摘要：目的：建立胡氏濕疹清涼噴霧劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法對(duì)方中梔子、大血藤、牡丹皮進(jìn)行鑒別；采用高效液相色譜法測(cè)定了胡氏濕疹清涼噴霧劑中梔子苷的含量，采用DiamonsilTM（鉆石） C18柱（5μm，4.6mm×250mm）；流動(dòng)相：乙腈-水（15∶85）；檢測(cè)波長(zhǎng)：238nm；流速：1mL/min；柱溫：25℃。結(jié)果：薄層色譜中均能檢出梔子、大血藤、牡丹皮；梔子苷在6.4～57.6μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（r=0.9999）；平均加樣回收率為99.42%，RSD為1.57%（n=9）。結(jié)論：本方法快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于胡氏濕疹清涼噴霧劑的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：胡氏濕疹清涼噴霧劑；薄層色譜；高效液相色譜；梔子苷

中圖分類(lèi)號(hào)：G-424.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：（2013）03-0030-05

Study of Quality Standard for Hushii’s Cool-Eczema Nebula of Guizhouu Miao-Minority Medicinee

ZHENG Shan（GuiYang Nursing Vocational College GuiZhou GuiYang 550081）

Abstractt：Objective：To establish quality standard for Hushi’s Cool-Eczema Nebula. Methods：Fructus Gardeniae，Radix Sargentodoxa cuneata and Cortext Paeonia suffruticosa were identified by TLC，and the content of geniposide was determined by HPLC. DiamonsilTM C18 column（5μm，4.6mm×250mm）was used. The mobile phase was acetonitrile-water（15：85）. The detective wavelength was 238nm. The flow rate was 1ml/min and column temperature was 25℃. Results：Fructus Gardeniae，Radix Sargentodoxa cuneata and Cortext Paeonia suffruticosa could be identified by TLC. Geniposide showed a good linearity in the range of 6.4～ 57.6μg/mL，and r=0.9999.The average recovery was 99.42%，and RSD was 1.57%（n=9）. Conclusion：The method is quick，simple，accurate and reproducible，it can be used for the quality control of Hushi’s Cool-Eczema Nebula.

Key wordss：Hushi’s Cool-Eczema Nebula； TLC； HPLC； Geniposide

胡氏濕疹清涼噴霧劑是由梔子、大血藤、牡丹皮等6味中藥組成的噴霧劑，具有胡氏濕疹清涼噴霧劑具有清熱解毒、敗毒散癰、活血消腫等功效，臨床上主于治療濕疹、神經(jīng)性皮炎、蕁麻疹、牛皮癬等疾病。胡氏濕疹清涼噴霧劑雖然已經(jīng)應(yīng)用于臨床，但缺乏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，不利于胡氏濕疹清涼噴霧劑的應(yīng)用與推廣。為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證療效，本文應(yīng)用薄層層析法對(duì)方中梔子、大血藤和牡丹皮進(jìn)行鑒別研究，并以方中君藥梔子中的梔子苷含量為指標(biāo)，采用高效液相色譜法測(cè)定了胡氏濕疹清涼噴霧劑中梔子苷的含量，建立了本品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1儀器與試藥

1.1儀器

美國(guó)安捷倫Agilent1100高效液相色譜儀；DAD檢測(cè)器，Agilent1100色譜工作站；XS205型電子天平（瑞士梅特公司）；HS10260D型超聲波清洗器（70KW，40KHz）（天津奧泰公司）。

1.2試藥

氏濕疹清涼噴霧劑（貴州貴定胡三帖藥械有限責(zé)任公司提供，批號(hào)：20060612、20060716、20060811）；梔子苷對(duì)照品、梔子對(duì)照藥材、大血藤對(duì)照藥材、丹皮酚對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110756-200410供含量測(cè)定用、0986-200002、121353-200401、0708-9704供含量測(cè)定用）；.硅膠G薄層板（青島海洋化工廠）；水為超純水，甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1鑒別實(shí)驗(yàn)

2.1.1梔子的薄層色譜鑒別〔1〕取本品10片，擠出藥液吸取本品10mL，揮干溶劑，加50%甲醇20mL，超聲40min，濾過(guò)，濾液濃縮至約1mL，作為供試品溶液。取梔子苷對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含4mg的溶液作為對(duì)照品溶液。取梔子對(duì)照藥材粉末1g，同法法制成對(duì)照藥材溶液。按處方比例去除梔子藥材，按本品的制備工藝和供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述4種溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶5∶1∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，展距14.7cm。取出，晾干，噴以50%的硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同的紫色斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2.1.2大血藤的薄層色譜鑒別〔2〕取本品10片，擠出藥液吸取本品20mL，揮干溶劑，加甲醇50mL，超聲30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?%氫氧化鈉溶液10mL使溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，用乙醚振蕩提取3次，每次10mL，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。取大血藤對(duì)照藥材粉末5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。按處方比例去除大血藤藥材，按胡氏濕疹清涼噴霧劑的制備工藝和供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述3種溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸（8∶1∶0.8）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，展距13.9cm。取出，晾干，噴以2%的三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同的紫紅色斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2.1.3牡丹皮的薄層色譜鑒別〔3〕取本品10片，擠出藥液吸取本品10mL，揮干溶劑，加乙醚10mL，密塞，振搖10min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)颖?mL使溶解，作為供試品溶液。另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每1mL含5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方比例去除牡丹皮藥材，按胡氏濕疹清涼噴霧劑的制備工藝和供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯（3∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，展距14.1cm。取出，晾干，噴以5%的三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同的藍(lán)褐色斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2.2含量測(cè)定

