張忠強 吳 濤 于紅濤 何錦照

（河源市人民醫(yī)院內二區(qū)，廣東 河源 517000）

急性白血病患者體內MicroRNA-143在骨髓細胞中的表達及其意義分析

張忠強 吳 濤 于紅濤 何錦照

（河源市人民醫(yī)院內二區(qū)，廣東 河源 517000）

目的探討MicroRNA-143在急性白血病患者骨髓細胞表達情況，并分析其臨床意義。方法入選2009年5月至2011年9月在我院住院治療的急性白血病患者47例，同時入選在我住院治療并進行骨髓穿刺檢查的非白血病患者46例作為對照組，比較兩組患者MicroRNA-143表達情況，以及白血病組患者經治療后MicroRNA-143表達變化情況。結果白血病組患者其MicroRNA-143表達水平顯著低于對照組患者，差異均具有顯著的統(tǒng)計學意義，P＜0.05；且MicroRNA-143表達水平在白血病患者不同年齡、性別、疾病分型、基因類型等方面的差異無明顯差異，P＞0.05；入選白血病患者經化治療后MicroRNA-143表達水平較治療前水平顯著升高，差異具有顯著的統(tǒng)計學意義，P＜0.05。結論MicroRNA-143表達與急性白血病發(fā)病的發(fā)生、發(fā)展存在非常顯著的關系，檢測其水平的變化可以對患者的預后做出有效的評價。

急性白血病；骨髓細胞；表達；臨床意義；MicroRNA-143

近年來，隨著社會發(fā)展，白血病患病率呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢，成為威脅人類健康和生命安全的主要疾病之一。急性白血病是一類由于干細胞出現(xiàn)異?？寺〉膼盒约膊?，其中克隆中的干細胞失去進一步分化成熟能力而停滯在細胞發(fā)育不同階段；并且在發(fā)展過程中不斷浸潤器官和其他組織，抑制造血系統(tǒng)，對患者造成嚴重的危害[1]。及早診斷并干預這類疾病對于挽救患者生命具有非常重要的臨床意義。MicroRNA是近年來研究較多的一種小RNA，為一種內生的、長度約20～24個核苷酸組成，在細胞內發(fā)揮著多種重要的調節(jié)作用，研究顯示，每個MicroRNA可以擁有多個靶基因，且多個MicroRNA也可以對同一個基因發(fā)揮重要的調節(jié)作用；MicroRNA對人類基因也存在重要的調節(jié)作用，大約控制人類1/3的基因[2-3]。隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)MicroRNA與腫瘤的發(fā)生存在密切關系，通過調控細胞分化和增殖直接參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[4]，本研究旨在探討MicroRNA-143在急性白血病患者骨髓細胞表達情況，并分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 資料

入選2009年5月至2011年9月在我院住院治療的急性白血病患者47例，其中男性患者29例，女性患者18例，患者年齡18～57歲，其中髓系白血病患者27例，占57.4%；淋巴系白血病20例，占42.6%；所有患者均符合FAB分型診斷標準，均為初次診斷的白血病，均未接受化療或其他治療。同時入選在我住院治療并進行骨髓穿刺檢查的非白血病患者46例作為對照組，兩組患者均簽署知情同意書，兩組患者在年齡、性別等其他方面的差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 標本處理

所有入選者在進行骨髓穿刺后，留取骨髓標本5mL，采用肝素抗凝；單個核細胞提取，采用TRIzol法提取RNA，然后吸取2μLRNA在核蛋白定量測定儀上測定OD值，進行準確定量。反轉錄嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.2.2 實時定量PCR

引物設計與合成由專門的生物科技公司負責設計和合成，MicroRNA-143實時定量反應總體系的構建，總量為20μL，包括：10μLSYBR Green 1μL、cDNA10μmol/L、正向和反向引物各1μL、ROX參考資料0.04μL、DEPC水補充至20μL，循環(huán)參數(shù)主要見參考文獻[5]，分為四個階段進行：第1階段，50度2min鐘；第2階段，95℃2min，以上兩個階段均進行1各循環(huán)；第3階段，95℃15s，60℃30s，40 個循環(huán)；溶解曲線分析: 95℃15 s、60℃1min、95℃15s、60℃15s、1個循環(huán)。每個標本均作復孔3管，至少重復3 次。

