摘 要：目的：建立青葉膽片中齊墩果酸的含量測(cè)定方法。方法：采用高效液相色譜（HPLC）法，Sapphire C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.2%冰醋酸溶液（85∶15）；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；柱溫：30℃。結(jié)果：齊墩果酸進(jìn)樣量線性范圍為46～230 ng，y=5487x+39280，R2=0.9991，平均加樣回收率為100.00%，RSD為1.24%（n=6）。結(jié)論：HPLC法簡(jiǎn)單可行、結(jié)果可靠，可用于定量控制青葉膽片的質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：青葉膽片 齊墩果酸 高效液相色譜法

中圖分類號(hào)：R284 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2013）01（c）-0244-01

青葉膽片收載于中國(guó)藥典2010版一部中，由為青葉膽經(jīng)加工制成的片，主治清肝利膽，清熱利濕。用于黃疸尿赤，熱淋澀痛。該標(biāo)準(zhǔn)采用薄層色譜法只對(duì)青葉膽片中的齊墩果酸進(jìn)行了定性鑒別。本文建立了高效液相色譜法的外標(biāo)法對(duì)青葉膽片中齊墩果酸進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果表明本文方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可靠，可作為該制劑的含量測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

日本島津全自動(dòng)高效液相色譜儀，型號(hào)：LC-20AT，配備LC工作站；UV—2600型紫外分光光度計(jì)。齊墩果酸對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110709-200505，供含量測(cè)定用）；青葉膽片（云南白藥集團(tuán)麗江藥業(yè)有限公司，產(chǎn)品批號(hào)為20120901、20120906、20120907）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Sapphire C18柱（200 mm×4.6 mm，5 mm）；流動(dòng)相：甲醇-0.2%冰醋酸溶液（85∶15）；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。

2.2 溶液制備

對(duì)照品溶液的制備：取齊墩果酸對(duì)照品約10 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。

供試品溶液的制備：取重量差異項(xiàng)下的樣品，研細(xì)，細(xì)粉末約3.5 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密量取100 mL甲醇，加入錐形瓶中，稱定重量。加熱回流30 min，放冷，稱定重量，以甲醇補(bǔ)充失去的重量，搖勻，濾過，取濾液作為供試品溶液。

陰性對(duì)照溶液的制備：按青葉膽片處方比例制成不含青葉膽的陰性對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 陰性干擾試驗(yàn)

取供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照品溶液，按擬訂的色譜條件測(cè)定。供試品溶液與對(duì)照品溶液色譜圖中具有相同保留時(shí)間的色譜峰，而陰性無(wú)干擾。

2.3.2 線性關(guān)系考察

精密稱取齊墩果酸對(duì)照品11.50 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，精密吸取對(duì)照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，分別置25 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為系列對(duì)照品溶液，分別吸取10 mL，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以進(jìn)樣量（ng）為橫坐標(biāo)、峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（表1）

得回歸方程y=5487x+39280，R2=0.9991。結(jié)果表明齊墩果酸進(jìn)樣量線性范圍是46～230 ng。

2.3.3 精密度試驗(yàn)

取齊墩果酸對(duì)照品約10 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液10 mL，連續(xù)進(jìn)樣6次，依法測(cè)定。結(jié)果的RSD=0.44%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，在放置0，2，4，6，8 h時(shí)分別進(jìn)樣測(cè)定。（表2）

結(jié)果含量的RSD=1.27%（n=5），表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別稱取同批號(hào)20120901重量差異項(xiàng)下樣品6份，研細(xì)，細(xì)粉末約3.5 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密量取100 ml甲醇，加入錐形瓶中，稱定重量。加熱回流30 min，放冷，稱定重量，以甲醇補(bǔ)充失去的重量，搖勻，濾過，取濾液作為供試品溶液。按供試品溶液制備方法制備溶液，依法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果含量的RSD=1.21%（n=6），表明方法重現(xiàn)性良好。

2.3.6 加樣回收試驗(yàn)

在已知含量的樣品粉末中，加入一定量的齊墩果酸對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測(cè)定并計(jì)算回收率。由結(jié)果可見，回收率在95%～105%之間，RSD值為1.24%。測(cè)定方法回收率良好。

2.4 樣品含量測(cè)定（表3）

3 討論

取齊墩果酸對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶液溶解，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果齊墩果酸在210 nm處有最大吸收，故選210 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

在試驗(yàn)過程中，曾采用乙腈-水（20∶80）、甲醇-0.3%磷酸酸溶液（80∶20）等多種流動(dòng)相，結(jié)果色譜峰分離效果均不理想而未被采用。文中選用的流動(dòng)相甲醇-0.2%冰醋酸溶液（85∶15）分離效果較好，且保留時(shí)間較短。實(shí)驗(yàn)中還考察了不同柱溫（10、25、35、40℃）對(duì)色譜分離效果的影響，結(jié)果各柱溫對(duì)分離效果、保留時(shí)間的影響有明顯區(qū)別，柱溫為30℃分離效果好。因此確定以柱溫為30℃。

HPLC法簡(jiǎn)單可行、結(jié)果可靠，可用于定量控制青葉膽片的質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

[1]中華人民共和國(guó)藥典[M].化學(xué)工業(yè)出版社，2010，一部.