“十味溪黃草顆?！?、“王老吉”等的主要組成藥物之一，有清熱消滯、利濕退黃之功效，用于治療感冒，濕熱食滯，濕熱黃疸等疾?。?］。藥理研究表明，布渣葉中可能含有黃酮類、生物堿、有機(jī)酸、氨基酸、蒽醌等成分，具有解熱、退黃及促消化等作用［4，5］。筆者觀察了布渣葉水煎液對NAFLD大鼠炎癥反應(yīng)的影響，報道如下。

1 材料與方法

實(shí)驗(yàn)動物：Wistar大鼠，SPF級，雄性，體質(zhì)量（140±20）g，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號粵檢證字2011C539，室溫適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后用于本實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)藥物：非諾貝特膠囊（力平之），法國利博福尼制藥公司（Laboratoires Fournier S.A.）生產(chǎn)，注冊證號H20100602，1粒200mg，產(chǎn)品批次18246，臨用前以生理鹽水溶解濃度為40mg/mL。布渣葉飲片由廣東省中醫(yī)院提供，布渣葉3.0kg，以1g生藥加水5mL，冷水浸泡30min后，開始武火煎煮，煮沸后用文火慢煎20min，趁熱過濾。煎煮第2遍,按1g生藥加水4mL，煎法同上，合并濾液。60℃恒溫下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，濃縮為含生藥6g/ mL的水煎液，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

試劑與儀器：高脂飼料（0.2%膽酸鈉、2%膽固醇、10%食用油、87.8%基礎(chǔ)飼料），膽固醇、膽酸鈉、丙基硫氧嘧啶（廣州天馬精細(xì)化工廠）。膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）（南京建成生物試劑公司）。腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor-a，TNF-α）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）和核因子κB（nuclear factor-kappa B，NF-κB）試劑盒（武漢博士德生物技術(shù)有限公司）。LDZ5-2型離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠），DY89-I型電動玻璃勻漿機(jī)（寧波新芝），AU600型全自動生化分析儀（日本OLYMPUS株式會社）。

動物分組：Wistar大鼠48只，按數(shù)字隨機(jī)分組法分為正常對照組、模型對照組、非諾貝特組、布渣葉水煎液組。

動物模型制備：分別給予各模型組大鼠高脂飲食（3%膽固醇、0.5%膽酸鈉、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、10%豬油、81.3%基礎(chǔ)飼料），正常對照組給予普通飼料，連續(xù)8周。從第9周開始給予藥物治療，布渣葉水煎液組灌服劑量為150g/（kg·d），非諾貝特組灌服劑量為1000m g/（kg·d），正常對照組和模型對照組給予等體積的生理鹽水，連續(xù)至第12周。

指標(biāo)檢測：從造模開始，第12周末當(dāng)晚大鼠禁食不禁水12h，腹腔注射麻醉，打開腹腔，采用真空采血管腹主動脈取血，血樣4℃靜置2h后，3000rmp離心10min，分離血清，采用酶比色法在全自動生化分析儀測定血清TC、TG含量。游離并提取肝臟，4℃生理鹽水沖洗，去除薄膜，稱肝濕重，用以計(jì)算肝指數(shù)［肝指數(shù)（%）=肝濕質(zhì)量/體質(zhì)量×100%］。冰盤上剪取一小塊肝葉，剪碎，移入玻璃勻漿器，加入預(yù)冷的生理鹽水，研磨制備10%肝組織勻漿，3500r/min離心10min，取上清液，采用GPO-PAP酶法測定肝組織中TC、TG含量；采用ELISA檢測肝組織勻漿TNF-α、MCP-1和NF-κB的表達(dá)。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS14.0系統(tǒng)軟件包，計(jì)量資料以（±s ）表示、采用t檢驗(yàn)和單因素方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，組間比較采用q檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

各組大鼠血清和肝組織TC、TG及肝指數(shù)變化見表1。

表1 各組大鼠血清和肝組織TC、TG及肝指數(shù)比較 （±s）

表1 各組大鼠血清和肝組織TC、TG及肝指數(shù)比較 （±s）

注：與正常對照組比較，**P＜0.01，*P＜0.05；與模型對照組比較，△△P＜0.01，△P＜0.05；與非諾貝特組比較，#P＜0.05。

各組大鼠肝組織TNF-α、MCP-1和NF-κB的表達(dá)見表2。

表2 各組大鼠肝組織TNF-α、MCP-1和NF-KB表達(dá)比較 （±s）

表2 各組大鼠肝組織TNF-α、MCP-1和NF-KB表達(dá)比較 （±s）

注：與正常對照組比較，**P＜0.01，*P＜0.05；與模型對照組比較，△△P＜0.01，△P＜0.05；與非諾貝特組比較，#P＜0.05。

3 討 論

肝細(xì)胞損傷是由多種因素介導(dǎo)的復(fù)雜的病理學(xué)過程，損傷的結(jié)果是肝細(xì)胞可能發(fā)生凋亡或者壞死。就其發(fā)病機(jī)制來看，高脂血癥和胰島素抵抗是NAFLD的始動因素，其引發(fā)的一系列代謝紊亂是NAFLD形成的重要條件。正常肝臟內(nèi)脂質(zhì)含量占肝濕質(zhì)量的2-4%，當(dāng)肝內(nèi)脂質(zhì)含量超過肝濕質(zhì)量的5%就成為脂肪肝。研究表明，脂肪肝患者血中TG和TC明顯高于非脂肪肝患者［6］。因此，降低血脂、清除肝臟內(nèi)聚集的脂質(zhì)是治療NAFLD的重要方法之一。非諾貝特是目前臨床上常用的調(diào)脂藥，其為氯貝丁酸衍生物類血脂調(diào)節(jié)藥，其通過抑制極低密度脂蛋白（LDL-C）和TG的生成，降低血液LDL-C、TC和TG［7］。布渣葉水煎液給藥治療4周后，可以降低大鼠NAFLD大鼠血清TC、TG；同時降低肝組織TC、TG含量和肝指數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，布渣葉水煎液可以顯著降低NAFLD大鼠體內(nèi)的脂質(zhì)含量，并可改善肝臟脂肪變性的程度，提示其對NAFLD具有較好的脂質(zhì)調(diào)節(jié)作用。

