趙燕

庫存血液輸注前血漿血紅蛋白含量與顯微鏡下紅細胞形態(tài)變化的研究

趙燕

目的 探討庫存血液隨時間變化對血漿血紅蛋白含量及顯微鏡下紅細胞形態(tài)變化的影響。方法 對2～6℃保存20 d、30 d輸注的庫存血各30袋血液，取樣推薄層血涂片，血涂片經(jīng)瑞士染色，顯微鏡下觀察計數(shù)球形紅細胞的百分數(shù)。血樣在有分離膠的試管中離心，檢測上血漿血紅蛋白含量。結(jié)果 20 d內(nèi)輸注的庫存血液，血漿血紅蛋白為(71.2±8.3)mg/L，球形紅細胞比率>5%的百分數(shù)為3.33%，第30天的庫存血液血紅蛋白為(106±10.5)mg/L，球形紅細胞>5%的百分數(shù)為10%。儲存20 d和30 d的庫存血液，血漿血紅蛋白含量、球形紅細胞的百分數(shù)均不相同，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。結(jié)論 庫存血液隨時間變化血漿血紅蛋白含量及顯微鏡下紅細胞形態(tài)變化均有顯著性變化，輸注前部分成分的檢測，可作為一種簡便的血液質(zhì)量判斷方法。

庫存血液；血紅蛋白；紅細胞；顯微鏡檢查

臨床實踐中80%以上患者需要輸注紅細胞[1]。紅細胞貯存期間的變化影響到臨床輸血的療效。由于采集到的血液來自不同的個體,因此保存期相同的血液紅細胞質(zhì)量也不盡相同。本研究選擇2013年4～7月血庫庫存紅細胞懸液,采血后2～6℃保存20 d、30 d時檢測血漿游離血紅蛋白濃度，涂片經(jīng)瑞氏染色鏡檢紅細胞形態(tài)變化，報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 PCDA抗凝紅細胞懸液(三聯(lián)血袋為威海市威高輸血技術(shù)有限公司生產(chǎn))30袋,(4±2)℃冰箱貯存。

1.2 儀器與試劑 3000轉(zhuǎn)/min鐘離心機，721分光光度計(高密光學分析儀器廠)，熱合機，Olympus普通光學顯微鏡，瑞氏染液，載玻片。血漿游離血紅蛋白檢測試劑：2 g/L鄰甲聯(lián)苯胺溶液、1%過氧化氫、10%醋酸溶液、100 mg/L標準血紅蛋白溶液。

1.3 方法

1.3.1 血液樣品的制備 血站采集血液后制備紅細胞成分制品時，血袋外的樣品管延長保留10 cm，并用熱合機分段封口。血液在醫(yī)院出庫后，剪掉的兩段樣品管立刻放回(4±2)℃冰箱貯存，至采血后的20 d、30 d時檢測血漿游離血紅蛋白濃度,涂片染色鏡檢紅細胞形態(tài)變化。

1.3.2 100 g/L血紅蛋白標準液制備 取抗凝血離心除去血漿，用生理鹽水洗滌紅細胞三次，以紅細胞比容為準，加入等量體積的蒸餾水和半量的氯仿，猛烈振搖5～6 min，高速離心，將上層Hb溶液分離出來，用HiCN方法測其濃度，并用生理鹽水調(diào)節(jié)濃度至100 g/L，(4±2)℃冰箱貯存，用時稀釋成100 mg/L標準應用液。鄰-甲聯(lián)苯胺法[2]測定血漿游離血紅蛋白濃度。

1.3.3 血涂片制備及染色 取適量紅細胞懸浮液在載玻片上推血涂片，自然晾干后用瑞氏染液進行染色[2，3]，顯微鏡下觀察紅細胞形態(tài)變化。

1.3.4 統(tǒng)計學方法 采用配對資料的t檢驗及率的t檢驗進行統(tǒng)計學處理,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 (4±2)℃冰箱貯存20 d、30 d紅細胞懸液中游離血紅蛋白含量分別為(71.2±8.3)mg/L、(106±10.5)mg/L。呈逐漸增高趨勢，均數(shù)間的比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。

2.2 每張瑞氏染色的血涂片顯微鏡下觀察500個紅細胞，球形紅細胞比率>5%為異常。(4±2)℃冰箱貯存20 d紅細胞懸液，球形紅細胞>5%的有1袋，貯存至30 d時，球形紅細胞>5%的有3袋，兩個儲存時間點比較呈逐漸增高趨勢(P<0.01)。

