趙 樂韓 玲

（1 河南省南陽市中心醫(yī)院，河南 南陽 472000；2 河南省南陽市控制中心，河南 南陽 472000）

核酸原位雜交技術在細胞病理學的應用

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（1 河南省南陽市中心醫(yī)院，河南 南陽 472000；2 河南省南陽市控制中心，河南 南陽 472000）

核酸原位雜交技術；細胞病理學

雜交的技術原理是核酸堿基互補，指DNA互補鏈，DNA與RNA或RNA互補鏈間發(fā)生雜交。原位雜交是互補堿基序列形成氫鍵的過程。構成穩(wěn)定的復合體或雜交體。主要工具是標記的特定序列探針。目前應用的探針標記物多是非放射性核位素。探針種類主要有四類：雙鏈DNA，單鏈DNA，反義RNA和自動化合成的寡核苷酸探針。它們各有其本身特點。

原位雜交的雜交形式主要有三類：①DNA原位雜交。在細胞和組織水平上，多用于感染因子的檢測，如人乳頭狀瘤病毒（HPV）、乙型肝炎病毒（HBV）等。②熒光原位雜交，多用于細胞遺傳性疾病，在間期核和染色體水平上分析染色體異常如三體病、基因擴張、基因易位。③RNA原位雜交，主要用于RNA病毒和基因表達水平檢測，如腫瘤的某種生物標志物以及病原微生物基因表達的RNA，EB病毒編碼的小RNA。

在感染性疾病、細胞遺傳性疾病和腫瘤三大類疾病中，都有應用原位雜交技術的成功經(jīng)驗。

1 人類乳頭狀病毒

HPV是國際公認的第一類致癌物，特別被列為女性高發(fā)腫瘤宮頸癌的重要病因?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)HPV有200多種亞型，HPV可感染多種器官，其中30余亞型或更多與生殖道感染有關。從HPV于癌發(fā)生的相關性，可分為高危型和低危型。通?？梢圆捎肏PV廣譜探針原位雜交作為病原診斷的初篩。HPV原位雜交所采用的探針通常是雙鏈DNA，將HPV原位雜交檢測與液基細胞學結合起來可應用于宮頸癌篩查和預防。適用于臨床篩查HPV感染及對HPV進行基因分型。

2 乳腺癌Her2/neu（c-erbB_2）基因

采用原位雜交技術檢測乳腺Her2/neu（c-erbB_2）基因擴增是診斷細胞遺傳性疾病染色體結構畸變的一個例子。有Her2/neu基因擴增的乳腺癌患者預后差，與乳腺癌復發(fā)時間、總體生存高度相關。大量研究證明有Her2/neu基因擴增的乳腺癌，對人源性單克隆抗體曲妥珠/赫賽汀治療有良好的反應。

3 EB病毒

EB病毒除了作為感染源引起人類感染性疾病，如傳染性單核細胞增多癥，慢性活動性EB病毒感染等。更重要的是它與許多惡性腫瘤有關。在國際上也被列為第一類致癌物。常見的有Burkitt淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤，鼻咽癌以及胃腺癌等，另外也包括一些免疫缺陷相關的淋巴組織增生性疾病如器官移植后淋巴組織增生性疾病，HIV病毒感染相關淋巴瘤等。對上述疾病進行相關病原檢測，最佳選擇是采用DNA探針，與EB病毒編碼的小RNA進行原位雜交。其優(yōu)勢在于感染的細胞通常有106～107小RNA拷貝數(shù)，最容易被捕捉而獲得確切結果。在中國90%以上人存在有EB病毒的潛伏感染。因此在人體的淋巴結和扁桃體中發(fā)現(xiàn)這類潛伏感染細胞并無特殊診斷價值。檢測到疾病感染狀態(tài)細胞，還要注意分析感染的細胞類型，密切結合常規(guī)組織學和細胞學才能分清EBER陽性信號的診斷價值和意義。

R361+.3

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：1671-8194（2013）02-0377-02