TNF-α是一種具有廣泛生物學(xué)功能的多肽類細(xì)胞因子，其在炎癥和免疫反應(yīng)中的啟動和維持中起著重要作用，肝臟是TNF-α作用的主要靶器官之一，由肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞和肝內(nèi)Kupffer細(xì)胞分泌，可以誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡，也可以導(dǎo)致肝細(xì)胞壞死，是造成肝細(xì)胞損作的主要因子，TNF-α通過增強(qiáng)自由基的產(chǎn)生和脂質(zhì)過氧化等方面促進(jìn)脂肪性肝炎的發(fā)生［8］。NF-κB是一種廣泛存在于真核生物細(xì)胞漿中，激活后進(jìn)入細(xì)胞核與相應(yīng)靶基因結(jié)合的核轉(zhuǎn)錄因子，能夠介導(dǎo)各類炎性介質(zhì)表達(dá)，引發(fā)炎癥反應(yīng)等，NF-κB作為一種重要的前炎癥介質(zhì)基因的早期轉(zhuǎn)錄調(diào)控子，調(diào)控的基因可以編碼急性反應(yīng)蛋白和各種炎癥細(xì)胞因子，促使TNF-α的基因表達(dá)、釋放增加［9］。MCP-1是一種趨化因子，主要趨化和活化單核/巨噬細(xì)胞分泌促炎癥性細(xì)胞因子如IFN-γ、TNF-α等引起的炎癥反應(yīng)，具有前炎癥因子作用和促纖維化作用，能增強(qiáng)肝臟脂肪病變［10］。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，NAFLD模型組大鼠組織TNF-α、NF-κB和MCP-1顯著升高，經(jīng)給予布渣葉水煎液治療，可以降低炎癥反應(yīng)因子的表達(dá)。

布渣葉水煎液對NAFLD模型大鼠具有明顯改善作用，其機(jī)制與降低血脂和降低肝細(xì)胞炎癥反應(yīng)等有關(guān)，其作用或調(diào)控機(jī)制需要進(jìn)一步理論挖掘及實(shí)驗(yàn)研究。

［1］王瓊，孫建光．中醫(yī)藥防治非酒精性脂肪肝的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展［J］．廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2011，14（3）：58-60．

［2］Radu C,Grigorescu M,Crisan D,et al．Prevalence and associated risk factors of non-alcoholic fatty liver disease in hospitalized patients［J］．Journal of Gastrointestinal and Liver Diseases,2008，17：255-260．

［3］廣東省食品藥品監(jiān)督管理局．廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)（第一冊）［M］，廣州：廣東科學(xué)技術(shù)出版社，2004：66．

［4］曾聰彥，梅全喜，高玉橋，等．布渣葉水提物解熱退黃作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］．中國藥房，2010，21（11）：973-974．

［5］李坤平，潘天玲，高崇凱，等．大孔吸附樹脂富集純化布渣葉總黃酮的研究［J］．中藥材，2009，32（4）：601-603．

［6］徐正婕，范建高．非酒精性脂肪性肝病的綜合治療［J］．世界臨床醫(yī)藥，2010．31（9）：513-515．

［7］Belfort R，Berria R，Comen J，et a1．Fenofibrate reduces systemic infammation markers independent of its efects on lipid and glucose metabolism in patients with the metabolic syndrome［J］．Clin Endocrinol Metab，2010，95（2）：829-836．

［8］Vielhauer V，Mayadas TN．Functions of TNF anti its receptors in renal disease：distinct roles in inflammatory tissue injury and immune regulalion[J]．Semin Nephrol，2007，27（3）：286-308．

［9］Vallabhapurapu S,Karin M．Regulation and fuction of NF-κB transcription factors in the immune system［J］．Annu Rev Immunol,2009，27（1）：693-733．

［10］Satiroglu O,Uyde HA,Demir A,et al．Association between plasmamonocyte chemoattractant protein-1 levels and the extent of atherosclerotic peripheral artery disease［J］．Tohoku J Exp Med,2011，224（4）：301-306．

Objective：To observe the effect of Microcos paniculata Decoction on blood lipid and inflammation of nonalcoholic fatty liver rats．Method：The rat model was established by high fat diet．48 male wistar rats were divided into 4 groups，the normal control group，the model control group，F(xiàn)enoterol group and Microcos paniculata Decoction group in random．The last 3 groups were gavaged with normal saline，F(xiàn)enoterol solution and Microcos paniculata Decoction respectivly．Result：Microcos paniculata Decoction could decrease TC，TG and liver index in blood serum and liver tissue of nonalcoholic fatty liver rats and reduce the expression of inflammatory factors，such as TNF-α，MCP-1，NF-κB，and so on．Conclusion：Microcos paniculata Decoction could improve blood lipid and inflammation of nonalcoholic fatty liver rats．

Microcos paniculata；rat；nonalcoholic fatty liver；blood lipid；inflammation

R256.497.55

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1004-2814(2013)08-624-03

2013-03-21