舒琬清 楊曉東 曾曉丹

（懷化市第一人民醫(yī)院，湖南 懷化 418000）

HPLC法測(cè)定三種藥品中的維生素D2的含量分析

舒琬清 楊曉東 曾曉丹

（懷化市第一人民醫(yī)院，湖南 懷化 418000）

目的探討HPLC法測(cè)定三種藥品中維生素D2的含量。方法在色譜柱為250mm×4.6mm，流動(dòng)相為正己烷—正戊醇97∶3的混合溶液，流速為1.0mL/min，柱溫為40℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，進(jìn)樣量為20μL的色譜條件下對(duì)藥品中的維生素D2含量進(jìn)行測(cè)定，并探討含量分析方法的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性等情況。結(jié)果得到維生素D2的線性回歸方程為：C＝0.0142A-0.0060（r=0.9999），說明使用高效液相色譜法對(duì)維生素D2含量進(jìn)行測(cè)量，在0.04423～1.091μg/mL的濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系；得出三種濃度維生素D2對(duì)照品溶液的峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.95%、1.2%、2.1%，說明使用高效色相色譜法對(duì)維生素D2含量進(jìn)行測(cè)量具有良好的精密度；鈣鎂D片中維生素D2含量為0.1331μg/mL，達(dá)到標(biāo)示量的102.21%；鈣佳鋅口服液中維生素D2含量為0.1331μg/mL，達(dá)到標(biāo)示量的102.21%；乳酸鈣口服液中維生素D2含量為0.1247μg/mL，達(dá)到標(biāo)示量的100.21%。結(jié)論使用高效液相色譜法對(duì)三種藥品中維生素D2含量的測(cè)定具有良好的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性，可用于含有維生素D2的藥品制劑質(zhì)量控制。

HPLC；鈣鎂D片；鈣佳鋅口服液；乳酸鈣口服液；維生素D2；含量

維生素D2在藥品中一般僅起到增效的作用，其藥品含量比較少，并且極易受到空氣、光線的影響[1]，所以對(duì)于藥品中維生素D2的檢驗(yàn)一直為藥品檢驗(yàn)工作的難點(diǎn)，為探討HPLC法測(cè)定三種藥品中維生素D2的含量。本文在色譜柱為250mm×4.6mm，流動(dòng)相為正己烷-正戊醇97∶3的混合溶液，流速為1.0mL/min，柱溫為40℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，進(jìn)樣量為20μL的色譜條件下對(duì)藥品中的維生素D2含量進(jìn)行測(cè)定，并探討含量分析方法的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性等情況?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 儀器與試藥

1.1.1 試驗(yàn)儀器

高效液相色譜儀（型號(hào)為HP1100），自動(dòng)進(jìn)樣器，電子天平，離心機(jī)，漩渦混合器四元梯度泵，柱溫箱，在線脫氣機(jī)，二極管檢測(cè)器，電子分析天平（SM-92），色譜工作站。

1.1.2 試藥

供試品為市場(chǎng)銷售的鈣鎂D片，鈣佳鋅口服液，乳酸鈣口服液三種藥品，對(duì)照品為維生素D2對(duì)照品，正己烷、異辛烷、正戊醇分析純?nèi)芤骸?/p>

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱為250mm×4.6mm，流動(dòng)相為正己烷-正戊醇97∶3的混合溶液，流速為1.0mL/min，柱溫為40℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，進(jìn)樣量為20μL。

1.2.2 對(duì)照品溶液

精密稱取維生素D2對(duì)照品20mg，放置在100mL棕色容量瓶中，加入流動(dòng)相進(jìn)行溶解，稀釋到刻度線后搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，再精密稱取儲(chǔ)備液0.5mL放置到10mL棕色容量瓶中[2]，加入流動(dòng)相到刻度線，即得對(duì)照品溶液，溶液濃度為0.1μg/mL。

1.2.3 供試品溶液

鈣鎂D片供試品溶液制備：取鈣鎂D片粉末0.7g，放置到10mL棕色量瓶中，加入適量異辛烷溶液，在漩渦混合器上進(jìn)行混合震動(dòng)10min[3]，取適量混合液放置在3mL離心管中，高速離心即成鈣鎂D片供試品溶液；鈣佳鋅口服液：取25mL鈣佳鋅口服液放置在分液漏斗中，加入氯化鈉飽和溶液25mL，用乙醚溶液進(jìn)行3次萃取，將乙醚層進(jìn)行混合，用無水硫酸鈉去除乙醚層水分，過濾后用乙醚清洗無水硫酸鈉2遍，將乙醚溶液合并放入棕色圓底燒瓶中，除盡乙醚，將殘?jiān)靡掖既芤?，放置在棕色容量瓶中即得鈣佳鋅口服液供試品溶液[4]；乳酸鈣口服液：取25mL乳酸鈣口服液放置在分液漏斗中，加入氯化鈉飽和溶液25mL，用乙醚溶液進(jìn)行3次萃取，將乙醚層進(jìn)行混合，用無水硫酸鈉去除乙醚層水分，過濾后用乙醚清洗無水硫酸鈉兩遍，將乙醚溶液合并放入棕色圓底燒瓶中，除盡乙醚，將殘?jiān)靡掖既芤喝芙?，放置在棕色容量瓶中即得乳酸鈣口服液供試品溶液[5]。