2.2.1色譜條件Dikma DiamonsilTM（鉆石）C18柱（5μm，4.6mm×250mm）；流動(dòng)相：乙腈-水（15∶85）；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：238nm；流速：1mL/min；進(jìn)樣量：10μL；理論塔板數(shù)以梔子苷峰面積計(jì)算應(yīng)大于3000。

2.2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)梔子苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含梔子苷0.32mg的溶液，即得。

2.2.3供試品溶液的制備取本品10片，擠出藥液精密吸取10mL，置具塞錐形瓶中，揮干溶劑，精密加入甲醇25mL，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率70W，頻率40KHZ）20分鐘，取出，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液10mL，置25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。按處方中藥味的比例，自制不含梔子的處方按其工藝制成陰性樣品，同法制備，即得。

2.2.4系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)分別吸取梔子苷對(duì)照品溶液、供試品溶液及缺梔子的陰性對(duì)照液注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1）從圖中可見(jiàn)，在本試驗(yàn)條件下，梔子苷對(duì)照品的出峰時(shí)間為16.01分鐘，梔子苷峰與相近的其他成分峰分離完全（分離度大于1.5），陰性樣品無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.2.5線性關(guān)系考察取對(duì)照品溶液分別配制成含梔子苷6.4、19.2、32、44.8、57.6μg/mL的溶液；進(jìn)樣10μL，，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品量（C）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得線性方繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=43.113C-15.06，r=0.9999。結(jié)果表明，梔子苷在0.064～0.576μg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.2.6精密度試驗(yàn)取在線性范圍的梔子苷對(duì)照品溶液，按“2.2.1測(cè)定法”項(xiàng)下方法重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果梔子苷峰面積RSD為0.68%，說(shuō)明本法精密度良好。

2.2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批號(hào)樣品按“2.2.3供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按“2.2.1測(cè)定法”項(xiàng)下條件分別在制備后0，2，4，6，8，10h測(cè)定一次峰面積。結(jié)果梔子苷峰面積RSD為1.37%，說(shuō)明供試品溶液在10小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)樣品6份，按“2.2.3供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，并按“2.2.1測(cè)定法”項(xiàng)下條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算梔子苷的含量。結(jié)果供試品溶液中梔子苷的平均含量為0.2018mg/mL，RSD為1.53%，說(shuō)明本法重復(fù)性良好。2.2.9加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的同一批號(hào)樣品9份，精密量取本品5mL，分別加入適量的梔子苷對(duì)照品0.860mg、1.032mg、1.204mg，按“2.2.3供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，并按“2.2.1色譜條件”項(xiàng)下的條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2.10樣品的含量測(cè)定按“2.2.3供試品溶液的制備”項(xiàng)下的制備方法分別處理10批樣品，按“2.2.1測(cè)定法”項(xiàng)下條件進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2。

根據(jù)10批樣品的含量測(cè)定結(jié)果；暫定本品每毫升含梔子以梔子苷計(jì)不得少于0.18mg。

3討論

3.1本實(shí)驗(yàn)含量測(cè)定供試品溶液的制備中比較了回流提取法、超聲提取法、索氏提取法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，回流提取法提取出的成分復(fù)雜，雜質(zhì)干擾多，索氏提取法操作繁瑣、費(fèi)時(shí)、超聲提取法操作簡(jiǎn)便、雜質(zhì)干擾少，省時(shí)且提取率高，所以選擇超聲提取法進(jìn)行提取〔4〕。

3.2在色譜柱的選擇中，主要考察了依利特Hypersil ODS色譜柱（4.6mm×150mm，5μm），Diamonsil C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）及Shimadzu C18色譜柱（150mm×4.6mm，5μm），在相同色譜條件下測(cè)試，結(jié)果顯示，Diamonsil C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）的分離最好。

3.3本實(shí)驗(yàn)以乙腈-水（15∶85），甲醇-1.15﹪冰醋酸（11∶89），甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（15∶85∶1∶0.3）為流動(dòng)相，分別考察了色譜的分離情況，結(jié)果表明以乙腈-水（15∶85）為流動(dòng)相時(shí)，梔子苷色譜峰出峰時(shí)間短，分離效果最佳。

3.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用TLC法可檢出胡氏濕疹清涼噴霧劑中梔子、大血藤、牡丹皮，方法簡(jiǎn)便、陰性樣品無(wú)干擾，專(zhuān)屬性強(qiáng)，可作為本品的定性鑒別方法。采用HPLC法測(cè)定胡氏濕疹清涼噴霧劑中梔子苷的含量，方法簡(jiǎn)便，重復(fù)性、穩(wěn)定性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為本品的含量控制方法。

參考文獻(xiàn)

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