張彩梅 黨生亮

（烏審旗疾病預(yù)防控制中心 內(nèi)蒙古自治區(qū)鄂爾多斯市烏審旗蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 鄂爾多斯017300）

淺議化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)檢測(cè)乙型肝炎表面抗原

張彩梅 黨生亮

（烏審旗疾病預(yù)防控制中心 內(nèi)蒙古自治區(qū)鄂爾多斯市烏審旗蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 鄂爾多斯017300）

化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)由于其高靈敏度和準(zhǔn)確度、無(wú)輻射及簡(jiǎn)便快速等眾多優(yōu)越性進(jìn)入人們的視野，被用來(lái)檢測(cè)乙型肝炎表面抗原。本文簡(jiǎn)要介紹了化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)系統(tǒng)的種類及其檢測(cè)乙型肝炎表面抗原基本原理、現(xiàn)狀和優(yōu)勢(shì)，最后對(duì)化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)系統(tǒng)在檢測(cè)乙型肝炎表面抗原方面的應(yīng)用進(jìn)行了展望。

化學(xué)發(fā)光法；檢測(cè)；乙型肝炎表面抗原

乙型肝炎是一種嚴(yán)重威脅中國(guó)乃至世界的傳染性疾病，亦是全球性的公共衛(wèi)生難題[1]。近年來(lái)，世界感染乙型肝炎人數(shù)和因乙型肝炎死亡人數(shù)與日俱增，正確及時(shí)地診斷乙型肝炎感染和加強(qiáng)對(duì)乙型肝炎表面抗原的檢出能力一直以來(lái)都是醫(yī)學(xué)界面臨的巨大挑戰(zhàn)，它們對(duì)乙型肝炎的預(yù)防、及早治療、治療過(guò)程監(jiān)控具有重要意義。化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)應(yīng)運(yùn)而生，其用于檢測(cè)乙型肝炎表面抗原具有準(zhǔn)確率和靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，被認(rèn)為是很有前途的一種檢測(cè)乙型肝炎表面抗原的方法，有望取代傳統(tǒng)的檢測(cè)方法成為免疫分析的主流檢測(cè)手段，有力保障廣大人民健康。

1 乙型肝炎表面抗原檢測(cè)的傳統(tǒng)手段

乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAG）為乙型肝炎病毒感染第一個(gè)出現(xiàn)的病原標(biāo)志，是最主要的診斷指標(biāo)之一，它的檢測(cè)為后來(lái)及早治療、降低輸血傳播乙型肝炎的潛在風(fēng)險(xiǎn)奠定基礎(chǔ)，因此選擇準(zhǔn)確率、特異度、靈敏度高但又要成本低的檢測(cè)方法至關(guān)重要。傳統(tǒng)的檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗原的方法主要有酶聯(lián)免疫吸附法、熒光免疫法、放射免疫法等。前者因方便快速、成本低成為國(guó)內(nèi)應(yīng)用較多的一種方法，單它有兩個(gè)致命的缺陷：首先，它只能簡(jiǎn)單定性不能定量，但定量對(duì)臨床藥物療效評(píng)價(jià)具有重要意義，不能定量對(duì)乙型肝炎的診斷和后續(xù)治療非常不利；其次，它靈敏度（只有10-8M）和重復(fù)性差，很容易因病毒感染的窗口期問(wèn)題、病毒變異和試驗(yàn)中其它各種不確定因素導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性等漏檢現(xiàn)象，加大乙型肝炎潛在傳染風(fēng)險(xiǎn)，給人們健康帶來(lái)威脅。因此，醫(yī)藥界極需要新型的靈敏度和準(zhǔn)確度都有改善的檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于乙型肝炎表面抗原的臨床篩查，這成為長(zhǎng)期困擾醫(yī)護(hù)人員的一道難題。

2 化學(xué)發(fā)光法簡(jiǎn)介

2.1 化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙型肝炎表面抗原基本原理

化學(xué)發(fā)光（CLIA）是化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生能量被分子吸收形成激發(fā)態(tài)分子，當(dāng)分子由激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)能量以可見(jiàn)光形態(tài)發(fā)出的一種化學(xué)現(xiàn)象?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)乙型肝炎表面微量抗原是將化學(xué)發(fā)光體系與免疫反應(yīng)相結(jié)合的一種新型免疫測(cè)定技術(shù)。