1.2.4 線性關(guān)系考察

取對(duì)照品儲(chǔ)備液（濃度為2.174μg/mL）0.2mL、0.5mL、0.8mL、2.0mL、5.0mL，放置在10mL棕色容量品中，制的濃度不同的維生素D2標(biāo)準(zhǔn)品溶液，在“2.1色譜條件”下進(jìn)樣20μL，每份標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別進(jìn)樣三次，用維生素D2峰面積作為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性關(guān)系考察。

1.2.5 精密度試驗(yàn)

取三個(gè)濃度的維生素D2對(duì)照品溶液在“2.1色譜條件”下進(jìn)樣20μL，每份標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別進(jìn)樣3次，記錄下分別測(cè)量的色譜峰面積。

1.2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一濃度維生素D2對(duì)照品溶液在“2.1色譜條件”下重復(fù)進(jìn)樣三次，記錄下分別測(cè)量的色譜峰面積。

1.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按照“2.2 供試品溶液”項(xiàng)下方法制備三種供試品溶液，在0h、4h、8h、12h、24h進(jìn)樣測(cè)定，記錄下分別測(cè)量的色譜峰面積。

1.2.8 樣品含量測(cè)定

按照“2.2 供試品溶液”項(xiàng)下方法制備三種供試品溶液，在“2.1色譜條件”下進(jìn)樣測(cè)定。

2 結(jié) 果

2.1 線性關(guān)系

得到維生素D2的線性回歸方程為：C＝0.0142A-0.0060（r=0.9999），說明使用高效液相色譜法對(duì)維生素D2含量進(jìn)行測(cè)量，在0.04423～1.091μg/mL的濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.2 精密度

得出三種濃度維生素D2對(duì)照品溶液的峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.95%、1.2%、2.1%，說明使用高效色相色譜法對(duì)維生素D2含量進(jìn)行測(cè)量具有良好的精密度。

2.3 重復(fù)性

得出峰面積標(biāo)準(zhǔn)偏差值為0.45%，說明使用高效色相色譜法對(duì)維生素D2含量進(jìn)行測(cè)量具有良好的重復(fù)性。

2.4 穩(wěn)定性

發(fā)現(xiàn)三種供試品在配置12h后出現(xiàn)降解物質(zhì)，影響到測(cè)量，而在8h內(nèi)均有良好的穩(wěn)定性。

2.5 樣品測(cè)定

鈣鎂D片中維生素D2含量為0.1331μg/mL，達(dá)到標(biāo)示量的102.21%；鈣佳鋅口服液中維生素D2含量為0.1331μg/mL，達(dá)到標(biāo)示量的102.21%；乳酸鈣口服液中維生素D2含量為0.1247μg/mL，達(dá)到標(biāo)示量的100.21%。

3 討 論

藥品中維生素D2的檢驗(yàn)一直為藥品檢驗(yàn)工作的難點(diǎn)，本文實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)三種供試品在配置12h后出現(xiàn)降解物質(zhì)，影響到測(cè)量，在8h內(nèi)有良好的穩(wěn)定性。所以使用高效液相色譜法對(duì)藥品中維生素D2進(jìn)行測(cè)定，盡量要現(xiàn)用現(xiàn)配，并且使用棕色容量瓶，避免光線對(duì)維生素D2的影響。綜上所述，使用高效液相色譜法對(duì)三種藥品中維生素D2含量的測(cè)定具有良好的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性，可用于含有維生素D2的藥品制劑質(zhì)量控制。

[1] 范世德,廖曉君,邱正霞,等.RP-HPLC法測(cè)定鈣佳鋅口服液中維生素D2含量[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2010,7(13):59-62.

[2] 仲宣惟,夏瑞,施婕.HPLC法測(cè)定保健食品中維生素D2、D3的含量[J].藥物分析雜志,2007,27(11):1773-1774.

[3] 宋金春,李韻秋,曾俊芬.HPLC法測(cè)定注射用12種復(fù)合維生素D2、維生素A與維生素E的含量[J].中國(guó)藥房,2007,18(31):2456-2457.

[4] 蘆潔,劉小葉,劉丹,等.HPLC法測(cè)定鈣鎂D片劑中維生素D2的含量[J].藥物分析雜志,2006,26(12):1723-1725.

[5] 賀微,于兵,高曄.HPLC法測(cè)定乳酸鈣口服液中維生素D2含量[J].黑龍江醫(yī)藥,2004,17(4):247-250.

R914

B

1671-8194（2013）11-0075-02