羅永慧，吳昌志，舒向榮

(江西省婦幼保健院,江西南昌330008)

血培養(yǎng)陽性標(biāo)本直接細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)的評價

羅永慧，吳昌志，舒向榮

(江西省婦幼保健院,江西南昌330008)

目的比較直接法與常規(guī)法對血培養(yǎng)陽性標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)的一致性，探討直接法菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)的可行性。方法將血培養(yǎng)儀報警的陽性標(biāo)本涂片革蘭染色鏡檢,依據(jù)染色結(jié)果選擇不同鑒定卡，直接上機(jī)進(jìn)行菌種鑒定及藥敏試驗(yàn),同時將陽性標(biāo)本轉(zhuǎn)種平板分離培養(yǎng),分純后的菌落按常規(guī)法上機(jī)鑒定及藥敏試驗(yàn),并對兩種方法檢測結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果兩種方法細(xì)菌鑒定總一致率為93.5%，其中G-菌鑒定一致率為95.4%，G+球菌一致率90.9%;藥敏試驗(yàn)總符合率達(dá)94.6%。結(jié)論直接法菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)明顯縮短了檢測時間,且與常規(guī)法檢測結(jié)果符合率高，為臨床盡早抗感染治療提供了重要依據(jù)。

細(xì)菌學(xué)技術(shù)；血培養(yǎng)；直接法；藥物敏感試驗(yàn)

菌血癥和敗血癥是臨床嚴(yán)重危及患者生命的疾病，因此快速準(zhǔn)確的細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)是臨床診斷和治療的關(guān)鍵。為了使臨床盡快地得到有效且合理的抗菌藥敏結(jié)果，我們從全自動血培養(yǎng)儀報警的陽性標(biāo)本中抽取菌液，直接上全自動微生物分析儀檢測，同時與陽性標(biāo)本按常規(guī)方法分離菌株，再上機(jī)檢測的結(jié)果進(jìn)行比較，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源選取2012年6月至2013年6月本院發(fā)熱伴感染的住院患者的血培養(yǎng)陽性標(biāo)本396例，同一患者多次分離的菌株不重復(fù)記入，含有復(fù)合菌的血培養(yǎng)陽性標(biāo)本不記入。

1.2 儀器與試劑BACTEC9120型全自動血培養(yǎng)儀、標(biāo)準(zhǔn)樹脂血培養(yǎng)瓶均為美國BD公司生產(chǎn)；MicroScan WA96全自動微生物分析儀、G-菌鑒定及藥敏復(fù)合板(NC50)、G+菌鑒定及藥敏復(fù)合板(PC33)為美國Dade Behring公司產(chǎn)品。分離用血平板、中國藍(lán)平板、巧克力平板為OXOID公司產(chǎn)品。質(zhì)控菌株：金黃色葡萄球菌ATCC29213，大腸埃希菌ATCC25922，銅綠假單胞菌ATCC27853。

1.3 方法將BACTEC 9120型血培養(yǎng)儀報警的血培養(yǎng)陽性標(biāo)本，用無菌注射器抽取陽性瓶中菌液涂片、行革蘭染色鏡檢,根據(jù)涂片染色結(jié)果,取菌液5～10μl,混勻于專用接種水中,接種于專用鑒定板上，直接上機(jī)做細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)。同時轉(zhuǎn)種血平板、中國藍(lán)平板、巧克力平板(巧克力平板置于5 %CO2環(huán)境中),經(jīng)18～24h形成菌落后再行涂片革蘭染色,根據(jù)氧化酶和觸酶試驗(yàn)初篩,常規(guī)上機(jī)進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn),并對二者的結(jié)果進(jìn)行比較。

2 結(jié)果

2.1 菌株鑒定結(jié)果符合率396份血培養(yǎng)陽性標(biāo)本中,常規(guī)法鑒定出細(xì)菌385株，其中革蘭陰性桿菌221株、革蘭陽性球菌164株，另有11株為革蘭陽性桿菌、念珠菌或兩種方法都沒能鑒定出來的細(xì)菌。而直接法與常規(guī)法鑒定相符的革蘭陰性桿菌211株、革蘭陽性球菌149株；兩種方法細(xì)菌鑒定革蘭陰性桿菌一致率為95.4%(211/221)、革蘭陽性球菌一致率為90.9%(149/164)、總一致率為93.5% (360/385)，詳見表1。