3 討論

(4±2)℃冰箱貯存的紅細胞細胞形態(tài)正常為雙凹圓盤狀，直徑7.5～8.3μm，厚度約1.7μm，體積8.3μm3，表面積14.5μm2，輸入體內(nèi)后，可以變形通過較紅細胞小得多的毛細血管。紅細胞在自然衰老過程中，細胞膜不斷發(fā)生改變，由光滑雙凹圓盤狀、鋸齒盤狀、鋸齒似盤狀、鋸齒似球盤狀和光滑球形有規(guī)律的退行性變，球形紅細胞的比表面積最小進行氣體交換和自身變形能力最差并且球形是不可逆的[5]，輸入體內(nèi)后很快被破壞，而起不到作用甚至帶來副作用。

由于庫存血液分別采自不同的人體，個體差異必然導致不同的血液間質(zhì)量差異[6]。盡管所用血袋一致，(4±2)℃保存條件下溫度波動，成分血制備無菌操作[4]，運輸條件不完全一致等許多因素都會對血液質(zhì)量造成影響。35 d保存期內(nèi)血液質(zhì)量變化應是引起輸血不良反應的主要因素。因此，血液自中心血站出庫后，在醫(yī)院保存至保質(zhì)期末，紅細胞在生理[5]、生化、免疫學、形態(tài)學[7]等很多方面發(fā)生的變化，依然應該引起重視。本文觀察2～6℃保存20 d、30 d輸注的30袋庫存血樣，經(jīng)薄層血涂片，瑞士染色，顯微鏡下觀察計數(shù)球形紅細胞的百分數(shù)，并檢測血漿血紅蛋白含量。數(shù)據(jù)顯示20～30 d之間血漿血紅蛋白含量、球形紅細胞比率>5%的百分數(shù)均呈增加趨勢。提示庫存血液質(zhì)量變差的占3.33%～10%，這少部分的血液可能適用于很多患者，而對于血液病、腎功能不全的患者是否適合輸注，輸注后造成的損害我們認為還是值得探討[8]。

結(jié)論：醫(yī)院庫存血液保存至30 d時，有很少量血液質(zhì)量已變差，建議觀察庫存血液血漿血紅蛋白含量及顯微鏡下紅細胞形態(tài)變化，作為一種血液質(zhì)量全程監(jiān)控選擇方法。

[1] 王殿昌,馬玉翠,王秀英,等. MAP紅細胞懸液保存期內(nèi)生化指標的動態(tài)觀察.中國醫(yī)科大學學報,2006,35(2):207.

[2] 葉應嫵,王毓三,申子瑜,等. 全國臨床檢驗操作規(guī)程.東南大學出版社,2006:121.

[3] 李津嬰.許燕群.紅細胞形態(tài)學對溶血疾病的診斷意義.診斷學理論與實踐,2010,9(3):214-217.

[4] 鄧家棟.血液保存及血細胞成分分離.鄧家棟.臨床血液學.上海:科學技術(shù)出版社,1985:1175.

[5] 劉菲,劉春蓮. 不同貯存期紅細胞懸液中游離血紅蛋白的變化.貴陽醫(yī)學院學報,2005,30(6): 564.

[6] 成民,李家增,季陽.基礎輸血學.北京:中國科學技術(shù)出版,2001:80.

[7] Liu Q P,Sulzenbacher G,Yuan H,et al. Bacterial glycosidases for the production of universal red blood cells. Nat Biotechnol,2007,25(4):454-464.

[8] Horn J,Thon V,Bartonkova D,et al.Anti-IgA antibodies in common variable immunodeficiency (CVID);diagnostic workup and therapeutic strategy.Clin Immunol, 2007,122(2):156-162.

Research on plasma hemoglobin content before stored blood transfusion and changes of erythrocyte modality under microscope examination

ZHAOYan.

ZaozhuangCenterBlood,Zaozhuang277100,China

Objective To investigate the effect of time on the changes of blood plasma hemoglobin content and morphological of red blood cells under microscope. Methods Blood sample were stored at 2～6℃ cold room for 20 days and 30 days espectively, smeared blood stained by Switzerland was observed by microscope to get the percentage of spherocytosis. Blood samples were centrifuged gel in a test tube to determine the plasma hemoglobin content. Results The result show that plasma hemoglobin was (71.2±8.3)mg/L and the percent of spherocytosis ratio(>5%) was 3.33% for blood stored 20 days, while plasma hemoglobin was (106±10.5) mg/L and the percent of spherocytosis ratio(> 5%) was 10% for blood stored 30 days. There are much difference between storied for 20 days and 30 days in plasma hemoglobin content and the percent of red sphere blood, the difference was statistically significance (P<0.01) Conclusion There are significant changes of blood plasma hemoglobin content and morphological of red blood cells with different time, the microscopy should be developed as a simple method to test the quality of blood before Infusion.

Stored blood ; Hemoglobin; Erythrocyte; Microscopic examination

277100棗莊市中心血站