羅松濤 王應(yīng)洪 李緒鯤 柯井衛(wèi) 唐義權(quán)

膀胱癌患者腫瘤組織Ki-67、CK7的表達(dá)及其臨床意義

羅松濤 王應(yīng)洪 李緒鯤 柯井衛(wèi) 唐義權(quán)

目的 探討膀胱癌組織中Ki-67與CK7的表達(dá)及其臨床意義。方法 采用免疫組化SP法對(duì)88例膀胱移行細(xì)胞癌組織中的Ki-67、CK7的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，并將其與患者的臨床特征及預(yù)后進(jìn)行比較。結(jié)果 本組88例膀胱癌患者中，Ki-67與CK7的陽性表達(dá)率分別為43.2%（38/88）與54.5%（48/88）；淺表型膀胱癌組織中Ki-67陽性率顯著低于浸潤(rùn)型（P＜0.05），CK7陽性率顯著高于浸潤(rùn)型（P＜0.05）。Ki-67在腫瘤組織中的表達(dá)隨分級(jí)的增高而增加，CK7表達(dá)隨分級(jí)的增加而降低。淺表性膀胱癌2年內(nèi)復(fù)發(fā)患者中Ki-67陽性率為73.3%，非復(fù)發(fā)組為54.0%，復(fù)發(fā)組顯著高于非復(fù)發(fā)組患者（P＜0.05）。結(jié)論 Ki-67與CK7表達(dá)與膀胱癌的臨床及病理分級(jí)存在一定的相關(guān)性，Ki-67表達(dá)陽性可能是術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素。

膀胱癌;Ki-67;CK7;免疫組織化學(xué)

膀胱癌是臨床上較為常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病確切原因仍不明確，可能與遺傳易感性、化學(xué)原料接觸等有關(guān)[1]。膀胱癌治療主要以手術(shù)為主，但患者的預(yù)后存在較大差異。有文獻(xiàn)報(bào)道，膀胱癌患者腫瘤組織中Ki-67和CK7的表達(dá)水平與膀胱癌的臨床特征及預(yù)后存在一定的關(guān)系，因此本研究采用免疫組化法SP法對(duì)88例膀胱癌組織中的Ki-67、CK7的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)、評(píng)估其表達(dá)與患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2008年1月-2012年1月本科收治的88例膀胱癌患者的臨床資料，其中男54例，女34例；年齡41～82歲，平均（60.3±9.2）歲；淺表性腫瘤65例（其中Ta44例，T121例），浸潤(rùn)型腫瘤 23例（其中T28例，T39例，T46例）；病理分級(jí)：G121例，G236例，G331例。

1.2 免疫組織化學(xué)檢測(cè)腫瘤標(biāo)本 術(shù)后膀胱腫瘤標(biāo)本采用免疫組化SP法檢測(cè)其Ki-67和CK7的表達(dá)水平。一抗分別為鼠抗Ki-67單抗與鼠抗人CK7單抗（產(chǎn)自Maxim公司）。組織切片脫蠟且水化之后，濃度為3%的雙氧水處理10～15min，過氧化酶阻斷溶液以及25℃條件下孵育10～15min。濃度為10%的山羊血清及室溫孵育5min。加入一抗，于4℃溫度條件下保存24h。生物素標(biāo)記的二抗及SP復(fù)合物各為10min。DAB顯色，蘇木素復(fù)染，于透明條件下進(jìn)行封片。以PBS替代一抗作陰性對(duì)照組，人乳腺癌組織作為陽性對(duì)照[2]。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) 每張切片隨機(jī)地對(duì)4個(gè)視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，共計(jì)數(shù)400個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞的構(gòu)成比。判斷標(biāo)準(zhǔn)：陽性細(xì)胞≤10%為(-)；10～30%為（+），大于 30%為（++）[3]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用STATA13.0軟件完成，計(jì)量數(shù)據(jù)采t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Ki-67與CK7在癌組織中的表達(dá) 在膀胱癌組織標(biāo)本之中，Ki-67的陽性表達(dá)例數(shù)為38例，陽性表達(dá)率為43.2%，CK7陽性表達(dá)例數(shù)為48例，陽性表達(dá)率為54.5%。

2.2 Ki-67與CK7與腫瘤分期分級(jí) 淺表型膀胱癌組織中Ki-67陽性率顯著低于浸潤(rùn)型（P＜0.05），CK7陽性率顯著高于浸潤(rùn)型（P＜0.05）。Ki-67在腫瘤組織中的表達(dá)隨病理分級(jí)的增高而增加，CK7表達(dá)隨分級(jí)的增加而降低。見表1。

