劉連連 孔 敏 王 虹 馬曉艷 (吉林大學第二醫(yī)院婦產科，吉林 長春 3004)

卵巢癌是女性生殖器常見的三大惡性腫瘤之一，由于缺乏早期診斷方法及有效的治療手段，其死亡率最高〔1〕。轉化生長因子-β(TGF-β)/Smads信號傳導通路主要是由 TGF-β1配體及其受體、胞內信號分子Smads蛋白以及轉錄調節(jié)的靶基因構成的一條腫瘤抑制通路。Smads蛋白是TGF-β信號通路關鍵的信號傳導分子，存在于細胞質中，可將信號從胞膜直接轉至胞核〔2〕。Smad4在 TGF-β/Smads信號傳導通路中處于中樞地位〔3〕，其蛋白表達缺失或水平下降可能是一些腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、生物學行為及預后不良的重要因素。目前罕見有關卵巢腫瘤患者血清Smad4水平的相關研究報道。本實驗擬探討血清Smad4水平作為卵巢癌生物學標志物的可能性，并為卵巢癌的診斷、監(jiān)測及預后提供一定的實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對象 隨機選取2010年1月至2011年1月在吉大二院婦科住院診斷為“卵巢腫瘤”患者的術前血清?；颊咝g前均未行放療或化療并經術后病理證實，卵巢癌38例，年齡34～82〔平均(56.2±20.2)〕歲;組織學分級分類按WHO分類法，高、中分化16例，中-低、低分化22例;漿液性癌22例，黏液性癌7例，其他類型癌9例;腹水量≥500 ml者16例。卵巢交界性腫瘤9例，卵巢良性上皮性腫瘤14例，卵巢性索間質腫瘤8例，因子宮內膜息肉、宮頸原位癌原因手術切除的正常卵巢8例?；颊哂谌朐寒斎詹杉庵莒o脈血2 ml，分離血清待檢。

1.2 檢測方法 ELISA試劑盒購自美國GBD公司，操作步驟嚴格按照Smad4 ELISA試劑盒說明書進行。

1.3 統(tǒng)計學方法 應用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行t檢驗，t′檢驗及方差分析。

2 結果

2.1 各組卵巢病變患者術前血清Smad4水平 卵巢癌38例，Smad水平(11.10±4.12);卵巢交界性腫瘤9例，Smad水平(12.35±6.35);卵巢良性上皮性腫瘤 14例，Smad水平(9.84±2.79);卵巢性索間質腫瘤8例，Smad水平(10.25±4.8)(P＜0.05)，四組差別均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，但均明顯高于正常對照組水平(5.19±2.02)。

2.2 卵巢癌患者術前血清Smad4水平與臨床病理指標的關系

卵巢癌患者術前血清Smad4水平與組織學分級、組織學分類、腹水量有關(P＜0.05)，即高、中分化卵巢癌(16例，9.20±4.53)低于中-低、低分化者(22例，12.48±3.24);黏液性癌(7例，10.86±2.26)低于其他類型卵巢癌(9例，13.26±2.14);腹水量≥500 ml者(16例，9.28±3.77)低于腹水量＜500 ml(22例，12.4±3.94)，而與患者年齡 ＜50歲(13例，11.71±4.9)、≥50歲(25例，10.78±3.95)，腫塊大小 ＜10 cm(18例，10.99±4.43)，≥10 cm(20例，11.19±3.94)，臨床分期Ⅰ ～Ⅱ期(6例，12.47±5.14)、Ⅲ ～Ⅳ期(32例，10.84±3.95)，淋巴結轉移情況(無:8例，10.24±4.75，有:7例，11.82±1.98)無關(P＞0.05)。

