北京市藥品審評(píng)中心（100061）陶林 田曉娟 佟利家

（接11月下）

此外，筆者認(rèn)為，在制劑強(qiáng)制降解試驗(yàn)的時(shí)候，應(yīng)在供試品進(jìn)行降解的同時(shí)，使用相同的破壞條件對(duì)原料、輔料同時(shí)破壞，并對(duì)空白溶劑進(jìn)行分析，以便形成的對(duì)比觀察不同破壞條件下產(chǎn)品真實(shí)的降解特性。

對(duì)色譜峰進(jìn)行純度檢查，是評(píng)價(jià)色譜方法專屬性的一項(xiàng)非常有意義的指標(biāo)。常用的方法是采用二極管陣列檢測(cè)器和質(zhì)譜來(lái)確定被測(cè)的色譜峰是否為單一成分，以評(píng)價(jià)色譜系統(tǒng)的分離能力，質(zhì)譜檢測(cè)器還具有定性雜質(zhì)的意義。申請(qǐng)人進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)的時(shí)候，往往只考察了主成分的色譜峰純度，因此建議申請(qǐng)人同時(shí)關(guān)注雜質(zhì)色譜峰的純度情況，特別是已知雜質(zhì)和含量較高的未知雜質(zhì)純度情況，這樣為色譜方法對(duì)雜質(zhì)測(cè)定的適用性和限度制定提供參考。

2 線性和范圍

線性是在分析方法的范圍內(nèi)對(duì)方法進(jìn)行評(píng)價(jià)，一般至少需要5個(gè)濃度建立線性。范圍一般是從線性研究中得到的。應(yīng)該保證分析方法在范圍內(nèi)能獲得良好的線性、精密度和準(zhǔn)確性。

對(duì)于雜質(zhì)檢查的范圍，可按照產(chǎn)品實(shí)際測(cè)定結(jié)果進(jìn)行考察。原則上應(yīng)為雜質(zhì)的報(bào)告水平至標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的120%。

3 準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確度系指采用該分析方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或認(rèn)可的參考值之間接近的程度。常用準(zhǔn)確度確定的方法是在規(guī)定的范圍內(nèi)，制備3個(gè)不同濃度的試樣，各測(cè)定3次，報(bào)告已知加入量的回收率（%）或測(cè)定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及可信限。

雜質(zhì)測(cè)定方法回收率試驗(yàn)，一般是在原料藥或制劑中加入已知量的雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。對(duì)于不能得到的雜質(zhì)，可用本法測(cè)定結(jié)果與另一成熟方法進(jìn)行比較，如藥典方法或經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的方法。例如，分析方法對(duì)某些不易獲得的雜質(zhì)，可采用校正因子以主成分進(jìn)行定量。此時(shí)，建議用該方法測(cè)定的結(jié)果與雜質(zhì)外標(biāo)法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較，以確定方法的準(zhǔn)確度。

4 精密度

精密度系指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一均質(zhì)供試品，經(jīng)多次取樣進(jìn)行一系列檢測(cè)所得結(jié)果之間的接近程度（離散程度）。精密度可以從三個(gè)層次考察：重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性。

對(duì)于雜質(zhì)分析的精密度考察，如果以雜質(zhì)水平較低（低于定量限）的供試品進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)，則難以驗(yàn)證方法的精密度。建議在供試品中加入一定量的已知雜質(zhì)或進(jìn)行一定程度的降解后進(jìn)行精密度考察。

5 檢測(cè)限和定量限

檢測(cè)限和定量限確定的常見方法有直觀法、信噪比法和計(jì)算法（根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差和斜率）。準(zhǔn)確測(cè)定定量限和檢測(cè)限，可對(duì)方法的靈敏度和準(zhǔn)確度做出評(píng)價(jià)。必要時(shí)，應(yīng)關(guān)注LOQ的變異性。

6 耐用性

耐用性主要考察方法本身對(duì)可變?cè)囼?yàn)因素的抗干擾能力。耐用性的考察對(duì)方法確定尤為重要，對(duì)于測(cè)試條件要求苛刻的，必要時(shí)應(yīng)將嚴(yán)格的試驗(yàn)條件在標(biāo)準(zhǔn)分析方法中明確。

典型的變化在指導(dǎo)原則中均有明確規(guī)定，但是仍建議申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)品種的自身特性和分析方法選擇影響產(chǎn)品測(cè)定結(jié)果的關(guān)鍵參數(shù)來(lái)設(shè)定微小變化，以考察方法的耐用程度。對(duì)于色譜法測(cè)定的，應(yīng)特別關(guān)注色譜柱類型、品牌、參數(shù)的變化導(dǎo)致系統(tǒng)適用性和定量測(cè)定結(jié)果的影響。

綜上所述，方法驗(yàn)證是一個(gè)系統(tǒng)工程，驗(yàn)證內(nèi)容之間是相互關(guān)聯(lián)的一個(gè)整體，申請(qǐng)人特別應(yīng)該關(guān)注方法驗(yàn)證的整體性和系統(tǒng)性。對(duì)于雜質(zhì)控制來(lái)說(shuō)，也應(yīng)該結(jié)合鑒別試驗(yàn)及含量測(cè)定結(jié)果，關(guān)注內(nèi)在關(guān)聯(lián)性和互補(bǔ)性。而且同一分析方法的驗(yàn)證內(nèi)容側(cè)重點(diǎn)也可能有所不同，如對(duì)雜質(zhì)限度檢查和定量檢查，方法學(xué)驗(yàn)證中前者重點(diǎn)關(guān)注專屬性，而后者則是對(duì)定量的要求更為全面。

方法學(xué)驗(yàn)證的內(nèi)容雖然分別獨(dú)立，但是上述內(nèi)容的排列順序也從側(cè)面反映了雜質(zhì)分析方法建立和評(píng)估的一個(gè)過(guò)程。不同品質(zhì)特征的產(chǎn)品，各種復(fù)雜情況均可能存在，在方法驗(yàn)證過(guò)程中，不能簡(jiǎn)單教條進(jìn)行。加之新方法、新儀器的不斷使用，方法驗(yàn)證的內(nèi)容和形式也要具體問(wèn)題具體分析。對(duì)于生物技術(shù)產(chǎn)品和生物制品，由于自身結(jié)構(gòu)和生產(chǎn)工藝的不同決定了其產(chǎn)品的復(fù)雜特性，所用的分析方法和驗(yàn)證方案可能與指導(dǎo)原則所述不同，但驗(yàn)證的本質(zhì)和基本原則應(yīng)是一致的。分析方法驗(yàn)證的主要目的是證明該方法適合于測(cè)試項(xiàng)目的預(yù)期。申請(qǐng)人應(yīng)該選擇最適合他們產(chǎn)品的分析方法和驗(yàn)證方案。