表1 Ki-67與CK7與腫瘤分期分級(jí)[n(%)]

2.3 Ki-67、CK7表達(dá)與腫瘤復(fù)發(fā) 65例淺表性膀胱癌經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)后（TURBT）隨訪2年內(nèi)無復(fù)發(fā)者為50例，復(fù)發(fā)者15例，復(fù)發(fā)率為23.1%。復(fù)發(fā)組Ki-67表達(dá)顯著高于未復(fù)發(fā)組（P＜0.05）；復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組患者CK7表達(dá)陽性率無明顯差別（P＞0.05）。見表 2。

表2 Ki-67、CK7表達(dá)與腫瘤復(fù)發(fā)[n(%)]

3 討論

膀胱癌為泌尿系統(tǒng)常見腫瘤，且術(shù)后容易復(fù)發(fā)。因此探尋膀胱癌預(yù)后相關(guān)因素及復(fù)發(fā)指標(biāo)成為研究熱點(diǎn)。Ki-67是目前較為肯定的核增殖標(biāo)志基因。Ki-67在除G0期以外的細(xì)胞周期各時(shí)相均有表達(dá)，M期達(dá)最大表達(dá)峰[4]。另研究表明，CK7基因與細(xì)胞增殖有關(guān)，在調(diào)控上皮分化和成熟中具有重要作用[5]。CK7基因的缺失可導(dǎo)致表皮、乳腺、淚腺和前列腺發(fā)育障礙。免疫組化法檢測(cè)CK7的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)CK7在正常上皮組織基底細(xì)胞及上皮來源腫瘤細(xì)胞中均有不同程度的表達(dá)[6]。

因此本研究采用免疫組化法SP膀胱癌中Ki-67、CK7的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)、評(píng)價(jià)其表達(dá)水平與患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果顯示：臨床分期以及病理分級(jí)之間，Ki-67與CK7的陽性表達(dá)率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Ki-67在浸潤(rùn)型膀胱癌組織與G3級(jí)癌組織中的陽性表達(dá)率較在其他組織中的陽性表達(dá)率要高。本組88例膀胱癌患者中，Ki-67與CK7的陽性表達(dá)率分別為43.2%（38/88）與54.5%（48/88）；淺表型膀胱癌組織中Ki-67陽性率顯著低于浸潤(rùn)型，CK7陽性率顯著高于浸潤(rùn)型。Ki-67在腫瘤組織中的表達(dá)隨分級(jí)的增高而增加，CK7表達(dá)隨分級(jí)的增加而降低。淺表性膀胱癌2年內(nèi)復(fù)發(fā)患者中Ki-67陽性率顯著高于非復(fù)發(fā)組患者。Ki-67與CK7表達(dá)與膀胱癌的臨床及病理分期存在一定的相關(guān)性，Ki-67表達(dá)陽性可能是復(fù)發(fā)的術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素。因此，對(duì)于Ki-67表達(dá)陽性可能是術(shù)膀胱癌復(fù)發(fā)的重要指標(biāo)，此類患者術(shù)后應(yīng)加強(qiáng)隨訪觀察，強(qiáng)化術(shù)后膀胱灌注化療，降低術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。

[1] Acikalin D,Oner U,Can C,et al.Predictive value of maspin and Ki-67 expression in transurethral resectionspecimens in patients with T1 bladder cancer[J].Tumori,2012,98(3):344-50.

[2] Bertz S,Otto W,Denzinger S,et al.Combination of CK20 and Ki-67 Immunostaining Analysis Predicts Recurrence,Progression,and Cancer-Specific Survival in pT1 Urothelial Bladder Cancer[J].Eur Urol,2012,6(8):466-472.

[3] Roninson IB.Tumor senescence as a determinant of drug response in vivo [J].Drug Resist Updat,2002,5(5):204-208.

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[5] Pichu S,Krishnamoorthy S,Shishkov A,et al.Knockdown of Ki-67 by dicer-substrate small interfering RNA sensitizes bladdercancer cells to curcumin-induced tumor inhibition[J].PLOS ONE,2012,7(11):e48567.

[6] 林芳,錢之玉,丁健,等.二輕青蒿素對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的體外抑制作用[J].中國(guó)新藥雜志,2002,11(12):934-936.

10.3969/j.issn.1009-4393.2013.36.014

四川 646000 瀘州醫(yī)學(xué)院附屬中醫(yī)醫(yī)院 （羅松濤 王應(yīng)洪李緒鯤 柯井衛(wèi) 唐義權(quán)）

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