史永亮

甲狀腺癌是最常見的內(nèi)分泌器官惡性腫瘤之一，好發(fā)于中青年女性，其病理類型以乳頭狀癌為主，具有惡性程度高、預(yù)后差的特點(diǎn)，然而其病變機(jī)制目前尚不明確。眾多研究證實(shí)，惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要原因是腫瘤細(xì)胞的過度增殖和凋亡受抑。Notch-1和Survivin是調(diào)控細(xì)胞增殖、分化和凋亡的重要蛋白［1，2］。本研究采用免疫組織化學(xué)SP法觀察甲狀腺乳頭狀癌組織Notch-1和Survivin的表達(dá)及二者的相關(guān)性，并分析其臨床意義，探討Notch-1和Survivin在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用，為疾病診治提供理依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2010年1月至2011年10月手術(shù)切除的甲狀腺乳頭狀癌組織蠟塊標(biāo)本80例，經(jīng)病理確診均為乳頭狀癌(甲狀腺乳頭狀癌組)。其中男10例，女70例;年齡28～56歲，中位年齡41.5歲;所有患者術(shù)前均未接受放療、化療及內(nèi)分泌治療。TNM臨床分期:Ⅰ+Ⅱ期58例，Ⅲ+Ⅳ期22例。80例甲狀腺乳頭狀癌中有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者34例，無頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者46例。同時(shí)選取我院甲狀腺腺瘤70例(甲狀腺腺瘤組)和門診健康志愿者50例為對(duì)照組。3組性別比、年齡等一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 主要試劑 羊抗人Notch-1單克隆抗體、兔抗人 Survivin多克隆抗體為Santa Cruz公司產(chǎn)品。免疫組化SP試劑盒購自上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司產(chǎn)品。

1.3 方法 采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)Notch-1和Survivin的表達(dá)，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，用已知陽性切片作為陽性對(duì)照，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。判定標(biāo)準(zhǔn):細(xì)胞質(zhì)(核)內(nèi)檢出棕黃色顆粒，400倍鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，著色細(xì)胞數(shù)≥10%為陽性，＜10%即為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性比較采用Spearman等級(jí)相關(guān)性分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Notch-1和Survivin在不同甲狀腺組織中的表達(dá) Notch-1在甲狀腺乳頭狀癌組的陽性表達(dá)率為22.5%(18/80)，顯著低于甲狀腺腺瘤組織78.6%(55/70)和對(duì)照組88.0%(44/50)的陽性表達(dá)率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);Survivin在甲狀腺乳頭狀癌組的陽性表達(dá)率為70.0%(56/80)，顯著高于甲狀腺腺瘤組織12.9%(9/70)和對(duì)照組織0(0/50)的陽性表達(dá)率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 Notch-1和Survivin在甲狀腺乳頭狀癌組織表達(dá)的相關(guān)性80例甲狀腺乳頭狀癌組織中，Notch-1和Survivin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r= －0.512，P＜0.01)。見表 1。

2.3 Notch-1和Survivin表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征的關(guān)系 Notch-1和Survivin表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小無關(guān)(P＞0.05)，而與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表2 Notch-1和Survivin表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征關(guān)系例(%)

3 討論

Notch-1基因最早是在果蠅中發(fā)現(xiàn)，之后在哺乳動(dòng)物中也發(fā)現(xiàn)其表達(dá)。Notch-1信號(hào)通路不僅廣泛參與細(xì)胞的分化、發(fā)育、增殖和凋亡，現(xiàn)證實(shí)也和惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，但其作用存在復(fù)雜性。有研究發(fā)現(xiàn)Notch-1基因在胰腺癌、卵巢癌、宮頸癌等惡性腫瘤中高表達(dá)，在前列腺癌、甲狀腺髓樣癌中低表達(dá)。有學(xué)者總結(jié)得到的結(jié)論是，Notch-1基因在腫瘤中的作用與不同的細(xì)胞種類和細(xì)胞內(nèi)環(huán)境有關(guān)。楊晶金等［3］采用Real Time-PCR技術(shù)和免疫組化技術(shù)分別檢測(cè)甲狀腺乳頭狀癌組織Notch-1 mRNA和蛋白的表達(dá)水平，結(jié)果顯示Notch-1 mRNA表達(dá)水平為對(duì)照組的0.2228±0.1202，Notch-1蛋白的陽性表達(dá)率為20%。我們的免疫組化結(jié)果顯示，Notch-1蛋白在甲狀腺乳頭狀癌組織中的陽性表達(dá)率為22.5%，與對(duì)照甲狀腺組織相比，表達(dá)水平顯著降低。

惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞凋亡過程失調(diào)密切相關(guān)。Survivin是凋亡抑制蛋白家族(IAP)的重要成員，是目前已知最強(qiáng)的凋亡抑制因子，也是腫瘤標(biāo)志物方面研究的熱點(diǎn)。Survivin在正常成熟組織中不表達(dá)，在乳腺癌、大腸癌、肺癌等多種惡性腫瘤中異常高表達(dá)，發(fā)揮抗凋亡和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖的作用［2］。劉鋼等［4］采用免疫組化法檢測(cè)不同人群組織 Survivin蛋白的表達(dá)情況，研究發(fā)現(xiàn)甲狀腺癌組織Survivin表達(dá)水平顯著高于甲狀腺腺瘤及癌旁正常組織，呈過表達(dá)狀態(tài)。趙海寶［5］同樣發(fā)現(xiàn)Survivin在甲狀腺乳頭狀癌組織中表達(dá)增高，且其高表達(dá)與病理分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，甲狀腺乳頭狀癌組織Survivin的陽性表達(dá)率為70.0%，顯著高于甲狀腺腺瘤組織和正常甲狀腺組織，且其表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示Survivin表達(dá)與疾病進(jìn)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)，與上述文獻(xiàn)［5］報(bào)道一致。目前研究認(rèn)為Survivin抗凋亡的主要機(jī)制是阻斷了caspase-3和caspase-7的激活，后二者是細(xì)胞凋亡途徑的關(guān)鍵激酶，Survivin與之結(jié)合后直接造成激酶的失活，從而使凋亡進(jìn)程受抑［6，7］。

本研究結(jié)果顯示，Notch-1和Survivin與腫瘤臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，且二者表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(r=－0.512，P＜0.01)，提示Notch-1和Survivin共同參與了腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過程。最新研究顯示，Notch-1信號(hào)通過抑制核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活化調(diào)控一些下游基因的表達(dá)，從而抑制細(xì)胞增殖和促進(jìn)凋亡進(jìn)程［8］。由于Survivin基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)依賴于NF-κB的活化，因此有可能Notch-1信號(hào)對(duì)Survivin基因的表達(dá)存在負(fù)向調(diào)控。這與我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致:即甲狀腺乳頭狀癌組織中Notch-1基因低表達(dá)和 Survivin基因高表達(dá)，但腫瘤細(xì)胞內(nèi)Notch-1和Survivin基因之間的具體調(diào)控機(jī)制尚有待深入研究。

1 Leong KG，Karsan A.Recent insights into the role of Notch signaling in tumorigenesis.Blood，2006，107:2223-2233.

2 孟予城，陳洪杰，楊樹森，等.Survivin、XIAP在甲狀腺乳頭狀癌組織中表達(dá)的研究.河北醫(yī)藥，2011，33:661-663.

3 楊晶金，姚軍，沈峰清，等.Notch信號(hào)通路與甲狀腺乳頭狀癌的關(guān)系.中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào)，2012，34:120-126.

4 劉鋼，史火喜，袁又能，等.凋亡抑制基因Survivin在甲狀腺癌組織中的表達(dá)及意義.中華臨床醫(yī)師雜志，2011，5:840-843.

5 趙海寶.Cyclin和Survivin蛋白凋亡抑制基因Survivin在甲狀腺癌組織中的表達(dá)及意義.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，42:989-992.

6 Ulukus EC，Kargi HA，Sis B，et al.expressionin non-small-cell lung carcinomas:correlation with apoptosis and other apoptosis-related proteins，clinicopathologic prognostic factors and prognosis.Appl Immunohistochem Mol Morpho，2007，15:31-37.

7 Xu JH，Wang AX，Huang HZ，et al.Survivin shRNA induces caspase-3-dependent apoptosis and enhances cisplatin sensitivity in squamous cell carcinoma of the tongue.Oncol Res，2010，18:377-385.

8 金曉燕，梁勇，陳佳玉，等.Notch在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及意義關(guān)系.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，21:1-3.