陳艷梅 劉傳輝

[摘要]目的建立珍杞降糖膠囊中綠原酸的HPLC含量測定方法。方法采用HPLC法，色譜柱為AgilengtEclipsePlusC18柱（4.6mm×100mm）；流動(dòng)相：乙腈-0.4%磷酸（17︰83）；流速：0.6mL/min；檢測波長：327nm。結(jié)果綠原酸在0.0433～0.6938μｇ范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9999），平均加樣回收率為98.39%，RSD=0.58%（n=6）。結(jié)論本方法簡便快速、結(jié)果準(zhǔn)確，可較好地控制該制劑的質(zhì)量。

[關(guān)鍵詞]珍杞降糖膠囊；綠原酸；高效液相色譜法；含量測定

[中圖分類號(hào)]R927.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1674-4721（2012）12（a）-0061-03

珍杞降糖膠囊為醫(yī)院制劑，經(jīng)過多年臨床經(jīng)驗(yàn)證明，其質(zhì)量穩(wěn)定，療效可靠；由黃芪、玉竹、女貞子、金銀花、珍珠母、赤芍、生地、郁金等9味中藥材加工制成，具有益氣養(yǎng)陰、生津止渴、涼血潤燥之功效，主治陽虛燥熱型消渴病。綠原酸為金銀花的主要有效成分，綠原酸具有抗菌、消炎、止血的功效，對珍杞降糖膠囊療效的發(fā)揮起重要作用?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有定性檢查項(xiàng)目，而沒有定量檢測指標(biāo)，本文采用HPLC測定了金銀花中綠原酸的含量，方法簡便、快捷、準(zhǔn)確，回收率高，可較好地控制該制劑的質(zhì)量?，F(xiàn)報(bào)道如下：

1儀器與試藥

1.1儀器

Agilengt1260高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），AUW-220D電子分析天平（日本島津公司），DSQ10260超聲儀（上海特惠電子儀器有限公司）。

1.2試藥

綠原酸對照品（來源：中國藥品生物制品檢定所；批號(hào)：110753-200212）；水為杭州娃哈哈飲用純凈水，乙腈為色譜純，磷酸為分析純。珍杞降糖膠囊（生產(chǎn)單位：市中醫(yī)院；批號(hào)：110328、110507、110713）。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱：AgilengtEclipsePlus-C18色譜柱（4.6mm×100mm）；0.4%磷酸-乙腈（83︰17）為流動(dòng)相；檢測波長為327nm；柱溫：30℃；流速為0.6mL/min；進(jìn)樣量為10μL。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于1000[1]。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取綠原酸對照品約10mg，置50mL容量瓶中，加50%甲醇30mL，超聲5min使溶解，并定量稀釋制成每1毫升中含綠原酸0.2mg的溶液，作為對照品儲(chǔ)備液（10℃以下保存）。精密量取上述儲(chǔ)備液5mL置25mL棕色容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

精密稱取本品內(nèi)容物約6.0g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，、稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率35kHz）30min，放冷，稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5mL，置25mL棕色容量瓶中加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.4陰性樣品溶液的制備

精密稱取不含金銀花的其他各味中藥材約6.0g，研碎，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率35kHz）30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10mL，置50mL棕色容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得陰性對照溶液。

2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

取綠原酸對照品溶液（濃度為40μg/mL），按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別精密進(jìn)樣1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00μL，記錄綠原酸色譜峰的面積值，以色譜峰峰面積為Y，以對照品進(jìn)樣量為X，計(jì)算回歸方程：Y=5442.12716X-33.94086，r=0.9999。結(jié)果顯示，在0.0433～0.6938μｇ范圍內(nèi)綠原酸進(jìn)樣量與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

2.6陰性干擾試驗(yàn)

按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖，結(jié)果綠原酸在4.054nm波長處有最大吸收，理論板數(shù)在4000以上，綠原酸峰與其他組分峰基線分離（R＞1.5），陰性樣品溶液在綠原酸峰相應(yīng)位置上對測定無干擾，見圖1。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

