龍志國(guó) 朱紅波 李 凱

1.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院血液內(nèi)科，湖北十堰 442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬東風(fēng)醫(yī)院病理科，湖北十堰 442000

我國(guó)是食管癌高發(fā)國(guó)家，所有病例中90%以上是食管鱗狀細(xì)胞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC），其腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜多步驟過(guò)程。整合素α3β1作為整合素家族重要成員，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的黏附、增殖、分化、轉(zhuǎn)移、凋亡等生物學(xué)行為，具有促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的作用?；|(zhì)金屬蛋白酶-7（matrix metalloproteinases-7，MMP-7）能降解細(xì)胞外多種基質(zhì)，亦有促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的作用。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)整合素α3β1、MMP-7在ESCC腫瘤組織中的表達(dá)情況，探討其在ESCC的發(fā)生、發(fā)展中的生物學(xué)意義。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

收集湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院及湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬東風(fēng)醫(yī)院2000年1月～2005年7月病理科存檔的手術(shù)切除食管癌石蠟標(biāo)本，篩選出組織學(xué)類型為鱗狀細(xì)胞癌病例135例為ESCC組，另隨機(jī)抽取40例正常食管組織做對(duì)照組。所有ESCC標(biāo)本均有完整的臨床病理資料。

ESCC組135例，其中男114例，女21例，＜60歲者84例，≥60歲者51例。對(duì)照組40例中男34例，女6例，＜60歲者25例，≥60歲者15例。兩組病例性別、年齡等一般資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 主要試劑

羊抗人整合素α3β1多克隆抗體試劑盒、鼠抗人MMP-7單克隆抗體試劑盒及二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色試劑盒均購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。以0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4）代替一抗作為空白對(duì)照。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

采用免疫組化LsAB法檢測(cè)ESCC及正常食管組織中整合素α3β1、MMP-7的表達(dá)。按試劑盒操作說(shuō)明對(duì)4 μm厚石蠟切片進(jìn)行組化染色，檢測(cè)ESCC和正常食管組織標(biāo)本中整合素 α3β1（稀釋度為 1∶40）、MMP-7（稀釋度為 1∶200）的表達(dá)。

1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定

整合素α3β1、MMP-7顯色均為棕黃色顆粒，定位于細(xì)胞質(zhì)，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和著色深度記分，每例隨機(jī)計(jì)數(shù)5個(gè)高倍鏡（400×）視野，確定每個(gè)視野的陽(yáng)性率，取平均數(shù)，按下列記分；陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)<5%為0分，5%～24%為1分，25%～49%為2分，50%～74%為3分，≥75%為4分；陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)的著色深度：基本不著色為0分；淡黃色為1分；黃色為2分；棕黃色為3分，將兩者得分相乘，<1分判定為陰性，≥1分判定為表達(dá)陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 13.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 整合素α3β1、基質(zhì)金屬蛋白酶-7在食管鱗狀細(xì)胞癌組織和正常食管組織中的表達(dá)

整合素α3β1、MMP-7在正常食管組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為12.50%、5.00%，而在ESCC組織中陽(yáng)性表達(dá)率分別為82.96%、61.48%，均高于正常食管組織，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見(jiàn)表1及圖1、2。

表1 整合素α3β1、基質(zhì)金屬蛋白酶-7在食管鱗狀細(xì)胞癌組織和正常食管組織中的表達(dá)[n（%）]

2.2 整合素α3β1、基質(zhì)金屬蛋白酶-7在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)的相關(guān)性

將整合素 α3β1、MMP-7的表達(dá)情況行 Speraman相關(guān)分析，結(jié)果顯示整合素α3β1與MMP-7在ESCC中的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.418，P<0.01）。

3 討論

整合素是一類重要的細(xì)胞表面黏附分子受體，通過(guò)介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞之間細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的黏附和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，在腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起重要作用[1]。研究證實(shí)，細(xì)胞惡變后腫瘤細(xì)胞表面的整合素表達(dá)有所變化，這種變化與腫瘤細(xì)胞侵襲性及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[2]。整合素α3β1為整合素家族重要成員，由兩條跨膜多肽鏈以非共價(jià)方式結(jié)合成整合素異二聚體[3-5]，其在不同的腫瘤中有選擇的進(jìn)行表達(dá)，它的異常表達(dá)與這些腫瘤的形成、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[6-8]。目前，對(duì)食管癌中整合素α3β1表達(dá)情況的報(bào)道較少，本研究中，82.96%的ESCC表達(dá)整合素α3β1，明顯高于正常食管鱗狀上皮的表達(dá)（12.5%），差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），說(shuō)明整合素 α3β1亦參與了 ESCC 發(fā)生、發(fā)展的調(diào)控。

基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）已被證實(shí)參與ESCC等消化道腫瘤的浸潤(rùn)、血管侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，并與其預(yù)后相關(guān)[9-12]。MMP-7由腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生且能活化其他MMPs成員如MMP-2、MMP-9等，滅活絲氨酸蛋白酶抑制劑[13]，其在ESCC腫瘤組織高表達(dá)，并且與腫瘤浸潤(rùn)深度、臨床分期、靜脈侵犯及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究中同樣觀察到MMP-7在ESCC腫瘤組織中呈高表達(dá)（61.48%），明顯高于正常食管鱗狀上皮的表達(dá)（5.00%），差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），表明MMP-7可促進(jìn)ESCC的進(jìn)展。

MMPs的產(chǎn)生和分泌受多種因素調(diào)控，目前研究認(rèn)為細(xì)胞外基質(zhì)刺激是其重要調(diào)節(jié)信號(hào)之一，而整合素作為介導(dǎo)信號(hào)，通過(guò)獨(dú)特的途徑傳遞膜分子信號(hào)，參與MMPs的調(diào)節(jié)，影響著腫瘤的生長(zhǎng)[14]。MMP-7作為MMPs的重要成員之一，其產(chǎn)生和分泌是否也參與了整合素α3β1的表達(dá)呢？本研究顯示，ESCC中整合素α3β1與MMP-7的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.418，P<0.01），表明 ESCC 組織中的整合素α3β1有表達(dá)增高，MMP-7有隨之高表達(dá)的趨勢(shì)，推測(cè)整合素α3β1通過(guò)調(diào)節(jié)MMP-7的表達(dá)與激活，從而促進(jìn)ESCC腫瘤組織的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移。因此，整合素α3β1可以上調(diào)MMP-7的活性，兩者的高表達(dá)與ESCC的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

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