肖麗恒，呂任一，李 萍

(楚雄州質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督綜合檢測(cè)中心，云南 楚雄 675000)

隨著人民生活水平提高及食品工業(yè)快速發(fā)展，休閑食品的種類不斷增加。番茄是一種營(yíng)養(yǎng)豐富的食物，可進(jìn)行深加工制成果脯而有利于保存。為了增加番茄果脯的保存時(shí)間及口感，廠家常在番茄果脯中添加過(guò)量的防腐劑和甜味劑。苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鉀鹽由于對(duì)微生物有很好的抑制作用而且價(jià)格便宜，是比較常用的防腐劑。安賽蜜、糖精鈉的甜度是蔗糖的很多倍，相對(duì)于蔗糖來(lái)說(shuō)，甜度高、用量少，成本低，成為番茄果脯制作中普遍使用的甜味劑，但安賽蜜、糖精鈉過(guò)量攝入會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生危害。

防腐劑和甜味劑的測(cè)定方法主要有紫外光度法、色譜法［1］。其中，高效液相色譜法在按國(guó)標(biāo)推薦的色譜條件應(yīng)用時(shí)，色譜分離的時(shí)間太長(zhǎng)［2，6］，不利于常規(guī)的實(shí)驗(yàn)室快速檢測(cè)分析。別外，國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法在測(cè)定苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的高效液相色譜法中，檢測(cè)樣品只是液體的樣品，而對(duì)其它樣品的處理方法沒(méi)有提及［2］。

儀器分析的樣品前處理非常關(guān)鍵，番茄果脯中果膠和蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)會(huì)使樣品溶液難過(guò)濾，樣品的提取效率也不高。在樣品前處理中，我們采用超聲萃取并加入乙酸鋅和亞鐵氰化鉀溶液的方法，能較好的沉淀番茄果脯中的果膠和蛋白質(zhì)等，有過(guò)濾速度快、提取效率提高的優(yōu)點(diǎn)，從而優(yōu)化了樣品前處理過(guò)程。在確保準(zhǔn)確度的同時(shí)，加快了工作速度，提高了工作效率。并擴(kuò)展了國(guó)標(biāo)法樣品測(cè)定范圍。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜系統(tǒng)LC－20A(日本島津公司)，配套二極管陣列檢測(cè)器SPD－M20A及色譜管理軟件LCsolution;輸液泵LC－20AB;自動(dòng)進(jìn)樣器SIL－20AC;色譜柱柱溫箱CTO－20AC;去離子水純化系統(tǒng)EasyDI8(美國(guó)Millipore公司);漩渦混合器QL－861;超聲波清洗器AS20500AT分析天平:CPA225D型，精度為0.01mg，德國(guó)賽多利斯;料理機(jī):九陽(yáng)股份有限公司。

甲醇為色譜純，乙酸銨、乙酸鋅、亞鐵氰化鉀、氫氧化鈉等試劑均為分析純。實(shí)驗(yàn)用水為超純水。安賽蜜、苯甲酸、糖精鈉、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)品:≥99%，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。

氫氧化鈉溶液:(1.0mol/L):稱取10g氫氧化鈉，加水溶解定容至250mL。

乙酸銨溶液 (0.02mol/L):稱取1.54g乙酸銨，加水至1000mL，溶解，使用時(shí)用抽濾器過(guò)0.45μm濾膜，并超聲排氣。

亞鐵氰化鉀溶液:精確稱取53.0g亞鐵氰化鉀，用水溶解并稀釋至500mL。

乙酸鋅溶液:精確稱取110.0g乙酸鋅，加水溶解，并稀釋至500mL。

1.2 色譜條件

色譜柱:ODS—Cl8型 (250mm×4.6mm，5μm);檢測(cè)波長(zhǎng):230nm;流速:1.0mL/min;進(jìn)樣量:10μL;流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為乙酸銨緩沖液，混合比為15∶85;柱溫:40℃。

1.3 溶液配制

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)貯備液的配制

用分析天平準(zhǔn)確稱取安賽蜜、苯甲酸、糖精鈉、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)品各50mg，置于50mL容量瓶中，加適量的水溶解并加水稀釋至刻度，搖勻。配制成1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液

用精密移液器取120uL、250uL、500uL、1000uL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液至10mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶液定容至刻度，得12、25、50、100ug/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)使用液。

1.4 樣品準(zhǔn)備和處理

準(zhǔn)確稱取處理好的樣品5g(精確至0.01g)，置于50mL比色管中，加入1mon/L的氫氧化鈉溶液1mL，加入適量的去離子水，漩渦混合1min，水浴超聲波輔助提取10min，取出，加入2mL乙酸鋅和2mL亞鐵氰化鉀溶液混勻，調(diào)節(jié)PH為中性，加去離子水定容到50ml，用慢速濾紙過(guò)濾，濾液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾作為試液，供高效液相色譜儀測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理

