摘要：以紅金銀花（Lonicera japonica var. chinensis）頂芽、當年生幼莖和葉片為試驗材料，利用仿自然氣候的培養(yǎng)條件，采用L9（34）正交試驗設(shè)計，考察了外植體類型和培養(yǎng)基中添加植物生長調(diào)節(jié)劑的濃度對愈傷組織誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明，外植體類型對紅金銀花組織培養(yǎng)的污染率及愈傷組織的誘導(dǎo)率均有影響，以頂芽為外植體時污染率低，愈傷組織誘導(dǎo)率高，為最佳外植體。優(yōu)化后的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中KT、6—BA、α—NAA濃度分別為1.5、1.5、0.5 mg/L。

關(guān)鍵詞：紅金銀花（Lonicera japonica var. chinensis）；外植體類型；植物生長調(diào)節(jié)劑；愈傷組織；正交試驗

中圖分類號：S685.99；S339.4+1 文獻標識碼：A 文章編號：0439—8114（2012）19—4391—02

金銀花（Lonicera japonica Thund.）又名忍冬，是忍冬科忍冬屬多年生半常綠藤本植物，是一種珍貴的觀賞樹種和綠化材料，也是臨床常用中草藥，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱之功效[1]。紅金銀花（L. japonica var. chinensis）為忍冬科忍冬屬木本植物，是金銀花的野生變種。其枝、葉、莖淡紫色，葉久寒而不落，花蕾紅色，香味濃郁，且生長快、適應(yīng)性強、耐旱、耐澇、耐寒、耐瘠薄，是集藥用、觀賞、水土保持于一體的優(yōu)良品種[2]。目前，生產(chǎn)上金銀花和紅金銀花的主要繁殖方式是扦插，也可用種子繁殖，關(guān)于金銀花的組織快繁已有少量報道[3—5]，而紅金銀花相關(guān)方面的研究則較少[6，7]。為加快紅金銀花的繁育，探討了外植體類型和植物生長調(diào)節(jié)劑濃度對紅金銀花愈傷組織誘導(dǎo)的影響，旨在優(yōu)化紅金銀花的組培快繁技術(shù)，為紅金銀花工廠化育苗和規(guī)模化栽培提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料

紅金銀花當年生幼嫩枝條采自河南省封丘縣金銀花基地。

1.2 實驗方法

將取回的紅金銀花枝條置于水槽中，用軟毛刷刷洗表面塵土，無菌水反復(fù)沖洗干凈，剪取頂芽部位，保留幼莖和葉片。放入清洗液中浸泡15～20 min，無菌水沖洗，在無菌室用紫外燈照射20 min后，再用體積分數(shù)75%的乙醇浸泡30 s，2 g/L的升汞溶液消毒3～5 min，最后用無菌水沖洗5～8次，用無菌紗布吸干水分，備用。

頂芽部位保留1.0 cm長左右，幼莖切成1.0～1.5 cm長且?guī)в幸秆康男《?，葉片切成0.5 cm×0.5 cm的小塊，接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基（MS+30 g/L蔗糖+8 g/L瓊脂粉+3 g/L活性碳，pH 6.0），每瓶接種一種外植體，操作均在超凈工作臺上進行。在人工智能氣候箱中仿自然條件培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光照度1 500～2 000 lx、光照時間12～14 h/d、溫度23～26 ℃。接種培養(yǎng)30 d后觀察記錄外植體的污染率、死亡率和愈傷組織的誘導(dǎo)率。

設(shè)計L9（34）正交試驗，考察培養(yǎng)基中的KT、6—BA和α—NAA濃度以及外植體類型4個因素對愈傷組織誘導(dǎo)率的影響，因素與水平見表1，每個處理10瓶，重復(fù)3次。

2 結(jié)果與分析

頂芽在接種后3 d即可發(fā)現(xiàn)切口處有膨大現(xiàn)象，6 d后所有頂芽基部切口均膨大，并開始出現(xiàn)愈傷組織，結(jié)構(gòu)緊密、質(zhì)地青翠，呈淡綠色半透明狀。葉片切口處膨大現(xiàn)象最早出現(xiàn)在4 d后，8 d后所有葉片切口處均有膨大現(xiàn)象，10 d后有顆粒狀愈傷組織出現(xiàn)，愈傷組織以深綠色和淡黃色為主，深綠色的愈傷組織結(jié)構(gòu)緊密、質(zhì)地較硬、呈不透明狀；淡黃色的愈傷組織結(jié)構(gòu)松散、質(zhì)地松軟、呈透明狀。而幼莖切口處膨大現(xiàn)象最早出現(xiàn)在6 d后，10 d后所有切口處均有膨大現(xiàn)象，12 d后有愈傷組織出現(xiàn)，以淡黃色為主，質(zhì)地較硬，一般呈不透明狀。

接種培養(yǎng)30 d后各處理外植體污染率和愈傷組織誘導(dǎo)率結(jié)果見表2。由極差分析可知，4因素中外植體類型對愈傷組織的誘導(dǎo)率和外植體的污染率影響最大。單獨分析外植體類型對愈傷組織誘導(dǎo)的影響見表3，可以看出，污染率和死亡率均以幼莖最高，其次是葉片，頂芽最低，這可能是由于幼莖木質(zhì)化程度相對較高，而葉片與空氣接觸的時間較長，且組織分化程度較高，被空氣中的微生物浸染的機率明顯高于頂芽。同時，由于葉片組織柔軟，用消毒劑消毒時易破壞葉片組織，造成污染和死亡。3種類型的外植體中愈傷組織的誘導(dǎo)率以頂芽最高，達92.92%，其次是葉片，為87.39%（表3）。

3種植物生長調(diào)節(jié)劑中，對愈傷組織誘導(dǎo)影響最大的是KT濃度，其次是α—NAA濃度，6—BAA濃度的影響最小。最佳的培養(yǎng)條件組合為A2B3C3D1，即以頂芽為外植體，KT、6—BA和α—NAA的濃度分別為1.5、1.5、0.5 mg/L。

3 小結(jié)與討論

試驗表明，外植體類型對紅金銀花愈傷組織的啟動和形成有較大影響，頂芽啟動愈傷組織時間短、生長速度快，成活率最高，為最佳外植體。不同植物生長調(diào)節(jié)劑組合對紅金銀花愈傷組織誘導(dǎo)和形成的影響不同，誘導(dǎo)率最高的植物生長調(diào)節(jié)劑組合為1.5 mg/L KT+1.5 mg/L 6—BA+0.5 mg/L α—NAA。

目前，紅金銀花組織培養(yǎng)的研究較少，尚未規(guī)?；瘧?yīng)用于生產(chǎn)，主要原因是組培苗移栽成活率較低，育苗成本偏高。如何進一步提高繁殖系數(shù)、誘導(dǎo)生根效率和試管苗的移栽成活率，還有待于進一步深入研究。

參考文獻：

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[2] 靳維榮，李廣華，孫 強，等.自然誘變品種紅金銀花中木犀草苷含量初探[J]. 現(xiàn)代中藥研究與實踐，2011，25（5）：22—24.

[3] 李永興，張麗云.金銀花灰氈毛忍冬組培快繁技術(shù)研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2010（12）：101—102，106.

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[6] 王文靜，張寶獻，王 鵬.紅金銀花不同外植體組織培養(yǎng)直接成苗培養(yǎng)基篩選[J].北方園藝，2010（13）：180—182.

[7] 趙賢慧.紅金銀花組織培養(yǎng)試驗研究[J].北方園藝，2009（9）：71—73.