劉新建

中國石油中心醫(yī)院兒科，河北廊坊 065000

新生兒缺氧缺血性腦損傷 （hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）后病死率高，并可產(chǎn)生永久性神經(jīng)功能障礙，給家庭和社會都帶來沉重的負(fù)擔(dān)。HIBD的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，一直是臨床治療上棘手的問題，目前尚缺乏一種針對性強(qiáng)的神經(jīng)元保護(hù)藥物。腦紅蛋白(Neuroglobin，Ngb)具有明顯的保護(hù)神經(jīng)元的功能，是新型內(nèi)源性神經(jīng)保護(hù)因子，其神經(jīng)元保護(hù)機(jī)制將為神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療研究提供了新的思路[1-2]。該研究選取新生大鼠HIBD模型對HIBD后不同時間點(diǎn)海馬CA1區(qū)腦紅蛋白(Ngb)的變化規(guī)律進(jìn)行探討，對Ngb在HIBD病理形成過程中的作用機(jī)制進(jìn)行闡述，為今后HIBD的治療另辟新徑。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

選取新生7日齡Wistar大鼠，河北醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供，雌雄不限共 60只,體重 12～18g。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑

石蠟切片機(jī)、Olympus光學(xué)顯微鏡、捷達(dá)JEDA801D形態(tài)學(xué)圖象分析系統(tǒng)、兔抗鼠Ngb多克隆抗體、DAB顯色劑、SP法免疫組織化學(xué)試劑盒。

1.3 方法

1.3.1 動物分組及處理 60只新生大鼠隨機(jī)分為sham組（6只）、正常對照組（6只）、HIBD組（48只）。正常對照組：均不進(jìn)行任何處理，與sham組在相同時間斷頭取腦。sham組：行頸部手術(shù)，只暴露左側(cè)頸總動脈。HIBD組：參照Rice和吳婉芳等的方法，建立大鼠缺氧缺血性腦損傷模型。分別于HIBD后3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d和14 d時間點(diǎn)將動物處死取材，依據(jù)時間點(diǎn)不同分成8個亞組，每組6只。

1.3.3 Ngb表達(dá)檢測 應(yīng)用SP法免疫組織化學(xué)染色方法檢測各組海馬CA1區(qū)Ngb的表達(dá)，嚴(yán)格按照試劑盒說明書。結(jié)果判斷：以神經(jīng)元胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒或胞漿胞核均為陽性信號。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SAS9.0軟件進(jìn)行分析。Ngb表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)以Means±SD表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

相對于sham組和正常對照組中，HIBD組Ngb陽性細(xì)胞數(shù)在缺血缺氧后3 h開始下降，6 h、12 h、24 h呈逐漸下降趨勢(P<0.05)。7 d時與sham組和正常對照比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05)，14 d時Ngb陽性細(xì)胞數(shù)基本上恢復(fù)sham組和正常對照組的水平。見表1。

表1 各組新生大鼠海馬CA1區(qū)Ngb表達(dá)比較(n/mm2)

3 討論

Ngb是近期發(fā)現(xiàn)的繼血紅蛋白和肌紅蛋白之后的第三種攜氧球蛋白，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要分布于大腦皮層第I～VI層以及海馬各區(qū)。目前，Ngb因其與氧具有高度親和力以及在神經(jīng)組織的特異高表達(dá)而倍受矚目，尤其是一系列體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)研究表明[3]Ngb在腦內(nèi)不同區(qū)域的表達(dá)程度與該區(qū)域?qū)θ毖⑷毖醯拿舾谐潭瘸守?fù)相關(guān)，這給臨床治療缺氧缺血性腦病及其它一些神經(jīng)元退行性疾病帶來了一線曙光。

在Ngb與腦缺氧缺血性損傷的研究中，Greenberg和Wang X等[4]研究結(jié)果證明缺血、缺氧可誘導(dǎo)Ngb表達(dá)，減輕腦損傷。國內(nèi)張興毅等[5-6]研究結(jié)果也表明Ngb參與了缺氧狀態(tài)的腦神經(jīng)元的保護(hù)。王航雁等[7-8]研究發(fā)現(xiàn)，宮內(nèi)窘迫新生兒以及早產(chǎn)兒的血清Ngb表達(dá)水平明顯高于正常健康患兒，同時HIBD急性期患兒的血清Ngb含量明顯高于正常健康患兒，且病情越重，血清Ngb的含量越高，提示腦組織的缺氧缺血性損傷可能導(dǎo)致Ngb的升高。 目前關(guān)于Ngb在新生兒缺氧缺血性腦損傷后腦組織中的表達(dá)規(guī)律及作用的報道尚少。該研究結(jié)果顯示Ngb蛋白陽性細(xì)胞在缺血缺氧腦損傷制?；謴?fù)供氧后呈現(xiàn)時相性變化。

綜上所述，Ngb作為一種新型內(nèi)源性神經(jīng)保護(hù)因子[9]，可設(shè)想利用Ngb作為抗缺氧性腦損傷的保護(hù)劑對于降低神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥的發(fā)生率，提高患兒存活率及健康水平，具有廣泛的臨床應(yīng)用前景。

[1]M Greenberg DA,Jin KY,Khan AA,et al.Neuroglobin:an endogenous neuroprotectant[J].Curropin Pharmcol,2008,8(1):20-24.

[2]林欣，李敏，胡亞卓，等.顱腦創(chuàng)傷后大鼠腦組織腦紅蛋白表達(dá)變化及其與神經(jīng)元凋亡的關(guān)系研究[J].中國應(yīng)用生理學(xué)雜志，2010,26(1):39-44.

[3]Hundahl CA,Allen GC,Nyengaard JR,et al.Neuroglobin in the rat brain:localization[J].Neuroendocrinology,2008,88(3):173-182.

[4]Greenberg D A，Jin K，Khan A A， et al.Neuroglobin:An endogenous neuroprotectant[J].Current Opinion in Pharmacology，2008，8(1):20－24.

[5]張興毅，陳長林，李慧仙.大鼠全腦缺血再灌注后腦紅蛋白的表達(dá)[J].實(shí)用心腦肺血管病雜志，2010，18(2):103-105.

[6]張興毅，陳長林，李慧仙，等.腦紅蛋白與caspase-3在大鼠海馬CA1區(qū)的相關(guān)性[J].山東醫(yī)藥，2010,40(1):40-41.

[7]王航雁，王靜，王萍，等.腦紅蛋白在新生兒血清中的表達(dá)及臨床意義[J].中華圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)雜志，2007,10(2):121-122.

[8]王靜，王航雁，王萍，等.宮內(nèi)窘迫新生兒血清腦紅蛋白的變化[J].實(shí)用兒科臨床雜志，2009,24(2):104-105.

[9]LiW,Wu Y,Ren C,et al.The activity of recombinant human neuroglobin as an antioxidant and free radical scavenger[J].Proteins,2011,79(1):115-25.