番茄果脯提取采用三種方法，方法一:加入1mon/L的氫氧化鈉溶液1mL調(diào)節(jié)PH值為中性，加水溶解，混勻震蕩提取;方法二:在方法一的基礎(chǔ)上采用超聲萃取;方法三:在方法二超聲萃取完之后，加入2mL乙酸鋅和2mL亞鐵氰化鉀溶液，混勻。提取液用濾紙過(guò)濾，再用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾后作為樣液;方法一的提取時(shí)間較長(zhǎng)，濾紙過(guò)濾的時(shí)間也較長(zhǎng)，方法二采用超聲萃取，萃取較快，濾紙過(guò)濾的時(shí)間還是比較長(zhǎng);原因是番茄果脯中含有一定量的蛋白質(zhì)和一定量的膠體物質(zhì)等，番茄果脯在提取時(shí)膠體溶液很難過(guò)濾。當(dāng)萃取過(guò)程中加入2ml亞鐵氰化鉀溶液和2ml乙酸鋅溶液，能夠充分沉淀番茄果脯中的蛋白質(zhì)和大分子物質(zhì)［7］，破壞果膠物質(zhì)的性質(zhì)，沉淀后過(guò)濾效果非常好。此方法對(duì)樣品處理快，檢測(cè)準(zhǔn)確度高。

2.2 測(cè)定方法的選擇

在1.2色譜條件下，安賽蜜、苯甲酸、糖精鈉、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖如圖1所示，安賽蜜、苯甲酸、糖精鈉、山梨酸保留時(shí)間分別為5.705、8.206、9.340、11.271min，色譜分離達(dá)到較好的分離，表明實(shí)驗(yàn)結(jié)果良好。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜圖

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限、精密度和回收試驗(yàn)

在儀器檢測(cè)條件調(diào)節(jié)好的狀態(tài)下，自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)12、25、50、100mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液10uL，得到不同濃度標(biāo)樣的峰面積，以峰面積和質(zhì)量濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并以基線噪聲10倍峰面積作為樣品的定量檢出限 (RSN=10)，在不含防腐劑和人工合成甜味劑的番茄果脯樣品中進(jìn)行空白和加標(biāo)回收試驗(yàn)。線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限、回收率和精密度見(jiàn)表1。

表1 樣品添加回收、精密度、回歸曲線和檢出限的基本參數(shù)

3 結(jié)論

通過(guò)試驗(yàn)，在對(duì)番茄果脯中安賽蜜、苯甲酸、糖精鈉、山梨酸測(cè)定的樣品前處理過(guò)程中，采用用超聲提取并加入乙酸鋅和亞鐵氰化鉀的方法，有利于在前處理過(guò)濾時(shí)除去蛋白質(zhì)、膠體等大分子物質(zhì)，節(jié)省樣品前處理的時(shí)間。擴(kuò)展了國(guó)標(biāo)法高效液相色譜測(cè)定苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的樣品測(cè)定范圍，便于大批量的樣品檢測(cè)。

在優(yōu)化樣品前處理的同時(shí)對(duì)色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化，使檢測(cè)樣品的時(shí)間適當(dāng)，測(cè)試結(jié)果穩(wěn)定且精確度較高，能夠滿足實(shí)際檢測(cè)工作中的檢測(cè)要求，在實(shí)際分析檢測(cè)中具有較高參考價(jià)值。

［1］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.GB/T 5009.28—2003食品中糖精鈉的測(cè)定 ［S］.北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

［2］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.GB/T 5009.29—2003食品中山梨酸、苯甲酸的測(cè)定［S］.北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

［3］翟永信.現(xiàn)代食品分析手冊(cè) ［M］.北京:北京大學(xué)出版社，1988:379—393.

［4］仲岳桐.高油脂食品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉樣品前處理的方法改進(jìn) ［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2001，11(04):471.

［5］呂建民，盧建華.HPLC法測(cè)定牛乳及蜜餞中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的試樣處理方法 ［J］.中國(guó)公共衛(wèi)生，2002，18(05):612.

［6］宗萬(wàn)里，養(yǎng)元萍，魯剛.高效液相色譜法測(cè)定山楂制品中的苯甲酸、山梨酸和糖精鈉 ［J］.糧油食品科技，2011，11(06);35—36.

［7］陳俊，周路明.亞鐵氰化鉀－乙酸鋅在HPLC測(cè)定醬油中防腐劑的應(yīng)用 ［J］.中國(guó)調(diào)味品，2007(10):72—73.