化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)乙型肝炎表面抗原的主要技術(shù)基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的發(fā)光劑標(biāo)記，常見(jiàn)的標(biāo)記物有三聯(lián)吡啶釘、吖啶酯、魯米諾及其衍生物等。首先，將保持免疫活性的抗原或抗體通過(guò)磁性復(fù)合物（如抗體-抗原-發(fā)光劑復(fù)合物）或者其它的方法固定在固相載體表面；然后，讓受檢標(biāo)本抗體或抗原與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)，產(chǎn)生能量，激發(fā)產(chǎn)生可見(jiàn)光，光強(qiáng)與受測(cè)抗原濃度成一定比例關(guān)系。例如電化學(xué)發(fā)光法[2]，將抗體用化學(xué)發(fā)光劑[Ru（bpy）3]2+標(biāo)記，在電子供體三丙胺（TPA）和外加電場(chǎng)的作用下使得和抗體形成復(fù)合物的[Ru（bpy）3]2+在激發(fā)態(tài)和基態(tài)間循環(huán)往復(fù)，不斷發(fā)射波長(zhǎng)620nm的光子，產(chǎn)生電化學(xué)發(fā)光，直接測(cè)量光的強(qiáng)度即光子的強(qiáng)度就可知乙型肝炎抗原濃度，高效穩(wěn)定且無(wú)輻射，對(duì)人體無(wú)害。

2.2 化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)種類

化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)用于乙型肝炎表面抗原檢測(cè)最先在1978年由Halman建立。經(jīng)過(guò)醫(yī)藥科學(xué)界20多年的研究而逐步完善，大大推動(dòng)了化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)系統(tǒng)的發(fā)展。我們現(xiàn)在臨床通常所說(shuō)的化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)可分四種類型，魯米諾衍生物ABEI標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)、酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)、吖啶酯衍生物標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)、電化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)，上述四種檢測(cè)方法的反應(yīng)類型均為夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法。

2.2.1 魯米諾衍生物標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)

魯米諾衍生物是最早被用來(lái)標(biāo)記抗原或抗體的試劑，其發(fā)射信號(hào)為持續(xù)時(shí)間很短的閃光，手工操作、難以控制且靈敏度低，因此很難得到實(shí)際臨床應(yīng)用。

2.2.2 酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)

酶（如辣根過(guò)氧化物酶）標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)是在魯米諾衍生物標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的，加入發(fā)光底物對(duì)-碘酚或?qū)?苯酚的魯米諾-H2O2液[3]，將閃光轉(zhuǎn)化為輝光，大大改善了靈敏度，快速高效，可半自動(dòng)開(kāi)放，但影響結(jié)果的因素太多，造成重復(fù)率和準(zhǔn)確度相對(duì)較低。

2.2.3 吖啶酯衍生物標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)

吖啶酯衍生物標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)的光信號(hào)為閃光，發(fā)光底物為NaOH-H2O2，方便快速，干擾及影響結(jié)果的因素少。近年來(lái)有人將此種化學(xué)發(fā)光技術(shù)與磁性微粒子分離技術(shù)相結(jié)合形成一種化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法[4]，以微米級(jí)的磁性顆粒做為固相載體，大大提高了靈敏度，同時(shí)簡(jiǎn)化了后處理程序。

2.2.4 電化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)

電化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)是新近發(fā)展起來(lái)，集電子發(fā)光技術(shù)、電分離技術(shù)、生物-化學(xué)技術(shù)為一體的化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)[5]，它一般用化學(xué)發(fā)光劑[Ru（bpy）3]2+作為標(biāo)記物，由電激發(fā)來(lái)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，光信號(hào)為電激發(fā)閃光。電激發(fā)增強(qiáng)了電信號(hào)，是目前干擾最少、最快速、靈敏度相對(duì)來(lái)說(shuō)最高的一種檢測(cè)乙型肝炎表面抗原的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法，但檢測(cè)成本較高。