1.2.3 觀察指標

比較兩組患者MicroRNA-143表達情況，以及經治療后，白血病患者MicroRNA-143表達變化情況。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用spss17.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料采用均數(shù)±標準差(χ—±s)表示，2組間資料比較采用t檢驗；計數(shù)資料用百分比表示，采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 兩組人群MicroRNA-143表達情況比較

分析顯示，白血病組患者其MicroRNA-143表達水平顯著低于對照組患者，差異均具有顯著的統(tǒng)計學意義，P＜0.05；且MicroRNA-143表達水平在白血病患者不同年齡、性別、疾病分型、基因類型等方面的差異無明顯差異，P＞0.05。

2.2 不同階段MicroRNA-143表達情況比較

入選白血病患者經化治療后，再次檢測患者MicroRNA-143表達水平較治療前水平顯著升高，差異具有顯著的統(tǒng)計學意義，P＜0.05。

3 討 論

隨著環(huán)境污染加劇，白血病發(fā)病率呈現(xiàn)顯著上升的趨勢，盡管近年來在治療急性白血病取得了巨大的進步。白血病仍然是威脅人類健康和生命安全的主要疾病之一，早期診斷，并采取有效地治療手段對于改善白血病患者的預后具有非常顯著的臨床意義[6]。生物學技術的進展給醫(yī)學的發(fā)展提供了非常有利的臨床工具，實時定量PCR技術的出現(xiàn)是DNA定量檢測非常有效的手段，具有靈敏度高、特異性強、自動化程度高等優(yōu)點，因而被廣泛應用于臨床診斷、基礎研究[7]。在本研究中采用Q-PCR技術取得了非常好的效果。MicroRNA為小分子非編碼RNA，廣泛存在于真核生物中，其與靶基因結合的方式主要為堿基配對，對靶基因產生負性調控作用，主要的生物學特點為在序列上高度保守，表達上具有發(fā)育階段性和組織特異性[8]。是近年來臨床研究和基礎研究的熱點問題，隨著研究的逐漸深入，人們發(fā)現(xiàn)其與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展存在非常顯著的關系，如肝癌、乳腺癌等。其表達具有一定的組織特異性，因此可以通過檢測患者細胞表達水平對患者疾病特點、預后做出非常有價值的評價[9]。

在本研究中通過比較發(fā)現(xiàn)，白血病患者MicroRNA-143表達水平顯著下調，與患者年齡、性別、疾病分型等無顯著相關性，并且經治療后其表達水平呈現(xiàn)上升趨勢，研究證實了MicroRNA參與了白血病發(fā)生、發(fā)展整個過程。有研究表明，MicroRNA-143具有抑癌基因作用，并且已經證實其在多種腫瘤中均發(fā)揮著非常顯著的作用，可以顯著抑制癌細胞的增殖和遷移，發(fā)揮作用的主要機制為作用于KRAS基因抑制蛋白激酶通路，并且增強部分化療藥物的化療敏感性，MicroRNA-143在白血病患者中的作用是多方面的。MicroRNA-143這種作用不僅在白血病患者中得到了有效地證實，并且在其他腫瘤中也得到了類似的結果，如胃癌、淋巴瘤等其表達水平均出現(xiàn)明顯異常。隨著生物學研究進展，其信息數(shù)據表明，每個MicroRNA對于數(shù)百個目標基因具有一定的控制作用，其在血液系統(tǒng)中的研究最先與血細胞的分化開始的。多項研究結果表明，MicroRNA突變或功能失調參與了白血病的發(fā)生、發(fā)展，因此在白血病患者檢測MicroRNA表達水平及其變化情況對于白血病的基因診斷、預后判斷、靶向治療等方面具有非常重要的作用[10]。

綜上所述，隨著研究的進展，白血病的發(fā)生、發(fā)展是多種基因共同參與的結果；MicroRNA突變或功能失調參與了白血病的發(fā)生、發(fā)展，檢測其水平的變化可以對患者的診斷、預后做出有效的評價。

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1671-8194（2013）11-0255-02