按“2.1”項(xiàng)下色譜條件下，取綠原酸對照品溶液（濃度為40μg/mL），每隔1小時(shí)進(jìn)樣1次，考察6次，每次10μL，記錄綠原酸峰面積，綠原酸峰面積分別為927.03147、925.09186、923.42196、916.20473、909.15197、910.77866，RSD=0.83%，實(shí)驗(yàn)證明，對照品溶液穩(wěn)定性良好，能夠滿足測試要求。

2.8加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的供試品（批號(hào)110328，含綠原酸0.5353mg/g）6份，每份約2.0g，分別置1～6號(hào)錐形瓶中，分別精密加入精密配制的綠原酸對照品儲(chǔ)備液（濃度為0.2mg/mL）5mL，精密加入50%甲醇50mL，照供試品溶液制備方法制備樣品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣量10μL，分別測定，結(jié)果見表1。

2.9精密度試驗(yàn)

按“2.1”項(xiàng)下色譜條件下，取綠原酸對照品溶液（濃度為40μg/mL），每隔1小時(shí)進(jìn)樣1次，考察6次，每次10μL，記錄綠原酸峰面積，結(jié)果6個(gè)峰面積分別為920.46643、924.25976、926.05989、919.98966、916.45137、915.25475；RSD=0.46%（n=6），實(shí)驗(yàn)證明，對照品溶液穩(wěn)定性良好，能夠滿足測試要求。

2.10含量測定

取3批樣品（批號(hào)分別為110328、110507、110713），置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，照供試品溶液制備方法制備樣品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件下，進(jìn)樣量10μL，分別測定，按外標(biāo)法計(jì)算綠原酸的含量，結(jié)果測得三批樣品中綠原酸的含量分別為0.5329、0.5336、0.5335mg/粒。

3討論

醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑是指醫(yī)療機(jī)構(gòu)根據(jù)本單位臨床需要而常規(guī)配制、自用的固定處方制劑。是對現(xiàn)代制藥工業(yè)制劑不足的有效補(bǔ)充，是醫(yī)院臨床用藥的組成部分，尤其是一些傳統(tǒng)的中藥古方、秘方、驗(yàn)方，更是民族的瑰寶；其質(zhì)優(yōu)價(jià)廉深受歡迎，然而其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與國家藥品標(biāo)準(zhǔn)相差甚遠(yuǎn)，為了保證臨床用藥的需要、保障患者用藥安全有效，提高醫(yī)院制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、保證患者用藥安全是一項(xiàng)緊迫任務(wù)。珍杞降糖膠囊由9味藥材加工制成，處方工藝復(fù)雜，為了較好地控制該制劑的質(zhì)量，經(jīng)參考有關(guān)文獻(xiàn)[2-4]及《中華人民共和國藥典》（簡稱《藥典》）2010年版一部方法，本文運(yùn)用高效液相色譜法，考察了3批樣品，實(shí)驗(yàn)證明本法操作簡便、專屬性強(qiáng)、回收率好，可用于該制劑的含量測定。

3.1流動(dòng)相選擇

本試驗(yàn)曾用乙腈-0.4%磷酸溶液（10∶90）[5]，乙腈-0.4%磷酸（8∶92）[6]，甲醇-0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.2）（25∶75）[7]等幾種流動(dòng)相作比較，結(jié)果顯示主成分峰出峰效果均不理想，而采用乙腈-0.4%磷酸（17∶83）為流動(dòng)相，色譜峰顯示，綠原酸與相鄰的組分分離度大于1.5，具有較好的分離效果，且理論板數(shù)較高。

3.2提取方法的選擇

由于綠原酸極不穩(wěn)定且極性較大，筆者參考《藥典》并結(jié)合指標(biāo)成份的理化性質(zhì)，比較了加熱回流提取和超聲提取兩種方法，發(fā)現(xiàn)超聲提取較為完全且不影響指標(biāo)成份的分解，利于控制該制劑的質(zhì)量。

3.3提取溶劑的選擇

筆者發(fā)現(xiàn)以50%甲醇為溶劑測定含量，比用甲醇為溶劑所得的含量高，穩(wěn)定性好。

[參考文獻(xiàn)]

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（收稿日期：2012-08-20 本文編輯：袁 成）