3 討論

Smad4是TGF-β/Smads信號傳導通路中將細胞外的信號傳導至細胞質內并激活轉錄反應的關鍵元件〔2〕，在腫瘤的發(fā)生過程中起重要作用。它在所有的成人組織中廣泛表達。Dunfield等〔4〕研究顯示在人類卵巢癌細胞中TGF-β/Smads信號通路仍然有功能，如果細胞內存在信號轉導異常，可能是位于Smads蛋白的下游。劉景波等〔5〕采用Western、RT-PCR及流式細胞術對前列腺增生患者組織中的Smad4蛋白和mRNA進行測定，結果提示Smad4雖是腫瘤抑制因子，但同時也具有促進生長的作用。以往研究表明TGF-β/Smads信號傳導通路與炎癥密切相關。Fiocchi〔6〕研究發(fā)現(xiàn)慢性炎性腸病的發(fā)生與TGF-β/Smads傳導通路存在缺陷有關。

本研究推測可能是卵巢腫瘤組織能產生多量的Smad4而導致其血清水平增高，這一結果也提示了血清Smad4水平可作為診斷卵巢腫瘤的生物學指標之一。

年齡大、腫塊直徑大、中-低分化、漿液性癌、臨床分期晚、腹水量多、有淋巴結轉移是評估卵巢癌不良預后的臨床病理指標。本研究結果是否與中-低、低分化卵巢癌組織中不完整的新生血管數(shù)量增多，Smad4進入血循環(huán)的量增加有關尚待進一步研究。Baldus等〔7〕發(fā)現(xiàn)有Smad4染色體缺失的宮頸癌臨床預后較差;結直腸癌、乳腺癌、肺癌和胃癌等〔8〕一些腫瘤也可見Smad4的失活或缺失;Ji等〔9〕的研究顯示原發(fā)性卵巢黏液性癌和來自其他部位的轉移性卵巢黏液腺癌有Smad4蛋白表達缺失，這可能影響了血清中Smad4的水平。本研究推測結果可能與下列因素有關:有研究表明癌性腹水中一些炎性介質或生物因子，如血管內波生長因子(VEGF)水平高于其血清水平〔10〕，而VEGF可以使毛細血管生成并使毛細血管的通透性增加及功能性損害淋巴回流而促進腹水形成〔11〕，Smad4也屬于炎性介質或生物因子，推測其可能與VEGF等炎性介質在新生血管及腹水形成等方面有協(xié)同作用。因此，大量腹水中高水平的Smad4可能影響其在血清中的水平。但是，以上推論尚需同時進行腹水和血清Smad4的水平測定加以證實。

綜上所述，卵巢腫瘤患者血清中Smad4水平升高有可能作為診斷卵巢上皮性腫瘤和卵巢性索間質腫瘤的生物學指標，也有可能成為判定卵巢癌預后不良的指標。

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5 劉景波，孔垂?jié)?，朱育焱，?Sma和Mad 4型同源體在前列腺增生中的表達及對前列腺細胞增殖和凋亡的影響〔J〕.中華實驗外科雜志，2005;22(5):629.

6 Fiocchi C.TGF-β/Smad signaling defects in inflammatory bowel disease:mechanisms and possible novel therapies for chronic inflammation〔J〕.J Clin Invest，2001;108(4):523-6.

7 Baldus SE，Schwarz E，Lohrey C，et al.Smad4 deficiency in cervical carcinoma cells〔J〕.Oncogene，2005;24(5):810-9.

8 Kim SK，F(xiàn)an Y，Papadimitrakopoulou V，et al.DPC4，a candidate tumor suppressor gene，is altered infrequently in head and neck squamous cell carcinoma〔J〕.Cancer Res，1996;56(11):2519-21.

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10 李海霞，馬曉燕，劉 超，等.卵巢癌患者血清、腹水上清中VEGF表達及在卵巢癌診斷中的意義〔J〕.中國婦幼保健，2008;23(19):2709-11.

11 孫曉敏，董衛(wèi)國.惡性腹水的研究進展〔J〕.國外醫(yī)學·消化系疾病分冊，2003;23(6):375-7.