3 化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙型肝炎表面抗原評(píng)價(jià)

3.1 化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙型肝炎表面抗原的優(yōu)勢(shì)

自從化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)問(wèn)世，其技術(shù)優(yōu)勢(shì)已被大量實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果所證實(shí)。總結(jié)起來(lái)，它具有以下幾個(gè)優(yōu)勢(shì)：①高靈敏度，靈敏度高達(dá)10-8M以上，大大降低了漏檢率，使疾病能夠被及早檢出，縮短窗口期，且降低了輸血傳播乙型肝炎的潛在風(fēng)險(xiǎn)；②可以定量，這是化學(xué)發(fā)光法十分重要的一個(gè)優(yōu)勢(shì)，定量可以使醫(yī)護(hù)人員對(duì)臨床藥物療效做出及時(shí)的評(píng)價(jià)，使隨時(shí)監(jiān)控病情成為可能；③無(wú)輻射，由于它檢測(cè)的是電子的濃度，因此對(duì)人體無(wú)放射性或毒性危害；④穩(wěn)定性好，其標(biāo)記物穩(wěn)定，反應(yīng)快，檢測(cè)時(shí)間較短；⑤重復(fù)性好，污染和人為因素帶來(lái)的誤差小，測(cè)試結(jié)果具有較高的可靠性。

3.2 化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙型肝炎表面抗原的現(xiàn)狀

近十年來(lái)，當(dāng)代生物技術(shù)的研究和應(yīng)用取得高速發(fā)展，各種化學(xué)發(fā)光法診斷系統(tǒng)相繼問(wèn)世，這一技術(shù)從稀有逐漸過(guò)渡到常規(guī)檢測(cè)手段，其中在歐美國(guó)家處于成熟期，被臨床普遍使用。

但目前國(guó)外提供的試劑盒價(jià)格高，鑒于檢測(cè)成本的問(wèn)題，我國(guó)對(duì)化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙型肝炎表面抗原這一技術(shù)的應(yīng)用僅限于少數(shù)大醫(yī)院，臨床應(yīng)用率不高，難以普及，并且大部分儀器都為進(jìn)口發(fā)光化學(xué)儀器，如Abbott公司的AXSYM、強(qiáng)生公司的Vitro ECi、羅氏公司的ELECSY，國(guó)內(nèi)關(guān)于化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)的儀器和試劑在測(cè)定乙型肝炎表面抗原的方面臨床應(yīng)用的可行性和適應(yīng)性較低。

4 展 望

化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)系統(tǒng)用于乙型肝炎表面抗原測(cè)定具有反應(yīng)快、檢測(cè)線性范圍寬且特異性強(qiáng)等其他檢測(cè)方法無(wú)可比擬的優(yōu)勢(shì)，給廣大乙型肝炎患者及潛在患者的預(yù)防和治療迎來(lái)了新的曙光，但由于成本和技術(shù)的限制在我國(guó)普及率不高。

我國(guó)應(yīng)加強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)系統(tǒng)精密儀器、相關(guān)試劑及其反應(yīng)機(jī)理的研制和開(kāi)發(fā)工作，提高儀器的自動(dòng)化檢測(cè)和精密度，提高試劑的靈敏度，減少漏檢、誤檢，提高國(guó)產(chǎn)化學(xué)發(fā)光儀和試劑的臨床應(yīng)用可行性和適應(yīng)性，打破國(guó)外大公司對(duì)試劑的壟斷，做好乙型肝炎的早發(fā)現(xiàn)，早診斷，早治療的工作，讓化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)系統(tǒng)的應(yīng)用為全世界人民的健康提供有力保障。

[1]Ly TD,Delmas AS,Marie P,et al.Sensitivities of Four New Commereial HePatitis B Virus Surfaee Antige(HBsAG) Assays in Deteetion of HBsAg Mutant Forms[J].J Clinical Microbiology, 2006,4(7):2321-2326.

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R512.6+2；R446.1

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：1671-8194（2013）06-0047-02