表1 血培養(yǎng)陽性標(biāo)本直接上機(jī)與轉(zhuǎn)種菌落上機(jī)鑒定結(jié)果比較

2.2 藥敏結(jié)果符合率將385株細(xì)菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較,藥敏結(jié)果直接法與常規(guī)法符合率高，總一致率為94.6%，詳見表2。其中非發(fā)酵菌有2株，鏈球菌有5株，兩種方法都沒有藥敏結(jié)果。

表2 直接法與常規(guī)法對385株菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果的符合率

3 討論

血培養(yǎng)是菌血癥、敗血癥臨床診斷和治療的關(guān)鍵[1]。雖然大多數(shù)醫(yī)院應(yīng)用全自動血培養(yǎng)系統(tǒng),提高了血培養(yǎng)陽性率,但是對血培養(yǎng)陽性標(biāo)本進(jìn)行快速準(zhǔn)確的菌種鑒定和藥敏試驗(yàn),依舊是微生物工作者亟待解決的問題[2-4]。

血培養(yǎng)陽性標(biāo)本按常規(guī)法進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn),往往需要2～3d。明確病原菌、早期診斷、早期正確治療，是菌血癥治療成功的關(guān)健。我們采用的陽性瓶肉湯直接法較傳統(tǒng)法至少提前1d，且與傳統(tǒng)法比較對396例血培養(yǎng)陽性標(biāo)本細(xì)菌鑒定結(jié)果為菌種鑒定陰性桿菌一致率為95.4%、陽性球菌一致率為90.9%、總一致率為93.5%，與有關(guān)資料相符[5]，但高于李慧[6]所報道的兩種方法菌種鑒定總一致率83.7%的結(jié)果。結(jié)果表明對腸桿菌科的鑒定一致率較高，對非發(fā)酵菌和鏈球菌的鑒定一致率相對較低。這可能與細(xì)菌本身培養(yǎng)環(huán)境要求較高,在鑒定板中生長緩慢或不充分有關(guān)；血培養(yǎng)液中微量的血液細(xì)胞和纖維成分等也可能影響了測試板的生化反應(yīng)結(jié)果。

相對于菌種鑒定結(jié)果，臨床醫(yī)生更想盡早知道藥敏結(jié)果。我們在比較血培養(yǎng)陽性標(biāo)本細(xì)菌鑒定一致性的同時,還對兩種方法藥敏檢測結(jié)果的符合率進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)兩者的符合率達(dá)94.6%。按照相關(guān)要求，一種新方法的建立應(yīng)與參考方法進(jìn)行比較，其符合率應(yīng)≥90.0%。結(jié)果表明對陽性血培養(yǎng)標(biāo)本采用直接法藥敏試驗(yàn)，可以獲得較為滿意的檢測結(jié)果。

我們利用直接法省略了常規(guī)法中的細(xì)菌分離培養(yǎng)步驟,所需時間縮短。因此直接法克服了常規(guī)法費(fèi)時的缺點(diǎn)，對于及早確定病原菌和藥敏結(jié)果，為臨床選擇用藥提供了及時有效的依據(jù)，避免了經(jīng)驗(yàn)用藥，對提高菌血癥、敗血癥等感染性疾病的治愈率具有重要的意義。

[1]謝服役.血培養(yǎng)標(biāo)本病原菌分布及耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2013,23(1):222-224.

[2]吳紹蓮,胡辛蘭,池春燕.血培養(yǎng)常見病原菌的變遷和耐藥性分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2013,31(2):138-140.

[3]喬亞峰,葉振東,張國雄,等.血培養(yǎng)常見病原菌的分布及耐藥性分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011,29(2):136-137.

[4]張鴻.武漢市青山區(qū)血培養(yǎng)病原菌的分布及耐藥性分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011,29(4):411-412.

[5]漆堅(jiān).全自動細(xì)菌鑒定儀對血培養(yǎng)陽性標(biāo)本直接鑒定及藥敏試驗(yàn)比較[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2006,27(5):397-398.

[6]李慧.兩種細(xì)菌鑒定法在臨床血液檢驗(yàn)中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2011,38(9):1705-1706.

R446.5,Q939.92,R631+.3,R515.3

A

1674-1129(2013)05-0450-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.017

羅永慧，男，1973年11月出生，漢族，畢業(yè)于中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院，碩士學(xué)位，專業(yè)病原生物學(xué)，主要研究方向?yàn)榕R床微生物。